飯田 博行

Article富山医科薬科大学医学会誌, 1(1), 1987.10, pp.23-26departmental bulletin pape

飯田, 博行

University of Toyama Repository

富 山 医薬大医誌 1 巻 1 号 1987年腎疾患 における免疫組織学的研究富 山 医科薬科大学内科学第 2 教室飯 田 博 行は じ め に糸球体 腎 炎 （ 以下 腎 炎 ） の 大部分は 免疫学的機序を 介 し て 発症 し ， 補体系や凝 固 系が組織障害因子 とし て ， そ の進展 に 介在 す る こ と か ら I ) ' 蛍光抗体法に よ る 腎 糸球体の免疫 グ ロ プ リ ン ， 補体な ら びに フィ ブ リ ノ ー ゲ ン の 観察が行 わ れ， 腎 炎 の 診断上重要であ る 。 ま た ， 蛍光抗体法や elution study に よ り特異抗 原や抗体の検索 も 行 わ れ る 。 今回， 昭和54年10 月 よ り 同 6 1 年 1 2 月 ま での期 間 に 当 科 で経験 し た ，膜 性 腎 症 と lgA 腎 症 に つ い て 免疫組織学的検討 を行一 っ た 成績 を 述べ， 腸球菌 に よ る 感染症心 内 膜 炎 に伴 っ た 膜性腎症の 1 音IJ検例 に お い て ， 腸球菌抗原、 およ び抗体 を 検索 し た 成績 に つ い て も 報告す る 。1 . 膜性腎症の免疫組織学的検討対象 と 方法33例 （ 男 性 19例 ・ 女性 14例 ） を 対象 と し た 。 年令は3 1 ～ 78歳， 平均54歳であ っ た 。 経皮的 腎生検に より 採取 し た 腎 組織は， 光顕， 電顕お よ び蛍光抗体法用 に 分割 し た 。 蛍光抗体法 では， 腎組織 を た だ ち にド ラ イ ア イ ス ・ ア セ ト ン で冷却 し た n－ヘ キ サ ン （ 70 ℃ ） 中 でI東京吉後， ク リ オ ス タ ッ ト で 2 ～ 3 µm の切片 を 作 製 し た 。 無 固 定 の ま ま fluorescein isoth10-cyanate (FITC） 標識抗 ヒ ト lgG · lgA ・ lgM · lgE · C1q · C3 お よ び フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ン 血清 （ Behring­werke 社製 ） を 用 い ， 直接法に て 蛍光染色 を 行 い ，ニ コ ン XF-EF 落射蛍光顕微鏡 に て 観察 し た 。膜 性 腎 症 の 腎 糸 球 体 に お け る IgG の 沈 着機序 を2) 3 )  検討す る 目 的 で， 13例 を 対 象 に Sugisaki り の方法に よ り ， ヒ ト r－ グロ プ リ ン を 反応 き せ， 糸球体 に 沈着 し た lgG の溶 出 を 試 み た 。 す な わ ち ， 腎凍結切片 を phosphate buffered saline (PBS） で 3 回 洗浄後， PBS lで溶解 し た 1 % お よ び0 . 1 % ス ル ホ 化 ヒ ト免疫 ク、、 ロ プ リ ン を 添加， 室 温 で 1 時 間 反 応 さ せ， その 後 PBS で30分間洗浄 し た 。 こ の操作 を 6 回 繰 り返 し た 後 に 蛍 光抗体 直 接 法 に て ， 糸 球体 に お け るlgG を 観察 し た 。成 績膜性 腎症33例 の蛍光抗体法所見 では ， 全例 で lgGが糸球体係蹄壁 に 沿 っ て 連珠状 に 細頼粒状沈着物 とし て 認 め ら れ た 。 同様のパタ ー ン で lgA が70%,lgM が58 % , C1q が45 %, c3 が81 % ， フ ィ ブ リ ノー ゲ ン が77% で陽性 で あ っ た 。 lgE の沈着 は 認め られ な か っ た 。 免疫 グ ロ プ リ ン の組合せ では， lgG + IgA + lgM か52% と 最 も 多 く ， lgG + IgA 18%, lgG + lgM 6 %, lgG の み24% であ っ た 。本症 の 糸球体に ヒ ト r－ グロ プ リ ン を 反 応 さ せ た 結果， 1 % 溶液では 13例 全例 で糸球体係蹄壁の lgG は消失 し ， 0 . 1 % 溶液 では 13例 中 10例 で消失， 3 例 で減弱 し た （ 図 1 ） 。図 1 膜性 腎症症例 に お け る r－ グ ロ プ リ ン 反応前 後 の lgG の蛍光抗体染色像左 は 1 % ヒ ト γー ク、、 ロ プ リ ン 溶液 を 反応 さ せ た もの で， PBS の み を 反応 さ せ た 右 の対照 に 比べ 糸球体係蹄 壁 の lgG が消失 し て い る 。考 察膜性腎症の蛍光抗体法所見 は ， 従 来 の報告4） に一致 し て お り ， と く に 全例 の係蹄壁 に 沿 っ て 認め られ た IgG の 細 頼 粒 状 沈 着 は ， 上 皮 側 に 高電子密度qd 内JU飯 田 ↑専 行二の 沈着物の認め ら れ る 電顕所見 と と も に 本症 の 診断に 重要 な 決 め 手 で あ る 。 r－ ク、、 ロ プ リ ン を 反応 さ せ るこ と に よ り 糸 球 体 に 沈着 し た lgG が特異的 に 消失し た こ と か ら ， 本 症 で は 係蹄 壁 に 局 在 し た lgG に対す る lgG 抗体が in situ で次々 と 結合 し て 大 き な免 疫複合体が形成 き れ る 機序 が考 え ら れ た 。2 .  lgA 腎症 に お け る 免疫組織学的検討80例 （ 男 性36例 ・ 女性44例 ） を 対 象 と し た 。 年令は 1 5 ～ 63歳， 平均27歳であ っ た 。 蛍光抗体法 は 前述の 女日 〈 千？ っ た 。lg A 腎 症 と 上 気 道 と く に 肩 桃 と の 関 連 を 検索 する 目 的 で， 扇 桃 摘 出 を 受 け た lgA 腎症 の 1 例 に おい て ， Feltkamp & Boode5） の 方 法 に よ り 0 . 02M クエ ン 酸緩衝液 （ p H 3.2 ） を 腎切 片 に 反 応 さ せ て lgA を溶出 し た の ち， 同 じ 方 法 で肩 桃か ら え ら れ た elua­te を そ の 腎 組織 に 反応 き せ， 糸 球体 の lgA を 蛍光体抗法で観察 し た 。成 績lg A 腎 症 80 例 の 蛍 光 抗 体 法 所 見 で は ， 当 然 の こと な が ら ， 全例 で メ サ ン ギ ウ ム 領 域 を 中 心 に 係蹄 壁に か け て lgA の 頼 粒 状 な い し 塊状沈着 を 認め た 。lg A よ り 弱 い 染色 性 で IgG が48%, lgM が59%,C1q が 1 7 % , c3 が96 % ， フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ン が76%で陽性で あ っ た 。 lgA が メ サ ン ギ ウ ム 領域に 限局 する か メ サ ン ギ ウ ム と 係蹄壁に み ら れ る と い っ た 沈着様式や， lgG, IgM, C3， フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ン の 沈着の 有無 な ど の 蛍光所見 と 尿 蛋 白 量や 腎機能 と の 関 係を 検討 し た が， 有 意 な 関 係 は 認め ら れ な か っ た 。扇 桃か ら 溶 出 し た eluate 中 の lgA が 同一患者の腎 糸球体 メ サ ン ギ ウ ム に 結合す る こ と が証明 さ れ た（ 図 2 ） 。考 察lg A 腎症6） で は ， C1q に 比べ c3 の 沈 着が高率 で、あ り ， そ の 発症 と 進展に 補体系 の alternative path­way の関与が示唆 さ れ た7） 。 ま た ， フ ィ ブ リ ノ ー ゲン の 沈着 も 高率で、あ り ， 凝 固 系 の 関 与が支持 さ れ た 。係蹄 に lgA の 沈 着 を み る 例 で は ， メ サ ン ギ ウ ム 領域 に 限局す る 例 に 比べ 尿 蛋 白 量が 多 く ， 腎機能の低下 す る 例 が 多 い と の 報告8） が あ る が， 白 験例 で はlg A の 沈着様式 と 臨床像 と の 聞 に 関係 は な か っ た 。Tomino ら 9 ） は lgA 腎症 患者 の 腎 か ら え ら れ た el-24 -2 fgA. 腎 症症 例 に後 の lgA の 蛍光抗体染色像左 は 0 . 02M ク エ ン 酸緩衝液 pH 3.2 を 反 応 さ せた 後 で， 糸 球 体 内 lgA は ほ ぼ消失 し て い る 。右 は そ の 後 ， 肩 桃 eluate を 反応 さ せ た も の で糸球体内 に lgA の局 在 を 示す蛍光がみ ら れ る 。uate が 肩 桃 の 細 胞 に 特 異 的 に 結合す る こ と を 報告し て い る が ， 今 回 の成績か ら ， 肩 桃の lgA が同 じ患 者 の 糸 球 体 の lgA と 交 叉反応す る こ と が明 ら かに な っ た 。 こ の こ と は ， 扇 桃 由 来 の lgA 抗体が糸球体 に 沈着 し う る こ と を 示唆 し て い る 。3 . 腸球菌 に よ る 感染性心 内 膜 炎 に伴 っ た 膜性腎症に お け る 腸球菌抗原 ・ 抗体の検索10)腎 炎 の 発症 に は 細菌 や ウ イ ル ス が免疫学的機序 を介 し て 関 与す る こ と が知 ら れて い る 。 腸球菌 に よ る感染性心 内 膜 炎 に 伴 っ た 膜性 腎 症 の 1 剖検例 を 経験し ， 蛍光抗体法 に よ り 抗腸球菌抗体 の 関 与 を 証 明 しえ た の で報告す る 。症 例78歳， 男性。 呼吸 困 難 と 全 身 浮腫 を 主訴 と し て ，昭和55年 3 月 1 5 日 当 科に 入 院 し た 。 入院時両側 肺 野に 湿性 ラ 音， 心尖部 に 全収縮期雑音， 拡張期濯水様雑音 を 聴取 し ， 心不全状態 であ っ た 。 検査成績では，貧血 ， 白 血 球 増 多 ， 赤 沈 の 高 度 充 進 が あ り ， 検 尿では 尿蛋 白 （ 廿 ） ， 2 . 2 g ／ 日 ， 赤血球40 ～ 50／視野，赤血球円柱お よ び混合円柱 を 認め た 。 BUN 46mg/ dk'. , 血清 ク レ ア チ ニ ン 3 . 5mg/ dk'. ， 血 清 ア ル ブ ミ ン 2 . 4 g I dk'. で あ り ， 低補体血症， 血 中 免疫 複合体， 尿 中 FDPの上昇がみ ら れ た 。 心エ コ ー 図 で心 内 膜 炎 の所見がえ ら れ， 動脈血か ら 腸球菌が分離 さ れ た 。 腎 炎 を 伴っ た 腸球菌 に よ る 感染性心 内 膜 炎 と 診断 し ， ア ン ピシ リ ン を 投 与 し た 。 し か し ， 心不全が悪化 し 入院 第58病 日 に 死亡 し た 。 音lj 検 で は 感染性心 内 膜 炎 と う っ腎疾患に お け る 免疫組織学的研究血性心不全の所見 に 加 え ， 腎 組織 で は 光顕 的 に 糸球体係蹄壁の び漫性肥厚， 軽 度 の メ サ ン ギ ウ ム 増殖，電顕上糸球体基底膜 の不規則 な 肥厚 と 基底膜内， 上皮 下お よ び メ サ ン ギ ウ ム に 高電子密度 の 沈着物 を 認め た 。 蛍光抗体法 で は 係蹄壁に 沿 っ て ， lgG を は じめ lgA, lgM, C1q, C3 お よ び フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ン が細頼粒状 に 沈着 し て い た （ 図 3 ） 。図 3 糸球体係蹄 壁に 沿 っ て ， lgG の細頼粒状沈着 を 示 す蛍光抗体染色像 （ × 400 )腎組織に お け る 腸球菌抗 原 お よ び抗体の検索患者の血液か ら 分離 さ れ た 腸球菌 を ウ サ ギ に 免疫し て 得 ら れ た 抗 腸球菌 ウ サ ギ 血 清 を 用 い て ， 蛍光抗体間接法に よ り 糸球体に お け る 腸球菌 抗 原 の 局 在 を検索 し た が， 認め ら れ な か っ た 。 前途の Feltkamp& Boode 4 1 の 方 法に よ り 腎 組織の elution を 行 っ た 。得 ら れ た eluate を ス ラ イ ド グラ ス に 塗抹 し た 腸球菌 と 反 応 き せ ， FITC 標 識抗 ヒ ト lgG を 用 い て 蛍光抗体間接法に よ り ， 抗腸球菌抗体の有無 を 検索 した 。 そ の 結 果 ， こ の eluate に よ っ て 図 4 の ご と く腸球菌 の 存 在 を 示す 蛍光がみ ら れ， 本症例 の 腎組織に 抗腸球菌抗体 を 証 明 す る こ と が 出 来 た 。考 察感染性心 内 膜 炎 に 伴 う 腎 糸球体病 変 の大部分は，免疫学的機序， こ と に 免疫複合体の沈着に よ る 腎 炎であ る と 考 え ら れ て い る I I ） 。 本例 に お い て も ， 血清補体価 の低下， 血 中 免疫複合体の上昇がみ ら れ， 腎組織 の電顕， 蛍光抗体法の所見は 免疫複合体 型 腎 炎のそ れに一致 し て い た 。 そ こ で腎組織の elution stu­dy を行 っ た と こ ろ， 抗腸球菌 抗体が証明 さ れ た も のであ る 。 Levy & Hong121 も 同 様の症例 を 報告 し てお り 、 腎 炎 の 病 因 菌 と し て す でに よ く 知 ら れて い る図 4 腸球菌 に 腎 eluate と FITC 標 識抗 ヒ トIgG を 反応、 さ せ る 蛍光抗体間接法に よ り ，eluate 中 に 抗腸球菌 抗体 を 証明 し た 蛍光抗体法法色像 （ × 1 , 000 )j容連菌， ぶ ど う 球菌 ， 肺炎球菌 な ど に 加 え ， 腸球菌が免疫複合体 を 介 し て 腎 炎 の 発生 に 関与 し う る も のと 考 え ら れ た 。お わ り に内 科 領 域 で 比 較 的 多 い 膜性 腎 症 と lgA 腎症 を 中心 に ， 免疫組織学的検討 を 行 っ た 成績 に つ い て 述べた 。 蛍光抗体法に よ る 免疫組織学的検 索 は ， 腎 炎 の病 型 を 診断す る 上 で不可 欠 で、あ る はか り でな く ， 腎炎 の 病態や病 因 を 探 る 上 で有用 で あ る こ と が明 ら かに な っ た 。謝 辞ご助 力 を 賜 り ま し た ， 本学病理学小泉富 美朝教授，三輪淳夫前助教授 な ら びに 細菌 ・ 免疫学 山 岸 高 由助教授 に 深謝致 し ま す 。文 献1 ) Thomson N .  M.,  Holdsworth S. R . , Glasgow E. F., Peters D. K. and Atkins R .  C. : Mech­anisms of injury in experimental glomerulo­nephritis. In Progress in Glomerulonephritis. by Kincaid-Smith P. ,  Atkins R .  C. and D’ Aprice A. J. F.(Ed.) 51刊， Wiley, New York, 1979. 2 ) Sugisaki T. ,  Brentjens G. R . ,  Kano K., And­res G. A., Anthon S. and Milgrom F. : A study of immune complexes in a renal allo-Fhu 円ノu飯 田 博 行graft with de nova membranous nephro­pathy. Kidney int. 19 : 192, 1981.  2 ） 河住久， 高瀬茂， 紫 回 孝則， 斉藤研一， 内 田 潤，北沢孝三， 山 本純， 佐藤滋， 米倉正博， 伊藤正吾， 志和 池成世， 韓啓 司 ， 杉崎徹三 ： 膜性腎症，膜性増殖性糸球体 腎 炎 ， ルー プ ス 腎 炎 に お け る腎糸球体沈着抗 原抗体結合物 の研究．日 腎 誌、 24 : 625 - 640, 1982. 4 ) Heptinstall R. H.  : Pathology of the Kindey 3rd edition, 535-536, Little Brown, Boston, Toronto, 1983. 5 ) Feltkamp T. E. W. and Boode J. H. : Elut10n of antibodies from biopsy tissue. J. din. Pa­thol. 23 : 629-63 1 ,  1970 6 ) Berger J. : lgA glomerular deposits in renal disease. Transplant. Proc. 1 : 939-944, 1 969. 7 )  D’Amico G. : Idiopathic lgA mesangial ne­phropathy. Nephron 4 1  : 1- 13, 1985. 8 ） 吉 村光弘， 木 田 寛， 平 原 克 己， 片桐 昌尋， 竹 田慎一， 横 山 仁， 越野慶隆， 友杉直久， 安部俊 男，服部信 ： lgA 腎 症 に お け る 係 蹄 型 lgA 沈着 の意義 ． 日 腎 誌 27 : 1495 - 1 502, 1985 . phv nL 9 ) Tomino T. ,  Sakai H. ,  Endoh M.,  Suga T. ,  Miura M.,  Kaneshige H .  and Nomoto Y. : Cross-reactivity of lgA antibodies between renal mesangial areas and nuclei of tonsillar cells in patients with lgA nephropathy. Chn. exp. lmmunol. 51  : 605・610, 1 983. 10 )  Iida H. ,  Mizumura Y., Uraoka T., Takata M. ,  Sugimoto T., Miwa A. and Y omagishi T. : Membranous glomerulonephritis asso­ciated with enterococcal endocarditis. Neph­ron 40 : 88-90, 1 985. 1 1 )  Gutman R. A., Striker G. E., Gilliland B. C. and Cutler R. E. : The immune complex glo­merulonephritis of bacterial endocarditis. Medicine 51 : 1 -25, 1972. 12 )  Levy R. L. and Hong R. : The immune na­ture of subacute bacterial endocarditis (SBE) nephritis. Am. J. Med. 54 : 645-652, 1 973. 

腎疾患における免疫組織学的研究

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