Obtenção e caracterização de complexos e sistemas ternários contendo pterostilbeno, β-ciclodextrina e polímeros hidrofílicos

O pterostilbeno (PTS) é uma fitoalexina, presente principalmente em mirtilos (Vaccinium spp), que tem sido objeto de estudos devido às propriedades preventivas e terapêuticas que tem lhe sido atribuídas. Sua baixa hidrossolubilidade constitui-se numa de suas principais limitações farmacêuticas e biofarmacêuticas, assim, sua associação com ciclodextrinas e polímeros hidrofílicos apresenta-se como estratégia promissora para contorná-la. Neste sentido, o presente trabalho propõe obter e caracterizar complexos e sistemas ternários contendo PTS, β-ciclodextrina (βCD) e polímeros hidrofílicos (polivinilpirrolidona, PVP ou hidroxipropilmetilcelulose, HPMC), otimizar os parâmetros que influenciam a complexação, bem como investigar o efeito do uso de etanol como cossolvente no meio complexante. Como subsídio ao estudo foi desenvolvido e validado um método analítico indicativo de estabilidade, por cromatografia líquida de alta eficiência. O PTS mostrou-se instável diante da exposição à oxidação, elevadas temperaturas e à luz UV. O método mostrou-se linear, específico, exato, preciso e robusto, além de ser um método indicativo de estabilidade aplicável à quantificação do PTS em extrato de mirtilo, e nos complexos e sistemas ternários supracitados. A associação do PTS com βCD formou complexos de inclusão e aumentou em 10 vezes sua hidrossolubilidade. Como resultado da otimização da complexação as melhores condições foram: temperatura de 37°C, 2 horas de agitação com 4mM de PTS no meio. Os polímeros demonstraram ser importantes para o incremento da hidrossolubilidade do PTS, sendo o sistema PTS:βCD:HPMC o que apresentou melhores resultados de promoção da solubilidade do PTS (aumento de 56 vezes) e determinou uma redução drástica na quantidade de ciclodextrina utilizada (da razão molar PTS:βCD de 1:9, sem polímero, para 1:2 na presença do polímero). O uso de etanol como cossolvente na obtenção dos sistemas ternários mostrou excelente resultado, aumentando o conteúdo de PTS em 3 vezes nos correspondentes produtos secos por liofilização, comparativamente aos sistemas ternários obtidos em meio aquoso. Em suma, o sistema ternário, PTS:βCD:HPMC obtido com o uso de cossolvente foi o que demonstrou ter o melhor potencial como produto intermediário para desenvolvimento de novos produtos farmacêuticos, cosméticos ou alimentares contendo PTS.Pterostilbeno (PTS) is a phytoalexin, present mainly in blueberries (Vaccinium spp), which has been the object of studies due to the preventive and therapeutic properties that have been attributed to it. Its low water solubility is one of its main pharmaceutical and biopharmaceutical limitations. Thus its association with cyclodextrins and hydrophilic polymers represent a promising strategy to circumvent these limitations In this constext, the present work proposes to obtain and characterize complexes and ternary systems containing PTS, β-cyclodextrin (βCD) and hydrophilic polymers (polyvinylpyrrolidone, PVP or hydroxypropylmethylcellulose, HPMC), to optimize the parameters that influence the complexation, as well as to investigate the effect of the use of ethanol as co-solvent in the complexing medium. To quantitate PTS in all of samples, an analytical method indicative of stability was developed and validated by high performance liquid chromatography. PTS was unstable against oxidation, high temperatures and exposure to UV light. The method was linear, specific, accurate, precise and robust, besides being an indicative stability method applicable to the quantification of PTS in blueberry extract, and in the aforementioned complexes and ternary systems. The association of PTS with βCD formed inclusion complexes and increased its water solubility 10-fold. As a result of optimization of the complexation the best conditions were: 37°C temperature, 2 hours stirring with 4mM PTS in the medium. Among the systems tested, the PTS: βCD: HPMC ternary system proved to be the most promising solubility of PTS (increase of 56-fold) determining a drastic reduction in the amount of cyclodextrin used. It reduced the PTS molar ratio from 1:9 PTS:βCD, in the absence of polymer, to 1:2 in the presence of the polymer. The use of ethanol as a cosolvent in obtaining the ternary systems showed excellent results, increasing the content of PTS in 3 times the corresponding freeze dried products, compared to ternary systems obtained in aqueous medium. In summary, the ternary system, PTS:βCD:HPMC obtained with the use of ethanol as cosolvent showed excellent PTS solubilizing characteristics being a promise intermediate product for the development of new pharmaceuticals, cosmetics or foods containing PTS

Avaliação do teor de isoflavonas em medicamentos contendo extrato de Trifolium pratense L.

O Trifolium pratense apresenta como isoflavonas majoritárias a 7 formononetina,biochanina A, daidzeína egenisteína, conhecidas como fitoestrógenos, sendo 8 capazes de interagir com receptores estrogênicos biológicos.Estes constituintes são utilizados 9 pela população no alívio dos sintomas da menopausa, mas diversos outrosefeitos benéficos 10 lhes tem sido atribuídos. Medicamentos contendo extrato da espécie são disponíveis na forma 11 de especialidades farmacêuticas e manipulados sob demanda. O presente trabalho tem por 12 objetivo avaliar o perfil qualitativo e o teor das isoflavonas majoritárias de Trifolium pratense 13 em medicamentos disponíveis em drogarias e farmácias de manipulação, verificando se 14 apresentam a quantidade de isoflavonas totais declarada no rótulo. Um total de cinco 15 medicamentos foram analisados, sendo dois industrializados e três manipulados. O 16 doseamento destesfoi realizado por meio de cromatografia líquida de alta eficiência. O 17 método foi co-validado e demonstrou-se preciso, exato, linear na faixa de concentração 18 avaliada (0,5 – 10 μg/mL), específico e com baixo efeito de matriz. Os medicamentos 19 industrializados apresentaram quantidades de isoflavonas totais (IT) de acordo com o 20 declarado na embalagem e perfil qualitativo correspondente ao descrito na literatura. Os 21 medicamentos manipulados revelaram a presença de isoflavonas majoritárias em proporções 22 atípicas e quantidades de IT fora dos limites de aceitação.Trifolium pratense is a herbal species which presents as its major 28 isoflavones formononetin, biochanin A, daidzein and genistein. These isoflavones are known 29 as phytoestrogens since they are able of interacting with biological estrogen receptors. Herbal 30 extracts from this species have been used for relieving the symptoms of menopause, but 31 several other beneficial effects have been attributed to its main isoflavones. The drugs 32 containing extracts of the species are available as industrial proprietary products or 33 compounding on demand. The present study has the aim evaluating the qualitative profile and 34 the content of the major isoflavones of Trifolium pratense in medicines available in 35 drugstores (industrial products) and compounding products, verifying if they present the 36 amount of total isoflavones declared in the label. A total of five drugs were analyzed, being 37 two industrialized and three compounded in pharmacies. The dosing of them was performed 38 using high performance liquid chromatography. The method was co-validated and has 39 demonstrated to be precise, accurate, linear, in the evaluated concentration range (0.5-10 40 g/mL), specific and with low matrix effect. Industrialized drugs presented total isoflavone 41 (TI) amounts as stated on the labels and qualitative profile corresponding to that described in 42 the literature. All the compounded products revealed the presence of major isoflavones in 43 atypical proportions and quantities of total isoflavones out of the acceptance limits

Stability-Indicating HPLC Method for isoflavones aglycones analysis from Trifolium pratense L. extract

The purpose of this study was to develop and validate a fast HPLC stability-indicating method for simultaneously quantifying the four main isoflavones in Trifolium pratense. Validation procedures followed the ICH requirements for complex matrices. The stability-indicating tests were performed by exposing the isoflavones to conditions of forced degradation and further analysis for verifying the formation of degradation products and their possible interferences in the HPLC analysis. The major isoflavones of Trifolium pratense proved to be stable against acid and oxidative media, thermodegradation, and photodegradation. However, they proved to be unstable in alkaline media, even for short periods of exposure like 2h. In this condition, in addition to the peaks corresponding to isoflavones, the HPLC analysis showed the presence of three additional peaks which were eluted at different retention times to the reference substances, without interfering in the quantification of the four analytes of interest, formononetin, biochanin A, daidzein and genistein. The method was validated following ICH guidelines showing to be specific, linear, precise, accurate, and robust.This first report concerning a stability-indicating method revealed that the proposed HPLC method reliably quantify the isoflavones and separate them from the degradation products in a short time of analysis

Adipose tissue of female Wistar rats respond to Ilex paraguariensis treatment after ovariectomy surgery

Background and aim: Metabolic disturbances are known for their increasing epidemiological importance. Ilex paraguariensis presents a potential option for mitigating lipid metabolism imbalance. However, most of the literature to date has not considered sex bias. This study aimed to evaluate the effect of Ilex paraguariensis on the metabolism of different adipose tissue depots in males and females. Experimental procedure: After ovariectomy, female Wistar rats received daily treatment with the extract (1 g/kg) for forty-five days. Biochemical serum parameters and tissue metabolism were evaluated. Oxidation, lipogenesis and lipolysis were evaluated in brown, white visceral, retroperitoneal and gonadal adipose tissues. Results and conclusion: The results showed that treatment with the extract led to a reduced weight gain in ovariectomised females in comparison to control. The triglyceride concentration was decreased in males. Glucose oxidation and lipid synthesis in visceral and retroperitoneal adipose tissues were restored in ovariectomised females after treatment. The response to epinephrine decreased in visceral adipose tissue of control males; however, lipolysis in females did not respond to ovariectomy or treatment. These findings highlight the enormous potential effects of I. paraguariensis on lipid metabolism, modulating lipogenic pathways in females and lipolytic pathways in males. Furthermore, the sex approach applied in this study contributes to more effective screening of the effects of I. paraguariensis bioactive substances

Avaliação do teor de isoflavonas em medicamentos contendo extrato de Trifolium pratense L.

O Trifolium pratense apresenta como isoflavonas majoritárias a 7 formononetina,biochanina A, daidzeína egenisteína, conhecidas como fitoestrógenos, sendo 8 capazes de interagir com receptores estrogênicos biológicos.Estes constituintes são utilizados 9 pela população no alívio dos sintomas da menopausa, mas diversos outrosefeitos benéficos 10 lhes tem sido atribuídos. Medicamentos contendo extrato da espécie são disponíveis na forma 11 de especialidades farmacêuticas e manipulados sob demanda. O presente trabalho tem por 12 objetivo avaliar o perfil qualitativo e o teor das isoflavonas majoritárias de Trifolium pratense 13 em medicamentos disponíveis em drogarias e farmácias de manipulação, verificando se 14 apresentam a quantidade de isoflavonas totais declarada no rótulo. Um total de cinco 15 medicamentos foram analisados, sendo dois industrializados e três manipulados. O 16 doseamento destesfoi realizado por meio de cromatografia líquida de alta eficiência. O 17 método foi co-validado e demonstrou-se preciso, exato, linear na faixa de concentração 18 avaliada (0,5 – 10 μg/mL), específico e com baixo efeito de matriz. Os medicamentos 19 industrializados apresentaram quantidades de isoflavonas totais (IT) de acordo com o 20 declarado na embalagem e perfil qualitativo correspondente ao descrito na literatura. Os 21 medicamentos manipulados revelaram a presença de isoflavonas majoritárias em proporções 22 atípicas e quantidades de IT fora dos limites de aceitação.Trifolium pratense is a herbal species which presents as its major 28 isoflavones formononetin, biochanin A, daidzein and genistein. These isoflavones are known 29 as phytoestrogens since they are able of interacting with biological estrogen receptors. Herbal 30 extracts from this species have been used for relieving the symptoms of menopause, but 31 several other beneficial effects have been attributed to its main isoflavones. The drugs 32 containing extracts of the species are available as industrial proprietary products or 33 compounding on demand. The present study has the aim evaluating the qualitative profile and 34 the content of the major isoflavones of Trifolium pratense in medicines available in 35 drugstores (industrial products) and compounding products, verifying if they present the 36 amount of total isoflavones declared in the label. A total of five drugs were analyzed, being 37 two industrialized and three compounded in pharmacies. The dosing of them was performed 38 using high performance liquid chromatography. The method was co-validated and has 39 demonstrated to be precise, accurate, linear, in the evaluated concentration range (0.5-10 40 g/mL), specific and with low matrix effect. Industrialized drugs presented total isoflavone 41 (TI) amounts as stated on the labels and qualitative profile corresponding to that described in 42 the literature. All the compounded products revealed the presence of major isoflavones in 43 atypical proportions and quantities of total isoflavones out of the acceptance limits

Obtenção e caracterização de complexos e sistemas ternários contendo pterostilbeno, β-ciclodextrina e polímeros hidrofílicos

O pterostilbeno (PTS) é uma fitoalexina, presente principalmente em mirtilos (Vaccinium spp), que tem sido objeto de estudos devido às propriedades preventivas e terapêuticas que tem lhe sido atribuídas. Sua baixa hidrossolubilidade constitui-se numa de suas principais limitações farmacêuticas e biofarmacêuticas, assim, sua associação com ciclodextrinas e polímeros hidrofílicos apresenta-se como estratégia promissora para contorná-la. Neste sentido, o presente trabalho propõe obter e caracterizar complexos e sistemas ternários contendo PTS, β-ciclodextrina (βCD) e polímeros hidrofílicos (polivinilpirrolidona, PVP ou hidroxipropilmetilcelulose, HPMC), otimizar os parâmetros que influenciam a complexação, bem como investigar o efeito do uso de etanol como cossolvente no meio complexante. Como subsídio ao estudo foi desenvolvido e validado um método analítico indicativo de estabilidade, por cromatografia líquida de alta eficiência. O PTS mostrou-se instável diante da exposição à oxidação, elevadas temperaturas e à luz UV. O método mostrou-se linear, específico, exato, preciso e robusto, além de ser um método indicativo de estabilidade aplicável à quantificação do PTS em extrato de mirtilo, e nos complexos e sistemas ternários supracitados. A associação do PTS com βCD formou complexos de inclusão e aumentou em 10 vezes sua hidrossolubilidade. Como resultado da otimização da complexação as melhores condições foram: temperatura de 37°C, 2 horas de agitação com 4mM de PTS no meio. Os polímeros demonstraram ser importantes para o incremento da hidrossolubilidade do PTS, sendo o sistema PTS:βCD:HPMC o que apresentou melhores resultados de promoção da solubilidade do PTS (aumento de 56 vezes) e determinou uma redução drástica na quantidade de ciclodextrina utilizada (da razão molar PTS:βCD de 1:9, sem polímero, para 1:2 na presença do polímero). O uso de etanol como cossolvente na obtenção dos sistemas ternários mostrou excelente resultado, aumentando o conteúdo de PTS em 3 vezes nos correspondentes produtos secos por liofilização, comparativamente aos sistemas ternários obtidos em meio aquoso. Em suma, o sistema ternário, PTS:βCD:HPMC obtido com o uso de cossolvente foi o que demonstrou ter o melhor potencial como produto intermediário para desenvolvimento de novos produtos farmacêuticos, cosméticos ou alimentares contendo PTS.Pterostilbeno (PTS) is a phytoalexin, present mainly in blueberries (Vaccinium spp), which has been the object of studies due to the preventive and therapeutic properties that have been attributed to it. Its low water solubility is one of its main pharmaceutical and biopharmaceutical limitations. Thus its association with cyclodextrins and hydrophilic polymers represent a promising strategy to circumvent these limitations In this constext, the present work proposes to obtain and characterize complexes and ternary systems containing PTS, β-cyclodextrin (βCD) and hydrophilic polymers (polyvinylpyrrolidone, PVP or hydroxypropylmethylcellulose, HPMC), to optimize the parameters that influence the complexation, as well as to investigate the effect of the use of ethanol as co-solvent in the complexing medium. To quantitate PTS in all of samples, an analytical method indicative of stability was developed and validated by high performance liquid chromatography. PTS was unstable against oxidation, high temperatures and exposure to UV light. The method was linear, specific, accurate, precise and robust, besides being an indicative stability method applicable to the quantification of PTS in blueberry extract, and in the aforementioned complexes and ternary systems. The association of PTS with βCD formed inclusion complexes and increased its water solubility 10-fold. As a result of optimization of the complexation the best conditions were: 37°C temperature, 2 hours stirring with 4mM PTS in the medium. Among the systems tested, the PTS: βCD: HPMC ternary system proved to be the most promising solubility of PTS (increase of 56-fold) determining a drastic reduction in the amount of cyclodextrin used. It reduced the PTS molar ratio from 1:9 PTS:βCD, in the absence of polymer, to 1:2 in the presence of the polymer. The use of ethanol as a cosolvent in obtaining the ternary systems showed excellent results, increasing the content of PTS in 3 times the corresponding freeze dried products, compared to ternary systems obtained in aqueous medium. In summary, the ternary system, PTS:βCD:HPMC obtained with the use of ethanol as cosolvent showed excellent PTS solubilizing characteristics being a promise intermediate product for the development of new pharmaceuticals, cosmetics or foods containing PTS

PRÉ-TESTE COMO UMA FERRAMENTA DE APRENDIZAGEM

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