Les progéniteurs multipotents exprimant Flt3 source des précurseurs T extra-thymiques

Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) de phénotype LSK (Ligneage-c-Kit+Sca1+) sont à l origine de toutes les lignées sanguines. Leur maturation passe parla génération de progéniteurs multipotents (MPP), subdivisés grâce à l expression deVCAM-1 et Flt3 (VCAM-1+Flt3-: MPP1, VCAM-1+Flt3+: MPP2 et VCAM-1-Flt3+:MPP3). Les MPP3 se différencient en progéniteur lymphoïde commun (CLP), sourcede la lignée B. Sa contribution à la génération de la lignée T reste controversée.La lignée T principale est issue d un progéniteur de la MO qui a colonisé le thymus. Ilexiste aussi une lignée T extra-thymique, identifiés au sein de différents organes(l intestin, la MO, le sang et la rate) dont la maturation se termine dans le thymus oul intestin. Une des questions importantes est de savoir si ces 2 lignées sont issues de lamême source. Nous nous sommes intéressés à la lignée de pré-T extra-thymique (de larate) : Lin-Thy1.2+ CD25+Il7R +. Ces derniers sont très abondants chez la sourisathymique (5-6 fois plus que chez la souris contrôle C57BL/6). Notre but a été dedéfinir la source de cette lignée parmi les progéniteurs de la MO. Suite aux transplantations des différents compartiments hématopoïétiques de la MO àdes receveurs athymiques irradiés, nous avons montré que les MPP3 (VCAM1-Flt3+)sont la population plus douée d activité pré-T. Au contraire, les CLP génèrent deslymphocytes B matures (CD19+IgM+). Ces données sont confortées par l étude del expression de gènes lymphoïdes et myéloïdes qui indique l engagement lymphoïdeprécoce d une sous- population de MPP3. Les cellules progénitrices de la MO quicolonisent la rate (et le thymus) doivent circuler par le sang pour pouvoir coloniser cesorganes. La population de MPP majoritaire en circulation est les MPP3. De plus,l analyse du profil d expression des gènes des récepteurs aux chimiokines et d autresgènes spécifique de la différentiation apporte de nouvelles informations sur le potentielT intrinsèque des progéniteurs de la MO.L ensemble des données accumulées permettent de conclure que les MPP3 sont debons candidats pour la génération des pré-T extra-thymiques et que l engagementlymphoïde commencé dans la MO se termine dans le sang grâce au maintien del expression de Notch1.Pas de résumé en anglaisPARIS5-Bibliotheque electronique (751069902) / SudocSudocFranceF

Early Steps of a Thymic Tumor in SV40 Transgenic Mice: Hyperplasia of Medullary Epithelial Cells and Increased Mature Thymocyte Numbers Disturb Thymic Export

Bone marrow progenitors migrate to the thymus, where they proliferate and differentiate into immunologically competent T cells. In this report we show that mice transgenic for SV40 T and t antigens under the control of the L-pyruvate kinase promoter develop, in a first step, thymic hyperplasia of both thymocytes and epithelial cells. Morphological studies (histology, immunohistolabeling and electron microscopy) revealed modifications of the thymic microenvironment and gradual expansion of medullary epithelial cells in 1 month-old mice, taking over the cortical region. Then, a thymic carcinoma develops. Two-color labeling of frozen sections identified the transgene in medullary epithelial cells. Flow cytometry analysis demonstrated a marked increase in mature CD4+ and CD8+ thymocytes in adult mice (39±10×106 in transgenic mice and 12±5×106 in age-matched controls). Furthermore, thymocyte export was disturbed

Major T Cell Progenitor Activity in Bone Marrow–derived Spleen Colonies

Common lymphoid progenitors (CLP) are generated in adult bone marrow (BM), but the intermediate steps leading to T cell commitment are unknown, and so is the site at which this commitment occurs. Here, we show that colonies arising in the spleen 12 days after BM injection harbor T cell precursors that are undetectable in BM. These precursors did not generate myeloid cells in vivo but repopulated the thymus and the peripheral T cell compartment much faster than did CLP. Two lineage negative (Lin−) subpopulations were distinguished, namely CD44+ Thy1− cells still capable of natural killer generation and transient low-level B cell generation, and T cell–restricted CD44− Thy1+ cells. At a molecular level, frequency of CD3ɛ and preTα mRNA was very different in each subset. Furthermore, only the CD44− Thy1+ subset have initiated rearrangements in the T cell receptor β locus. Thus, this study identifies extramedullary T cell progenitors and will allow easy approach to T cell commitment studies

Characterization of T Cell Differentiation in the Murine Gut

Gut intraepithelial CD8 T lymphocytes (T-IEL) are distinct from thymus-derived cells and are thought to derive locally from cryptopatch (CP) precursors. The intermediate stages of differentiation between CP and mature T-IEL were not identified, and the local differentiation process was not characterized. We identified and characterized six phenotypically distinct lineage-negative populations in the CP and the gut epithelium: (a) we determined the kinetics of their generation from bone marrow precursors; (b) we quantified CD3-ε, recombination activating gene (Rag)-1, and pre-Tα mRNAs expression at single cell level; (c) we characterized TCR-β, -γ, and -α locus rearrangements; and (d) we studied the impact of different mutations on the local differentiation. These data allowed us to establish a sequence of T cell precursor differentiation in the gut. We also observed that the gut differentiation varied from that of the thymus by a very low frequency of pre-Tα chain mRNA expression, a different kinetics of Rag-1 mRNA expression, and a much higher impact of CD3 ε/δ and pre-Tα deficiencies. Finally, only 3% of CP cells were clearly involved in T cell differentiation, suggesting that these structures may have additional physiological roles in the gut

De l'identification d'une population restreinte à la lignée T à l'analyse cellulaire et moléculaire de l'engagement vers la lignée T

Nous avons isolé au sein de la rate de souris non manipulées une population restreinte à la lignée T de phénotype Lin- Thy1.2+ CD25+ c-kitlo. Elle est générée in situ dans la rate à partir de progéniteurs multipotents et s'y accumule en présence de l'interleukine-7 et préférentiellement en absence de cellules T matures et/ou d'un thymus. Ainsi, la rate est un environnement favorable à l'engagement vers la lignée T. Cette population splénique semble constituer une réserve de précurseurs T, qui peuvent être mobilisés en cas d'immunodéficience. La mise au point d'une RT-PCR multiplex nous a permis d'étudier l'expression d'une quinzaine de gènes impliqués dans l'hématopoïèse au niveau unicellulaire au sein de plusieurs populations hématopoïetiques. Le niveau d'expression de certains gènes semble être déterminant pour l'engagement vers la lignée T. Nous souhaitons poursuivre cette analyse pour mettre en évidence les mécanismes moléculaires de l'engagement vers la lignée T.We have isolated a T-cell restricted population Lin- Thy1.2+ CD25+ c-kitlo from the spleen of unmanipulated mice. It is generated in situ in the spleen from multipotent progenitors and accumulates there in the presence of interleukin-7 and preferentially in the absence of mature T cells and/or a thymus. Thus, the spleen is a favorable environment for T-cell commitment. This splenic population seems to be a stock of T-cell precursors that could be mobilized in case of immunodeficiency. The optimization of a RT-PCR multiplex allowed us to study the expression of 15 genes implicated in hematopoiesis at single cell level in several hematopoietic populations. The expression level of some genes seems to be determinant for T-cell commitment. We want to pursue this analysis to establish molecular mechanims of T-cell commitment.PARIS5-BU Méd.Cochin (751142101) / SudocSudocFranceF

Haemopoiesis and early T-cell differentiation

International audienc

Analyse des précurseurs lymphoïdes isolés des colonies spléniques J12

PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Analyse d'une voie de différenciation T identifiée dans les colonies spléniques

Les lymphocytes T sont générés dans le thymus, à partir de progéniteurs originaires de la moelle osseuse : les cellules souches hématopoïétiques. Au cours de leur maturation , les CHS vont être capables de générer toutes les cellules du système sanguin . Dans le cas de la lignée T, les progéniteurs hématopoïétiques doivent d'abord coloniser le thymus pour se différencier en lymphocytes T. Une des grandes questions est quel progéniteur de la moelle osseuse migre dans le thymus et est à l'origine des progéniteurs intrathymiques. L'identification dans la moelle osseuse d'une population de progéniteurs capable de géne rer toutes les cellules de la lignée lymphoïde a laissé penser que ces cellules, les CLP, étaient à l'origine des progéniteurs intrathymiques. Toutefois, le fait que cette population ne puisse migrer dans le sang rend cette hypothèse difficile. Ainsi, les progéniteurs de la moelle à l'origine des progéniteurs intrathymiques fait sans doute parti de la population Lin Sca-1+c-kit hi (LSK). Une autre question importante concerne les sites et les mécanismes de restriction à la lignée TPARIS5-BU-Necker : Fermée (751152101) / SudocSudocFranceF