Efeito de três FLA2s, (BaTX-I, BaTX-II e BaFLA2), isoladas do veneno da serpente Bothrops atrox, sobre a funcionalidade de macrófagos J774A.1 em cultura
Dissertação apresentada ao
programa de Pós-graduação em
Biologia Experimental da
Universidade Federal de
Rondônia, para obtenção do
título de Mestre.As fosfolipases A2 (FLA2) são enzimas que catalisam a hidrólise da
ligação acil-éster de fosfolipídios de membranas celulares na posição sn-2,
liberando ácidos graxos e lisofosfolipídios. Os produtos desta reação podem,
subsequentemente, serem utilizados para a síntese de eicosanóides com
funções importantes em reações inflamatórias. No presente estudo
investigamos os efeitos in vitro de duas miotoxinas básicas, BaTX-I, uma
Asp-49 cataliticamente ativa e BaTX-II, uma Lys-49 homóloga inativa, e de
uma miotoxina ácida, BaFLA2, também uma Asp-49 ativa cataliticamente,
isoladas do veneno da serpente Bothrops atrox, sobre a ativação de
macrófagos J774 A.1. Em concentrações não citotóxicas, as três toxinas não
afetaram a capacidade de adesão e descolamento dos macrófagos. Apenas a
BaTX-II, enzimaticamente inativa, aumentou a fagocitose mediada pelo
receptor de complemento. Entretanto, as três toxinas, BaTX-I, BaTX-II e
BaFLA2, induziram aumento na produção de ânion superóxido em
macrófagos. Somente a BaTX-II aumentou o volume lisossomal dos
macrófagos após 15 minutos de incubação. Aos 30 minutos, as três
fosfolipases aumentaram este parâmetro, o que não foi observado no período
de 60 minutos. Além disso, as três miotoxinas, BaTX-I, BaTX-II e BaFLA2,
induziram a formação de corpúsculos lipídicos em macrófagos submetidos e
não submetidos á fagocitose. Este resultado pode sugerir a função dos
corpúsculos lipídicos como um reservatório de mediadores inflamatórios.
Ainda, as toxinas BaTX-I e BaFLA2, foram capazes de aumentar a produção
de TNF-α pelos macrófagos no período de 4 horas. A BaTX-II não exerceu
este efeito no tempo estudado. Tomados em conjunto, os dados mostraram
que, a despeito das diferenças na atividade catalítica, as três toxinas
induziram eventos inflamatórios e o caráter ácido ou básico destas enzimas
não parece contribuir para estes efeitos
