Effect of disinfectant benzalkonium chloride on freshwater microalgae "Scenedesmus quadricauda" (Turpin) Brebisson

[Resumen] El cloruro de benzalconio es utilizado frecuentemente como producto de limpieza y desinfección. Su uso intensivo puede provocar la contaminación de los medios acuáticos. Esto nos ha llevado a investigar su potencial efecto toxico sobre la microalga dulceacuícola S. quadricauda. Para este objetivo, se estudió el crecimiento, la concentración de pigmentos fotosintéticos y la actividad celular para detectar la toxicidad de cinco concentraciones del desinfectante comprendidas entre 0.25-4 mg L-1 en cultivos discontinuos. Los resultados obtenidos muestran que la tasa de crecimiento de S. quadricauda disminuye significativamente en presencia de cloruro de benzalconio, y se obtiene un valor de EC50 de 3.75 mg L-1 después de 192 horas de exposición. El contenido celular de pigmentos también está afectado negativamente, decreciendo significativamente en cultivos expuestos a concentraciones superiores a 1 mg L-1; esto puede ser debido al mecanismo de acción del desinfectante sobre las membranas tilacoidales. La actividad celular también se ha visto afectada por la presencia del desinfectante.[Abstract] Benzalkonium chloride is often used as a cleaning and desinfecting product. The intensive use of this disinfectant may cause pollution of aquatic environments. Therefore, the potenctial toxic effect of benzalconium chloride on the freshwater microalgae S. quadricauda was investigated. Growth, photosynthetic pigments content and cellular activity were assayed with five disinfectant concentrations between 0.25-4 mg L-1 on batch cultures. Control cultures withouth disinfectant were also included. Growth rate of S. quadricauda significantly decreased in presence of benzalkonium chloride, and the EC50 was 3.75 mg L-1 after 192 hours of exposure. Photosynthetic pigments content was also adversely affected, decreasing significantly in cultures exposed to concentrations above 1 mg L- 1. This decrease may be due to the mechanism of action of the disinfectant on thylakoid membranes. Cellular activity was also affected by the presence of the disinfectant.Traballo fin de grao (UDC.CIE). Bioloxía. Curso 2014/201

Quantification of mitochondrial DNA in plasma in Human Immunodeficiency Virus (HIV) infected patients

[Resumen:] Objetivos: Evaluar los niveles de ADN mitocondrial (ADNmt) circulante en plasma en pacientes con infección por VIH y su posible implicación como biomarcador del estado inmunológico-virológico. Métodos: Estudio observacional realizado en una cohorte de pacientes con infección crónica por VIH, en seguimiento clínico en el Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña (CHUAC). El ADNmt se aisló a partir de plasma usando DNAeasy blood & tissue kit. Los niveles de ADNmt se midieron empleando un ensayo cuantitativo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a tiempo real analizando el número de copias de gen ribosómico 12S mitocondrial. Además, se evaluó la carga viral del VIH (ARN-VIH) y el recuento de linfocitos T-CD4+ de cada una de las muestras. Se incluyeron variables epidemiológicas y clínicas de los pacientes para el análisis. Resultados: Se incluyeron 235 pacientes con infección por VIH. El 31,9% eran naïve a tratamiento antirretroviral (TAR) mientras que el resto de los pacientes recibían TAR. Dentro de este último grupo presentaban: el 20,9% niveles de ARN-VIH entre 20-200 copias/mL, el 23% niveles inferiores a 20 copias/mL (detectable no cuantificable, DNQ) y el 24,2% viremia no detectable (ND). Los niveles de ADNmt en los diferentes grupos de pacientes fueron: 217±656 copias/μl en pacientes naïve, 149±440 copias/μL en pacientes con ARN-VIH entre 20-200 copias/mL, 265±723 copias/μL en DNQ y 643±1310 copias/μL en ND (p = 0,045). Los niveles plasmáticos de ADNmt entre los pacientes ND y los naïve presentaron diferencias significativas (p = 0,010). Los niveles de ADNmt se asociaron de forma inversa con los niveles de ARN-VIH (Spearman's rho -0,191, p = 0,003) y de forma directa con el recuento de linfocitos T-CD4+ (Spearman's rho 0,131, p = 0,046). Conclusión: Los pacientes VIH que habían alcanzado la supresión virológica con TAR tenían niveles más altos de ADNmt que los pacientes naïve. Por otra parte, los niveles plasmáticos elevados de ADNmt se asociaron con menores niveles de ARN-VIH y mayor recuento de linfocitos T-CD4+. Estos datos sugieren que los niveles de ADNmt podrían ser un marcador de la replicación del VIH.[Abstract:] Objective: To evaluate plasma mitochondrial DNA (mtDNA) levels among HIV-patients and its potential role as biomarker of immune-virological status. Methods: An observational study performed in a cohort of patients with chronic HIV infection in follow-up at the Hospital Complex of A Coruña. DNA was isolated from plasma using DNAeasy blood&tissue kit (Qiagen, Germany) and mtDNA levels were assessed using a quantitative Real-Time PCR assay by measuring the copy number of mitochondrial 12S ribosomal RNA gene. In addition, HIV-RNA and lymphocytes T-CD4+ counts were evaluated in the same blood sample. Results: A total of, 235 HIV-patients were included. Overall, 31,9% were naïve while the remaining patients were under ART: 20,9% with 20-200 copies/mL of HIV-RNA, 23% had HIV-RNA <20 copies/mL (detected not quantified-DNQ) and 24,2% had HIV-RNA not-detected (ND). Mean plasma mtDNA was 149±440 copies/μL for 20-200 copies/mL of HIV-RNA, 217±656 copies/μL for naïve, 265±723 copies/μL for DNQ, and 643±1310 copies/μL for ND (p=0,045). In addition, differences were observed between plasma mtDNA levels among ND HIV-patients compared with naïve (p=0,010) and also with 20-200 copies/mL of HIV-RNA under ART (p=0,057). Interestingly, mtDNA levels were inversely associated with HIV-RNA levels (Spearman´s rho -0,191, p=0,003) and directly associated with lymphocytes T-CD4+ count (Spearman´s rho 0,131, p=0,046). Conclusions: HIV-patients with a complete virological suppression under ART had significant higher mtDNA levels than naïve patients. Moreover, Increased plasma mtDNA levels are associated with lower HIV-RNA levels and higher lymphocytes T-CD4+ count. These data suggest that plasma mtDNA levels could be a surrogate marker of HIV replication.Traballo fin de mestrado (UDC.CIE). Biotecnoloxía avanzada. Curso 2016/201