抗草鱼出血病病毒转基因稀有鮈鲫的初步研究

Abstract

研究采用草鱼H1基因启动子,以草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白（eGFP）为报告基因,构建了3个小发卡RNA（shRNA）表达载体pH1siGCRV（x）-CMVeGFP。CIK细胞感染实验表明,pH1siGCRV2-CMVeGFP具有较高的病毒抑制作用。通过显微注射将pH1siGCRV2-CMVeGFP导入稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）受精卵,获得转基因稀有鮈鲫P0代群体。转基因稀有鮈鲫攻毒实验显示,转基因稀有鮈鲫死亡率为30%,抗草鱼出血病能力显著提高。进一步的实时荧光定量PCR检测证实,转基因稀有鮈鲫脾脏、后肠和肝脏中GCRV的含量显著低于对照鱼,并随着时间的延续逐渐减少,转基因稀有鮈鲫体内GCRV的复制受到有效抑制。研究为抗草鱼出血病转基因鱼育种奠定重要基础