Molecular diagnosis of Mycoplasma bovis

Abstract

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaMycoplasma bovis is a bacteria responsible for different disease presentations in cattle, such as pneumonia, mastitis, otitis, genital disorders, keratoconjuntivitis and arthritis, presently considered as one of the major emerging pathogens affecting cattle. Until this day, it is responsible for losses in animal production of over 150 million euros across Europe. The pathogenesis of Mycoplasma-associated diseases is multifactorial and the highly variable surface lipoproteins allows a fast and efficient dissemination of M. bovis within the host and the herd. Due to its high antigenic plasticity, its ability to survive within multiple host cells and the capacity to establish multiple synergistic interactions with other pathogens, makes M. bovis and associated infections are a major challenge in Veterinary Medicine, since the vaccine is not efficient and antibiotics are almost inefficient. This study aims at developing and validating a quantitative PCR protocol for the diagnosis of M. bovis. 93 milk samples, from 5 different Portuguese farms, were collected, processed and each one’s DNA extracted to be analyzed through a qPCR method targeting the uvrC and uvrC2024 genes. Given the percentage of positivity, which was high, the conclusion we can take from the study is that there is still work to do, in terms of establishing a uniformed practice to tackle the wide presence of M. bovis in farms.RESUMO - Diagnóstico Molecular de M. bovis - Mycoplasma bovis é uma bactéria cuja infecção pode ter diferentes apresentações tais como pneumonia, mastite, otite, afecções genitais, queratoconjuntivite e artrites. É um dos agentes considerados emergentes e que afecta a produção agropecuária, sendo responsável por perdas na ordem dos 150 milhões de euros na Europa. Tem uma patogénese multifactorial e as proteínas membranares à sua superfície conferem uma variabilidade que permite uma rápida e eficiente disseminação no hospedeiro, e no rebanho. Esta variabilidade e capacidade de resistir à imunidade do hospedeiro, assim como as suas interacções sinérgicas com outros agentes patogénicos, tornam as infecções por M. bovis um obstáculo difícil de conter e ultrapassar na Medicina Veterinária, isto porque quer a antibioterapia, quer a vacina, não são eficientes. Este estudo procura desenvolver e contribuir para o estabelecimento de um protocolo de diagnóstico para a detecção de M. bovis. Vindas de 5 produções portuguesas diferentes, 93 amostras foram processadas e analisadas através de um qPCR, com os genes uvrC e uvrC2024 como genes alvo. Dados os resultados, com uma positividade significativa pode-se considerar que ainda há trabalho pela frente em termos de estabelecer e uniformizar uma prática para combater a larga presença de M. bovis nas explorações.N/