Resumo. Comportamentos de ansiedade têm sido relacionados ao estresse crônico em roedores e humanos. Em ratos, o teste de natação forçada (FST) é usado como uma tarefa de indução de estresse crônico. Aqui nós testamos a validade do FST como um indutor de ansiedade em camundongos. Dividimos os animais em dois grupos, FST (exposto ao FST durante 15 dias consecutivos) e controle (manipulação durante sessões semelhantes). O teste de labirinto em cruz elevado foi realizado durante o dia 16. Surpreendentemente, FST levou a uma diminuição nos parâmetros de ansiedade, incluindo o tempo e frequência nos braços abertos. Os resultados sugerem que FST crônico não promove a ansiedade em camundongos, mas leva à sua diminuição global. Este efeito pode estar relacionado aos benefícios do exercício leve, uma vez que os camundongos mostram mais capacidade de flutuação do que os ratos. Palavras-chave. Comportamentos de ansiedade; Labirinto em Cruz elevado; Exercício leve. Abstract. Anxiety-like behaviors have been related to chronic stress in rodents and humans. In rats, forced swimming test (FST) is used as a chronic stress-inducing task. Here we test the validity of FST as an anxiety inducer in mice. We divided animals in two groups, FST (exposed to FST for 15 consecutive days) and control (handled in similar sessions). Plus-maze test was performed during the day 16. Surprisingly, FST led to a decrease in the anxiety parameters, including time and frequency in open arms. The results suggest that chronic FST does not promote anxiety in mice, but rather leads its overall decrease. This effect may be related to benefits of mild exercise, since mice display more flotation capacity than rats. Revista da Biologia (2016) [16][17][18][19][20][21][22][23] Keywords Introdução Estresse agudo e crônico, oriundo do estresse social (Henriques-Alves and Queiroz, 2015; A exposição repetida a fatores estressores agudos leva a respostas de estresse crônico em humanos e em animais (Qi e col., 2006). Em humanos, estressores crônicos podem produzir respostas não adaptativas que levam a desordens psicológicas, tais como desordens de ansiedade e depressão maior (Blanchard e col., 1993; Kozicz e col., 2008 Materiais e métodos Animais Camundongos adultos do tipo "Swiss" (n = 16) foram mantidos num ciclo de 12 horas de claro/escuro (luzes ligadas às 6 horas) e a temperatura foi mantida em 24±1°C. Todos os animais tiveram acesso à água e ração à vontade. Todos os procedimentos comportamentais estiveram em concordância com procedimentos de ética animal recomendados pelo Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA). Grupos Comportamentais Os animais foram separados em dois grupos: (1) Grupo Nado Forçado (FST), no qual os animais foram expostos ao procedimento de nado forçado crônico, teste classicamente usado para induzir estresse crônico e depressão (Petit-Demouliere e col., 2004, Porsolt e col., 1977) e (2) Grupo Controle, no qual os animais foram expostos somente a manipulação. Submetemos o grupo FST ao nado forçado em cilindros individuais de vidro (20 cm de altura, 15 cm de diâmetro) preenchidos com água (24-27°C) até a 16 cm de altura. Cada camundongo (n = 6) foi colocado individualmente no cilindro e posteriormente forçado a nadar por 5 minutos uma vez ao dia por 15 dias consecutivos. Os animais do Grupo Controle (n=8) foram submetidos a 5 minutos de manipulação pelo experimentador uma vez ao dia por 15 dias consecutivos. Todos os procedimentos foram conduzidos entre as 08:00 e 16:00 horas para evitar mudanças no comportamento induzidos pelo ciclo claro/escuro. Os camundongos foram pesados no primeiro e último dia de procedimento a fim de verificar possíveis perdas de peso relacionadas ao estresse crônico e a diminuição de ingestão de comida. Durante o dia 16 ambos os grupos foram submetidos a avaliações em parâmetros de ansiedade no teste do labirinto em cruz elevado. Labirinto em Cruz Elevado A tarefa comportamental para acessar comportamentos de ansiedade no presente trabalho foi o labirinto em cruz elevado Resultados Peso corporal Primeiro, nós investigamos se o procedimento de indução de estresse crônico utilizado no presente trabalho pôde diminuir o peso, característica vista em animais estressados (Jeong e col., 2013). Nós comparamos animais intra grupos para verificar se o nado forçado crônico ou a manipulação levaram a mudança de peso ao longo do procedimento, nós também verificamos se havia diferença entre os grupos. A ANOVA de duas vias (Tempo: F (1, 24) = 0.12, p = 0.72; Tratamento: F (1, 24) = 0.23, p = 0.63; Interação: F (1,24) = 0.03, p = 0.85) foi aplicado comparando o grupo Controle (1° dia 54,78 ± 1,6 g e 15° dia 54,46 ± 2,1 g) e o grupo FST (1° dia 56 ± 1,7 g e 15° dia 55 ± 1,6 g). O teste estatístico revelou nenhuma diferença entre ou intra grupos, indicando que o nado forçado crônico não levou ao decréscimo no peso dos animais. França et. al: Nado forçado crônico diminui a ansiedade em camundongos 17 Revista da Biologia Comportamentos de Ansiedade A atividade locomotora Finalmente, comparamos a atividade locomotora do grupo FST e do Figura 1. Procedimento de nado forçado crônico diminui comportamentos de ansiedade em camundongos. A: Tempo gasto (duração) em segundos nos braços (abertos e fechados) ou centro de labirinto em cruz. B: Número de entradas nos braços abertos e fechados, ou centro de EPM. C: Frequência de comportamentos relacionados à ansiedade: head-dipping, flat-back aprouch (FBA) e grooming. Colunas brancas: grupo controle. Azul coluna: Grupo FST. Todas as comparações foram feitas com teste t de Student T ou Mann-Whitney entre estes dois grupos para cada um dos parâmetros (duração ou frequência do comportamento), os dados apresentados com média ± SEM. * P <0,05; ** P <0,01. 18 ib.usp.br/revista ção da ansiedade, enquanto o alto nível de estresse relacionado ao exercício excessivo provoca déficits cognitivos e pode até levar a danos no corpo (Marais e col., 2009; Pietrelli e col., 2011; Salim e col., 2010; van Praag, 2009). Exercícios aeróbicos equilibrados conduzem a uma melhoria das funções cognitivas e uma diminuição da ansiedade (Marais et ai, 2009; Salim et ai, 2010; van Praga, 2009). Exercícios leves em modelos animais e humanos reduz os danos causados por ansiedade ou estresse, e resulta em benefícios de saúde totais (Salim e col., 2010; Conclusão O presente estudo sugere que camundongos expostos ao nado forçado de forma repetida leva a diminuição da ansiedade devido ao exercício moderado. Isto significa que a utilização de nado forçado como um modelo de ansiedade em camundongos pode exigir um ajustamento do protocolo, estabelecer condições mais estressantes. É sugerido aqui que um aumento no tempo de natação ou a fixação de um peso extra para a cauda do rato pode compensar a flutuação aumentada de camundongos, possivelmente fornecendo o esforço muscular necessário para produzir o estresse crônico e ansiedade nesta tarefa. O labirinto em cruz elevado é um teste padrão para medir respostas de ansiedade (Dawson e Tricklebank, 1995; Kheirbek e col., 2013; Agradecimentos No geral, nossos resultados sugerem que o protocolo nado forçado crônico empregado neste estudo foi mais semelhante a uma fonte de exercício crônica leve do que um estressor crônico. O número de entradas nos braços abertos e o tempo gasto nos braços abertos estavam significativamente aumentados em camundongos expostos ao nado forçado crônico. A forte tendência de aumento no número de head-dipping em animais FST, em comparação com os Controles, pode indicar que este comportamento de avaliação de risco está relacionada com a diminuição dos níveis de ansiedade (Henriques-Alves e Queiroz, 2015; Porsolt e col., 1977). Este resultado pode reforçar a noção de que o nado forçado crônico em camundongos representa um exercício equilibrado, ao invés de um estí-mulo de estresse crônico (Pietrelli et ai, 2011; Salim e col., 2010). Vários estudos têm apontado as diferenças entre o exercício equilibrado e exercícios excessivos. O estresse produzido pelo exercício moderado leva a uma diminui- França et. al: Nado forçado crônico diminui a ansiedade em camundongo