Prevalence of liver fluke (Fasciola hepatica) in wild Red Deer (Cervus elaphus): coproantigen ELISA is a practicable alternative to faecal egg counting for surveillance in remote populations

Red deer (Cervus elaphus) are hosts of liver fluke (Fasciola hepatica); yet, prevalence is rarely quantified in wild populations. Testing fresh samples from remote regions by faecal examination (FE) can be logistically challenging; hence, we appraise frozen storage and the use of a coproantigen ELISA (cELISA) for F. hepatica surveillance. We also present cELISA surveillance data for red deer from the Highlands of Scotland. Diagnoses in faecal samples (207 frozen, 146 fresh) were compared using a cELISA and by FE. For each storage method (frozen or fresh), agreement between the two diagnostics was estimated at individual and population levels, where population prevalence was stratified into cohorts (e.g., by sampling location). To approximate sensitivity and specificity, 65 post-slaughter whole liver examinations were used as a reference. At the individual level, FE and cELISA diagnoses agreed moderately (κfrozen = 0.46; κfresh = 0.51), a likely reflection of their underlying principles. At the population level, FE and cELISA cohort prevalence correlated strongly (Pearson’s R = 0.89, p < 0.0001), reflecting good agreement on relative differences between cohort prevalence. In frozen samples, prevalence by cELISA exceeded FE overall (42.8% vs. 25.8%) and in 9/12 cohorts, alluding to differences in sensitivity; though, in fresh samples, no significant difference was found. In 959 deer tested by cELISA across the Scottish Highlands, infection prevalence ranged from 9.6% to 53% by sampling location. We highlight two key advantages of cELISA over FE: i) the ability to store samples long term (frozen) without apparent loss in diagnostic power; and ii) reduced labour and the ability to process large batches. Further evaluation of cELISA sensitivity in red deer, where a range of fluke burdens can be obtained, is desirable. In the interim, the cELISA is a practicable diagnostic for F. hepatica surveillance in red deer, and its application here has revealed considerable geographic, temporal, sex and age related differences in F. hepatica prevalence in wild Scottish Highland red deer

The sero-diagnosis of heartwater : a comparison of 5 tests

Cinq tests sérologiques, l'ELISA indirect, l'ELISA de compétition, deux tests par immunofluorescence indirecte utilisant des antigènes différents, et la technique de Western blotting, ont été comparés sur des sérums de contrôle négatifs ou positifs pour Cowdria ruminantium et des sérums d'animaux de régions indemnes de cowdriose. Aucun des tests ne donnait de réaction positive sur les sérums de contrôle négatifs. En dehors de variations peu importantes dans la sensibilité, il y avait une bonne corrélation entre les 5 tests. Leur spécificité reste contestée, car dans tous les 5 tests, des réactions croisées considérables ont été enregistrées avec des anticorps contre un agent non encore identifié, probablement Ehrlichi

Validation de terrain d'un test ELISA de compétition pour la détection de la péripneumonie contagieuse des bovins au Botswana

Le test ELISA de compétition, récemment décrit pour détecter la présence de la péripneumonie, a été utilisé au Laboratoire national vétérinaire du Botswana à Gaborone. L'échantillonnage de sérums a compris un nombre significatif de sérums récoltés durant l'épizootie de 1995 et ensuite en 1998 après que la totalité du cheptel bovin de la zone infectée ait été abattue. Les résultats obtenus ont montré l'excellente spécificité du test avec un seul sérum négatif, sur 895, ayant un titre légèrement supérieur au seuil de positivité. La comparaison avec deux autres tests, la fixation du complément et l'agglutination sur lame, avec des sérums récoltés durant l'épizootie de péripneumonie en 1995 a montré que ces trois tests avaient des sensibilités équivalentes. Les principaux avantages de l'ELISA de compétition sont sa spécificité, sa reproductibilité et la possibilité qu'il offre de pouvoir effectuer un contrôle de qualité fiable en étant utilisé avec des logiciels développés au niveau international comme l'ELISA Data Interchange (EDI). (Résumé d'auteur

Performance analysis of anaplasma antibody competitive ELISA using the ROC curve for screening of anaplasmosis in camel populations in Egypt

Anaplasmosis is a tick-born and potential zoonotic disease caused by Anaplasma (A.) phagocytophilum, A. ovis, A. platys and A. capra. Anaplasma marginale affecting bovines and camels causing significant economic losses. Camels as an integral part of the socio-economic lifestyle of nomads in semi-arid to arid ecosystems are prone to suffer from subclinical Anaplasma infections. This study aimed to determine the performance and adaptation of commercial competitive Anaplasma ELISA (cELISA) as a tool for screening the seroprevalence of anaplasmosis whitin the camel populations in Egypt. This study was based on the serological investigation of 437 camel sera collected between 2015 and 2016 during a Q fever prevalence study in Egypt using commercially available cELISA for the detection of antibodies specific for Anaplasma in bovine serum. The receiver operating characteristic (ROC) curve, an analysis method for optimizing cutoff values in cELISAs, was used to estimate the sensitivity and specificity using 76 true as serological positive (n = 7) and negative (n = 60) for Anaplasma antibodies. ROC curve analysis was done for 7 true positive and 60 true negative bovine samples and 7 true positive and 29 true negative camel samples serum. Real time PCR and/or conventional PCR was applied to confirm Anaplasma spp. specific-DNA in camel serum as an indication of a true positive and true negative for ROC analysis. Chi square analysis was performed to estimate the association between risk factors and anaplasmosis in camels. The cutoff value was determined as 0.42 (p value ≤ 0.001). Data simulation with randomly generated values revealed a cutoff value of 0.417 (p ≤ 0.001) with resulting 58.1% Se and 97.8% Sp. Seven true positive and 29 true negative camel serum samples was confirmed by PCR. Using the estimated cut off, the seroprevalence in the Nile Valley and Delta and the Eastern Desert domain was 47.4% and 46.4%, respectively. The potential risk factors as domains and origin of animals were less significantly associated with the prevalence of anaplasmosis (domains: χ(2) = 41.8, p value ≤ 0.001 and origin: χ(2) = 42.56, p value ≤ 0.001). Raising awareness especially for veterinarians and animal owners will significantly contribute to the best understanding of anaplasmosis in camels in Egypt. Alternative (in silico) validation techniques and preliminary prevalence studies are mandatory towards the control of neglected anaplasmosis in the camel population

Seroprevalence and Molecular Detection of Bovine Anaplasmosis in Egypt

Bovine anaplasmosis is a tick-borne disease with zoonotic potential, caused by the obligate intracellular bacterium Anaplasma marginale. The disease is distributed worldwide in tropical and subtropical regions. The economic losses from anaplasmosis in animals is of significant importance because it causes severe morbidity and mortality in cattle. Recovered animals may become persistent carriers. Epidemiological information on the actual status of bovine anaplasmosis in Egypt is scarce. Thus, this study aimed to determine anti-Anaplasma antibody and DNA in serum samples using ELISA and PCR, respectively. In total, 758 bovine sera were collected from cattle farms located in 24 Egyptian governorates in 2015 to 2016. Sera were analyzed with the commercially available ‘Anaplasma antibody competitive ELISA v2’ kit and ‘AmpliTest Anaplasma/Ehrlichia spp. real time TaqMan TM PCR. Anaplasma spp. antibodies were detected in 140 (18.5%) (CI: 15.8–21.4%) of the investigated sera by ELISA, and Anaplasma/Ehrlichia-DNA was detected in 40 (5.3%) (CI: 3.8–7.1%) of the positive sera by real time PCR. Co-detection of both Anaplasma spp. and Coxiella burnetii-specific antibodies was proven in 30 (4%) of the investigated sera. The results of this work confirm the significant prevalence of bovine anaplasmosis in Egypt. Raising awareness in decision makers of the public health, veterinarians and animal owners is required to reduce the spread of infection

Evaluation des performances du test de diagnostic cELISA utilisé pour le suivi de la fièvre catarrhale du mouton en France : conséquences sur la prévalence réelle de la maladie et sur la stratégie d'échantillonnage

Les objectifs de l'étude étaient d'une part d'évaluer les performances (sensibilité et spécificité) des deux tests ELISA de compétition (cELISA 1 en 2000 et c ELISA Il en 2001) utilisés pour le diagnostic et le suivi de l'infection de la fièvre catarrhale du mouton (FCM ou bluetongue) en Corse en 2000 et 2001 et d'autre part de les comparer. L'approche retenue pour conduire cette évaluation est l'analyse ROC [2, 4]. Elle s'est basée sur les données sérologiques et virologiques (détection de l'ARN viral par RT-PCR) collectées lors des deux campagnes de prophylaxie de 2000 et 2001. Le test de référence (gold standard) retenu pour définir le statut des animaux vis-à-vis de l'infection a été la RT-PCR. 406 sérums prélevés en 2000 (cELISA I) ont été également analysés de nouveau avec le test cELISA Il. Un test kappa a été appliqué aux résultats afin de mettre en évidence le niveau de concordance entre les deux tests. Les aires sous la courbe ROC obtenues sont de 0,84 (IC à 95%: 0,73 - 0,95) pour le test cELISA utilisé en 2000 et de 0,78 (IC à 95%: 0,68 - 0,89) pour celui utilisé en 2001. Les meilleures valeurs de sensibilité et de spécificité sont atteintes pour une valeur-seuil définie respectivement à 70% et à 53%. A la lumière de ces résultats, la prévalence sérologique observée en 2000 a été revue. Les valeurs de Kappa calculées respectivement pour un seuil à 50% et à 70%, pour le test cELISA I, sont de 0,0058 ([sigma]2 = 0,0053) et de 0,1898 ([sigma]2 = 0,0350). Cette concordance est qualifiée de mauvaise d'après Brennan & Hays (1992). Les performances observées pour ces tests dans les conditions de sérodiagnostic sont discutées en particulier par rapport à l'utilisation de la RT-PCR comme test de référence. En effet, si ce test est reconnu excellent du point de vue de sa sensibilité et de sa spécificité, il ne détecte pas les anticorps mais l'ARN viral. Or, la virémie est précoce (2 à 3 jours) par rapport à la phase de production d'anticorps détectés par le test cELISA (minimum de 10 jours) [Koumbati et al., 1999]. Le choix d'un test de référence sérologique telle la séroneutralisation apparaît ainsi essentiel pour compléter ces résultats préliminaires. La qualité des données intégrées à l'étude fait également l'objet d'une réflexion. Les seules données disponibles étaient en effet celles collectées lors de la gestion des épizooties corses. Le problème de la représentativité et de la qualité de ces données qui n'ont pas été produites dans le but de mener une telle étude est alors posé. Finalement, des données supplémentaires et notamment expérimentales sont nécessaires afin de préciser les qualités intrinsèques de ces tests particulièrement pour leur utilisation comme outil de vigilance dans les zones indemnes. La comparaison des deux tests s'est heurtée quant à elle à un fort déséquilibre dans la répartition des résultats en fonction du test. Il s'ensuit une difficulté à commenter les résultats du test kappa. L'échantillon sera complété afin de pouvoir renforcer la puissance de ce test. (Résumé d'auteur

Prevalence and correlates of antibodies to Neospora caninum in dogs in Portugal

Neosporosis, caused by Neospora caninum, is an important cause of abortion in cattle and of neurological disease in dogs. This study investigated the prevalence and correlates of antibodies to N. caninum in 441 dogs from the five regions of mainland Portugal. A commercial competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) was used and specific antibodies were detected in 35 (7.9%) dogs. Seroprevalence levels were significantly different among some of the studied regions, as well as between stray dogs (13.6%) and hunting dogs (1.7%). The difference between seropositivity in dogs presenting musculoskeletal or neurological signs (21.4%) and that in animals without clinical signs compatible with neosporosis (5.6%) was close to statistical significance. This is the first report on the seroprevalence of N. caninum in dogs in Portugal. Neosporosis should be considered in the differential diagnosis of neurological disorders of dogs.National Funds through FCT - Foundation for Science and Technology under the Strategic Project [PEst-OE/AGR/UI0115/2014]; FCT [SFRH/BPD/44082/2008]info:eu-repo/semantics/publishedVersio