斜带石斑鱼生长催乳素基因全长cDNA的克隆、表达及其免疫荧光分析

Abstract

我们从斜带石斑鱼垂体的SMART cDNA质粒文库中筛选到生长催乳素基因(so-matolactin，SL)的全长cDNA片段，其编码区为1644bp，编码231个氨基酸，其中N-端的24个氨基酸肽段为信号肽。运用RT-PCR技术考察了其在石斑鱼不同组织中的mRNA的转录水平，结果表明，该基因在垂体中大量转录，在其他组织中几乎检测不到转录本的存在。选取基因开放阅读框的核苷酸序列插入pGEX-KG载体进行原核表达，在大肠杆菌中表达的融合蛋白的分子量约为50kDa，并以表达的产物为抗原免疫家兔制备了多克隆抗体。采用冰冻切片和FITC标记的荧光染色方法将SL基因初步定位于脑垂体中部，沿着神经组织边缘分布。本研究为深入研究石斑鱼的生长激素／催乳激素家族的进化关系及SL基因的功能奠定了基础