Transcription factors Ebf1 and Ebf2 in bone metabolism

Bone formation and bone metabolism are controlled by several different factors and signaling pathways. Transcription factors participate in this cascade by regulating the differentiation of osteoblasts, osteoclasts and chondrocytes. One of the additions to the group of bone-related transcription factors are early B-cell factors. Early Bcell factor 1 (Ebf1) was first identified as a key transcription factor regulating B-cell differentiation. Further work has found that it also regulates neuronal and adipocyte differentiation, as does its family member Ebf2. We and others have shown that Ebf1 is expressed in osteoblasts and that genomewide deletion of Ebf1 results in increased bone formation in vivo. In contrast, global Ebf2 knock out mice have osteopenia in cancellous and cortical bone due to enhanced bone resorption and increased number of osteoclasts. However, interpreting the effects of global Ebf1 and Ebf2 deletion on bone is challenging, as both factors are expressed in multiple tissues. This results in failure to thrive and could therefore affect the skeletal development. Therefore, the functions and molecular mechanisms of action at specific stages of osteoblasts differentiation remained to be elucidated in detail. This thesis investigates the role of Ebf1 and Ebf2 in osteoblast differentiation and function, at different stages of bone development. To achieve this, we analysed several conditional, osteoblast targeted Ebf1 and Ebf2 knockout mouse models. Results of our work show that Ebf1 promotes early osteoblast differentiation by regulating Osterix expression. We also concluded that Ebf1 inhibits bone accrual in the Osterix-expressing osteoblasts in vivo, but it is redundant in the function of mature, osteocalcin-expressing osteoblasts. Deletion of both Ebf1 and Ebf2 in mesenchymal lineage cells led to significant, age progressive increase in bone volume. The phenotype was to some extent gender dependent. Results presented in this thesis have established that Ebf1 and Ebf2 have prominent effect on bone formation. By understanding the specific roles of Ebf transcription factors in osteoblast differentiation, we are one step closer to guiding MSC differentiation to facilitate bone repair and developing future therapies.Transkriptiotekijät Ebf1 ja Ebf2 luun aineenvaihdunnassa Luunmuodostusta ja luun aineenvaihduntaa säätelevät useat eri tekijät sekä signalointireitit. Tähän prosessiin osallistuvat transkriptiotekijät säätelevät osteoblastien, osteoklastien sekä kondrosyyttien erilaistumista. Ebf-ryhmän (engl. Early B-cell factor) transkriptiotekijät kuuluvat luunmuodostuksen säätelijöihin. Ebf1 (Early B-cell factor 1) tunnistettiin ensimmäistä kertaa B-solujen erilaistumisen säätelyssä. Myöhemmin sen on todettu osallistuvan myös adiposyyttien sekä hermosolujen erilaistumisen säätelyyn, yhdessä saman säätelyperheen toisen tekijän, Ebf2:n kanssa. Aiemmat tutkimukset osoittavat Ebf1:n ilmenevän osteoblasteissa. Globaaleissa poistogeenisissä hiirimalleissa Ebf1:n puuttuminen johti kasvaneeseen luumassaan. Ebf2:n globaali poistogeenisyys taas johtaa hiirimalleissa osteopeniaan lisääntyneen luun resorption ja kasvaneen osteoklastimäärän myötä. Luustovaikutusten tulkinta globaalisti poistogeenisissä hiirimalleissa on kuitenkin haastavaa, sillä Ebf1 ja Ebf2 ilmenevät useissa eri kudostyypeissä. Tämä voi johtaa sekundäärisiin muutoksiin, jotka osaltaan vaikuttavat luunmuodostukseen. Näin ollen spesifit vaikutukset luusolujen erilaistumiseen ja molekyylitason mekanismeihin ovat yhä epäselviä. Tutkimuksemme selvitti Ebf1- ja Ebf2- transkriptiotekijöiden merkitystä osteoblastien erilaistumisessa ja toiminnassa luunmuodostuksen eri vaiheissa. Analysoimme useita Ebf1- ja Ebf2- hiirimalleja, joissa poistogeenisyys oli kohdennettu osteoblasteihin. Tutkimuksen tulokset osoittavat, että Ebf1 edistää varhaista osteoblastien erilaistumista. Totesimme kuinka osteoblastien erilaistumisen edetessä Ebf1 heikentää luun kertymistä in vivo, mutta ei enää osallistu kypsien osteoblastien toimintaan. Ebf1:n ja Ebf2:n samanaikainen puute mesenkymaalisissa esiastesoluissa johti iän myötä etenevään luumassan lisääntymiseen. Ilmiasu oli joiltain osin riippuvainen sukupuolesta. Tämän tutkimuksen tulokset vahvistavat Ebf-transkriptiotekijöiden merkitystä luunmuodostuksessa. Ymmärtämällä paremmin Ebf-transkriptiotekijöiden spesifejä vaikutuksia osteoblastien erilaistumisessa, olemme askeleen lähempänä mesenkymaalisten stroomasolujen hyödyntämistä luuvaurioiden korjaamisessa sekä tulevaisuuden lääkekehityskohteena

Luomuviljan sato hyötyy lietelannoituksesta

Nimekkeen selvennys: Yield of organically grown cereals benefits from slurry.Viljoista ruis ja kaura soveltuvat parhaiten luomuviljelyyn. Sen sijaan ohra ja vehnä ovat vaateliaita maan kasvukunnon suhteen ja tarvitsevat runsaasti ravinteita. Tutkimuksessa on selvitetty, parantavatko lietelanta tai viherkate luomuviljan typpilannoitusta.vo

The effect of pre-crop and fertilization on baking quality of organic spring wheat

Soil structure more than previous crop seemed to influence the development of organic spring wheat during the extremely wet growing season in 1998. However, the best soil structures and strongest wheat crops were found after clover leys and the poorest after peas. The most important determinant for the baking quality of the flour was the cultivar

Viherkatteen levitystekniikka

Luomuviljely lisääntyi Suomessa nopeasti 1990-luvulla luomuviljelyyn siirtymistä edistäneen tukipolitiikan vuoksi. Monille karjattomille tiloille aiheuttivat kuitenkin ongelmia typen niukkuus, viljan heikko laatu ja rikkaruohojen lisääntyminen. Koska viherkatetta käytetään yleisesti lannoitteena ja eroosion torjuntaan trooppisessa maataloudessa, viljelijät yrittivät selvittää, voitaisiinko keinolannoitteiden typpeä korvata orgaanisten lannoitteiden kuten viherkatteen avulla. Menetelmän hankaluutena on kuitenkin käsityövaltaisuus, koska viherkatteen levittämistä käsityönä ei kyetä korvaamaan sopivan tekniikan avulla. Tämä tutkimusselostus käsittelee pääasiassa viherkatteen levitystekniikkaa. Vuosina 1994-1997 kehitettiin ja testattiin viherkatteen levityskoneen prototyyppi MTT Maatalousteknologian tutkimuksessa. Tämän ja kolmen muun levitystekniikan arviointi johti siihen lopputulokseen, ettei optimaalista menetelmää ole vieläkään löydetty. Millään tutkitulla tekniikalla ei ylletty käsityön laatuun. Prototyyppi kuitenkin mahdollisti laajempien kokeitten suorittamisen, joissa käytettiin eri viherkatekasveja ja/tai viherkatekasvien sekoituksia. Kokeet tehtiin vuosina 1996-1999 eri viherkatekasvilla: ruis Secale cereale, puna-apila Trifolium pratense, sinimailanen Medicago sativa, timotei Phleum pratense, nurminata Festuca pratensis, ruokohelpi Phalaris arundinaceae ja eri sekoitukset niiden välillä. Viherkate levitettiin seuraaville kasveille: keräkaali Brassica oleracea var. capitata, takiainen Arctium lappa, virmajuuri Valeriana, piparminttu Mentha piperita, anisiisoppi Agastache foeniculum, nokkonen Urtica dioica, kevätvehnä Triticum aestivum ja kevätohra Hordeum vulgare. Kokeiden perusteella päädyttiin seuraaviin johtopäätöksiin: 1) viherkatteen lannoitusvaikutus on epäselvää, 2) sääolosuhteet vaikuttavat sekä viherkatteen maatumiseen että viherkatteen runsauteen, levityksen ajoitukseen ja toistuvuuteen, 3) ruis tai ruokohelpi muodostaa kestävän katepeitteen, 4) nelinkertainen viherkatekasvin pinta-alan verrattuna viljelykasvin viljelypinta-alaan vaikuttaa riittävältä rikkaruohontorjuntaan, 5) viherkatteen levityskoneen prototyyppi toimii tyydyttävästi kaikill a käytetyillä viherkasveilla paitsi nuorella, märällä puna-apilalla. Vuorotteleva kaistaviljely ja riviniittokone (Fischer Reihenmulcher) on tällä hetkellä paras saatavilla oleva viherkatteenlevitysteknologia suosiollisissa sääolosuhteissa. Vain "zero traffic" -teknologia mahdollistaa täydellisen viherkatteenlevityksen sää- ja maaolosuhteista riippumatta. Pohjois-Euroopan sääolosuhteista johtuen viherkatteen kasvu ja maatuminen on kuitenkin niin epävarmaa, että parannettu levitysteknologiakaan ei kykene luomaan viherkatteen käytölle riitäviä edellytyksiä. Sen sijaan trooppisilla alueilla korkea lämpötila ja kosteus takaavat sekä viherkasvien elinvoimaisen kasvun että nopean maatumisen. Palkokasvien runsaus viljelykierrossa ja karjanlannan käyttö on joka tapauksessa viherkatetta suositeltavampi menetelmä lannoittaa luomuviljelyksiä Pohjois-Euroopassa. Toinen vaihtoehto on palkokasvien siemenrouheen, sarvijauheen tai risiinikakun käyttö. Näiden luonnonläheisten lannoitteiden käyttö ei riipu sääoloista ja ne voidaan tuottaa ja hankkia kaukana levityspaikalta. Viherkatteen käyttö on maailmanlaajuisesti tärkeä menetelmä kestävän kehityksen periaatteita noudattavassa maataloudessa. Vaikka kate levitetään trooppisissa maissa vielä yleisesti käsin, kasvaa viherkatteen levityksen koneellistumisen merkitys lähitulevaisuudessa.Finland's policy of subsidising the conversion to organic production precipitated the rapid growth of organic farming in the 1990's. As a consequence, many stockless farms encountered the problems of nitrogen deficit, poor grain quality, and weed control. Since the spreading of green mulch on cash crops is very common especially in tropical agriculture, organic fertilisers like green mulch may be an alternative that would compensate for the prohibition on the use of mineral N-fertilisers. However, one problem is that presently there is no appropriate technique available to substitute for the strenuous handwork of spreading green mulch. The main subject of this research report is the technique of green mulch spreading. Between 1994 and 1997, a green mulch spreading prototype was developed and tested. An evaluation of four different spreading techniques, including the prototype, revealed that the optimal technique was still not found and that none of the techniques considered in this report achieved the quality of hand work. The prototype did, however, allow us to perform experiments using different green mulch crops and/or mixtures of green mulch crops to a greater extent. From 1996-1999 experiments were conducted using the following crops as green mulch: rye Secale cereale, red clover Trifolium pratense, alfalfa Medicago sativa, timothy Phleum pratense, meadow fescue Festuca pratensis, reed canary grass Phalaris arundinaceae and different mixtures of them. Green mulch was applied to following cash crops: Cabbage Brassica oleracea var. capitata, burdock Arctium lappa, valerian Valeriana, peppermint Mentha piperita, anise hyssop Agastache foeniculum, stinging nettle Urtica dioica, spring wheat Triticum aestivum, and spring barley Hordeum vulgare. The experiments produced the following results: 1) The fertilising effect of green mulch application is ambiguous. 2) Weather conditions influence both the mineralisation and the quantity of green mulch, the timing, and the frequency of mulching. 3) Persisting green mulch cover can be achieved using rye or reed canary grass. 4) An area ratio of 4 : 1 green mulch crop : cash crop seems to be sufficient for weed control. 5) With the exception of wet young red clover, all of the green mulch crops used were suitable for the prototype machine. On condition that the weather is suitable, the strip intercropping technique in combination with the row mulching machine of Fischer Ltd. is presently the best available green mulch spreading-technique. Only zero traffic technology such as gantry technology offers perfect green mulch spreading which is independent from weather and soil conditions. However, even improved spreading technique does not solve the other problem, which is caused by weather conditions: Uncertain growth and mineralisation of green mulch. This is mainly a problem in North European countries where conditions are the opposite of those in tropical areas. In tropical areas, temperature and humidity always ensure both, vigorous growth and rapid mineralisation. In any event, a legume-rich crop rotation and organic manure from livestock would be the better alternative for fertilisation in organic farming under North European conditions. Another alternative is the use of milled seeds of legumes, hornmeal or cake of Ricinus communis. For these materials, traditional fertilising machinery is available. The application of these organic fertilisers is not weather dependent and they can be produced and purchased far from the location of application. The worldwide application of green mulch is essential for a sustainable agriculture. Although in most tropical countries spreading is still done by hand, the mechanisation of green mulch spreading will gain increasing importance in the near future.vo

Technique of green mulch spreading

Finland’s policy of subsidising the conversion to organic production precipitated the rapid growth of organic farming in the 1990’s. As a consequence, many stockless farms encountered the problems of nitrogen deficit, poor grain quality, and weed control. Since the spreading of green mulch on cash crops is very common especially in tropical agriculture, organic fertilisers like green mulch may be an alternative that would compensate for the prohibition on the use of mineral N-fertilisers. However, one problem is that presently there is no appropriate technique available to substitute for the strenuous handwork of spreading green mulch. The main subject of this research report is the technique of green mulch spreading. Between 1994 and 1997, a green mulch spreading prototype was developed and tested. An evaluation of four different spreading techniques, including the prototype, revealed that the optimal technique was still not found and that none of the techniques considered in this report achieved the quality of hand work. The prototype did, however, allow us to perform experiments using different green mulch crops and/or mixtures of green mulch crops to a greater extent. From 1996-1999 experiments were conducted using the following crops as green mulch: rye Secale cereale, red clover Trifolium pratense, alfalfa Medicago sativa, timothy Phleum pratense, meadow fescue Festuca pratensis, reed canary grass Phalaris arundinaceae and different mixtures of them. Green mulch was applied to following cash crops: Cabbage Brassica oleracea var. capitata, burdock Arctium lappa, valerian Valeriana, peppermint Mentha piperita, anise hyssop Agastache foeniculum, stinging nettle Urtica dioica, spring wheat Triticum aestivum, and spring barley Hordeum vulgare. The experiments produced the following results: 1) The fertilising effect of green mulch application is ambiguous. 2) Weather conditions influence both the mineralisation and the quantity of green mulch, the timing, and the frequency of mulching. 3) Persisting green mulch cover can be achieved using rye or reed canary grass. 4) An area ratio of 4 : 1 green mulch crop : cash crop seems to be sufficient for weed control. 5) With the exception of wet young red clover, all of the green mulch crops used were suitable for the prototype machine. On condition that the weather is suitable, the strip intercropping technique in combination with the row mulching machine of Fischer Ltd. is presently the best available green mulch spreading-technique. Only zero traffic technology such as gantry technology offers perfect green mulch spreading which is independent from weather and soil conditions. However, even improved spreading technique does not solve the other problem, which is caused by weather conditions: Uncertain growth and mineralisation of green mulch. This is mainly a problem in North European countries where conditions are the opposite of those in tropical areas. In tropical areas, temperature and humidity always ensure both, vigorous growth and rapid mineralisation. In any event, a legume-rich crop rotation and organic manure from livestock would be the better alternative for fertilisation in organic farming under North European conditions. Another alternative is the use of milled seeds of legumes, hornmeal or cake of Ricinus communis. For these materials, traditional fertilising machinery is available. The application of these organic fertilisers is not weather dependent and they can be produced and purchased far from the location of application. The worldwide application of green mulch is essential for a sustainable agriculture. Although in most tropical countries spreading is still done by hand, the mechanisation of green mulch spreading will gain increasing importance in the near future. TABLE OF CONTENT Acknowledgements 7 1. Introduction 8 2. State of knowledge on green mulch research 8 2.1 Green mulch crops 8 2.2 Green mulch effects 9 2.2.1 Mineralisation and fertilisation 9 2.2.2 Weed control 10 2.2.3 Pest control 11 2.2.4 Soil temperature and soil moisture 11 2.2.5 Soil fertility and N-losses 11 3. State of green mulch technology 12 3.1 Machines for grassland 12 3.2 Machines for berries and fruit trees 14 3.3 Machines for cereals 16 3.4 Machines for maize 16 3.5 Machines for potato 17 4. Design of a prototype machine for green mulch spreading in row crops 17 4.1 Knowledge base when starting 1994 17 4.2 Design and testing 18 4.3 Conclusions 21 5. Evaluation of green mulch spreading techniques in row crops 24 5.1 Techniques of green mulch spreading 24 5.1.1 Technique A: Modified manure spreader 24 5.1.2 Technique B: Modified flail 24 5.1.3 Technique C: Combination of modified manure spreader and modified flail 25 5.1.4 Technique D: Modified disc mower 25 5.2 Evaluation methods 25 5.2.1 Calculation of working time 26 5.2.2 Rating of process criteria 27 5.2.3 Cost calculation 28 5.3 Results and discussion 29 5.4 Conclusions 30 6. Experiments with green mulch 30 6.1 Experiments in 1996 with cabbage 30 6.1.1 Practical tests using the green mulch prototype machine 30 6.1.1.1 Material and methods 30 6.1.1.2 Results 41 6.1.1.3 Conclusions 43 6.1.2 Field experiments spreading green mulch by hand 43 6.1.2.1 Material and methods 43 6.1.2.2 Results 44 6.1.2.3 Conclusions 46 6.2 Experiments in 1997 with beetroot 47 6.2.1 Material and methods 47 6.2.3 Results 47 6.2.3 Conclusions 49 6.3 Experiments with spring cereals in 1998 and 1999 49 6.3.1 Material and methods 49 6.3.1.1 Design and operations in the field experiment 50 6.3.1.2 Fertilising techniques 51 6.3.1.3 Plant and soil analysis 52 6.3.1.4 Statistical analysis 52 6.3.1.5 Calculation of N-balance 53 6.3.2 Results and discussion 53 6.3.3 Conclusions 61 7. Conclusion 61 References 6

Tilinpäätöksestä johdetut tunnusluvut ja osakkeiden suhteellinen arvonmääritys: piensijoittajan näkökulma

Tämän tutkielman tavoitteena on syventyä tilinpäätöksestä johdettaviin tunnuslukuihin ja osakkeen suhteelliseen arvonmääritykseen piensijoittajan näkökulmasta. Tutkielmassa keskitytään tunnuslukujen analysointiin, jonka avulla yhtiön taloudellista tilannetta ja toimintaedellytyksiä voidaan ymmärtää paremmin. Tutkielman tarkoituksena ei ole tarjota piensijoittajalle suoria sijoitusneuvoja, vaan sen sijaan selventää, kuinka tunnuslukujen ymmärtäminen voi auttaa piensijoittajaa tekemään tietoon perustuvia sijoituspäätöksiä. Tutkielmassa käsitellään myös tilinpäätösinformaation luotettavuutta, sillä tunnuslukujen käyttöön liittyy rajoituksia, jotka riippuvat tilinpäätösinformaation luotettavuudesta ja laadusta. Tutkielmassa keskitytään tunnuslukuanalyysiin, joka on piensijoittajalle hyödyllinen tilinpäätöksen analyysitekniikka. Tunnuslukuanalyysilla tarkoitetaan yhtiön taloudellisen tilanteen ja taloudellisten toimintaedellytysten arviointia, jonka tavoitteena on tukea tietoon perustuvaa sijoituspäätöksentekoa. Tunnuslukuanalyysi on tärkeä tilinpäätöksen analyysitekniikka ja tunnusluvut toimivat hyödyllisinä indikaattoreina, jotka kuvaavat yhtiön suorituskykyä ja taloudellista tilannetta. Piensijoittajalla on nykyään käytössään kaikki tarvittava tieto tunnuslukuanalyysin toteuttamiseen ja tunnuslukuanalyysiä tehdessään piensijoittaja voi hyödyntää perinteisten tilinpäätöksestä johdettujen tunnuslukujen lisäksi myös markkinaperusteisia tunnuslukuja. Piensijoittajalle keskeistä on löytää sopivia tunnuslukuja monipuoliseen ja laadukkaaseen tunnuslukuanalyysiin. Tutkielmassa tunnuslukujen jako tilinpäätöksestä johdettaviin tunnuslukuihin ja suhteelliseen arvonmääritykseen markkinaperusteisten tunnuslukujen avulla tuo selkeyttä lukijalle. Tutkielma on toteutettu käsiteanalyyttisena tutkimuksena, eikä tutkielma sisällä empiriaa. Tutkielma on kirjallisuuskatsaus, joka perustuu olemassa olevaan kirjallisuuteen, mutta siinä voi esiintyä normatiivisia piirteitä. Tutkielmassa hyödynnetään laajaa valikoimaa kotimaista sekä kansainvälistä kirjallisuutta ja tieteellisiä julkaisuja

Treatment with Soluble Activin Type IIB Receptor Ameliorates Ovariectomy-Induced Bone Loss and Fat Gain in Mice

Introduction In postmenopausal osteoporosis, hormonal changes lead to increased bone turnover and metabolic alterations including increased fat mass and insulin resistance. Activin type IIB receptors bind several growth factors of the TGF-beta superfamily and have been demonstrated to increase muscle and bone mass. We hypothesized that ActRIIB-Fc treatment could improve bone and muscle mass, inhibit fat accumulation, and restore metabolic alterations in an ovariectomy (OVX) model of postmenopausal osteoporosis. Materials and Methods Female C57Bl/6 N mice were subjected to SHAM or OVX procedures and received intraperitoneal injections of either PBS or ActRIIB-Fc (5 mg/kg) once weekly for 7 weeks. Glucose and insulin tolerance tests (GTT and ITT, respectively) were performed at 7 and 8 weeks, respectively. Bone samples were analyzed with micro-computed tomography imaging, histomorphometry, and quantitative RT-PCR. Results Bone mass decreased in OVX PBS mice compared to the SHAM PBS group but ActRIIB-Fc was able to prevent these changes as shown by mu CT and histological analyses. This was due to decreased osteoclast numbers and function demonstrated by histomorphometric and qRT-PCR analyses. OVX induced adipocyte hypertrophy that was rescued by ActRIIB-Fc, which also decreased systemic adipose tissue accumulation. OVX itself did not affect glucose levels in GTT but ActRIIB-Fc treatment resulted in impaired glucose clearance in both SHAM and OVX groups. OVX induced mild insulin resistance in ITT but ActRIIB-Fc treatment did not affect this. Conclusion Our results reinforce the potency of ActRIIB-Fc as a bone-enhancing agent but also bring new insight into the metabolic effects of ActRIIB-Fc in normal and OVX mice.Peer reviewe

Characterization and analysis of energy demand patterns in airports

Airports in general have high-energy consumption. Influenced by many factors, the characteristics of airport energy consumption are stochastic, nonlinear and dynamic. In recent years, airport managers have made huge efforts to harmonize airport operation with environmental sustainability by minimizing the environmental impact, with energy conservation and energy efficiency as one of their pillars. A key factor in order to reduce energy consumption at airports is to understand the energy use and consumption behavior, due to the multiple parameters and singularities that are involved. In this article, a 3-step methodology based on monitoring methods is proposed to characterize and analyze energy demand patterns in airports through their electric load profiles, and is applied to the Seve Ballesteros-Santander Airport (Santander, Spain). This methodology can be also used in airports in order to determine the way energy is used, to establish the classification of the electrical charges based on their operation way as well as to determine the main energy consumers and main external influencers. Results show that airport present a daily energy demand pattern since electric load profiles follow a similar curve shape for every day of the year, having a great dependence of the terminal building behavior, the main energy consumer of the airport, and with heating, ventilation and air conditioning (HVAC) and lighting being the most energy-intensive facilities, and outside temperature and daylighting the main external influencers

Age-Progressive and Gender-Dependent Bone Phenotype in Mice Lacking Both Ebf1 and Ebf2 in Prrx1-Expressing Mesenchymal Cells

Ebfs are a family of transcription factors regulating the differentiation of multiple cell types of mesenchymal origin, including osteoblasts. Global deletion of Ebf1 results in increased bone formation and bone mass, while global loss of Ebf2 leads to enhanced bone resorption and decreased bone mass. Targeted deletion of Ebf1 in early committed osteoblasts leads to increased bone formation, whereas deletion in mature osteoblasts has no effect. To study the effects of Ebf2 specifically on long bone development, we created a limb bud mesenchyme targeted Ebf2 knockout mouse model by using paired related homeobox gene 1 (Prrx1) Cre. To investigate the possible interplay between Ebf1 and Ebf2, we deleted both Ebf1 and Ebf2 in the cells expressing Prrx1. Mice with Prrx1-targeted deletion of Ebf2 had a very mild bone phenotype. However, deletion of both Ebf1 and Ebf2 in mesenchymal lineage cells lead to significant, age progressive increase in bone volume. The phenotype was to some extent gender dependent, leading to an increase in both trabecular and cortical bone in females, while in males a mild cortical bone phenotype and a growth plate defect was observed. The phenotype was observed at both 6 and 12 weeks of age, but it was more pronounced in older female mice. Our data suggest that Ebfs modulate bone homeostasis and they are likely able to compensate for the lack of each other. The roles of Ebfs in bone formation appear to be complex and affected by multiple factors, such as age and gender