Tese apresentada ao Programa de Pósgraduação
em Biologia Experimental
(PGBIOEXP) do Núcleo de Saúde da
Universidade Federal de Rondônia como pré-
requisito para a obtenção do título de doutor
em Biologia Experimental. Orientador Prof. Dr. Alexandre de Almeida e SilvaNa Amazônia, especificamente no estado de Rondônia, o mosquito
Anopheles darlingi é um importante vetor de Plasmodium vivax, a principal
espécie de parasita causador de malária humana nas Américas. Alguns
componentes das vias de sinalização do sistema imune, IMD e Toll, podem
modular a infecção por Plasmodium nos mais diversos anofelinos. Portanto,
este estudo avaliou de forma inédita o papel do silenciamento dos
reguladores negativos Caspar e Cactus das vias de IMD e Toll,
respectivamente, e seu efeito na taxa de infecção e produção de oocistos de
Plasmodium vivax no principal vetor da malária no norte do Brasil, Anopheles
darlingi. Para avaliar a ativação das vias IMD e TOLL, os dsRNAs foram
oferecidos de diferentes maneiras, i.e., microinjeção, ingestão e aplicação
tópica observando-se a sobrevivência diária e o silenciamento dos genes. Os
grupos injetados foram avaliados quanto ao bloqueio da infecção por
Plasmodium vivax em An. darlingi, sendo os mosquitos injetados com dsRNA
de Caspar, Cactus e LacZ (dsRNA controle). Após 3 dias, os mosquitos
foram alimentados com sangue infectado por P. vivax usando um sistema de
membrana artificial. No oitavo dia, os mosquitos foram dissecados e com
auxílio de estereoscópico o número de mosquitos infectados (taxa de
infecção) e oocistos foram contados (carga infecção). A sobrevivência dos
mosquitos injetados com dsRNA Cactus foi afetada em relação aos demais
tratamentos. Nos demais métodos, a mortalidade foi menor até o terceiro dia,
além da técnica ser menos laboriosa. O silenciamento causado pelo método
de ingestão foi muito semelhante ao método clássico de microinjeções, mas a
aplicação tópica não causou o silenciamento dos genes como desejado. As
injeções de dsRNA de Cactus e Caspar diminuíram significativamente o nível
de expressão destes genes (86,3 e 80,4%, respectivamente) e a média do
número de oocistos (65,7 e 89,6%, respectivamente), em comparação com
as fêmeas não manipuladas de An. darlingi. Por outro lado, a taxa de
infecção por Plasmodium vivax foi apenas diferente para os mosquitos
injetados com dsRNA de Caspar. Foram avaliados os métodos alternativos
de aplicação de dsRNA, mas deve ser investigado quanto a eficiência no
bloqueio da infecção