Kinetic and thermodynamic characterization of the interactions between the components of human plasma kinin-forming system and isolated and purified cell wall proteins of Candida albicans

Cell wall proteins of Candida albicans, besides their best known role in the adhesion of this fungal pathogen to host's tissues, also bind some soluble proteins, present in body fluids and involved in maintaining the biochemical homeostasis of the human organism. In particular, three plasma factors - high-molecular-mass kininogen (HK), factor XII (FXII) and prekallikrein (PPK) - have been shown to adhere to candidal cells. These proteins are involved in the surface-contact-catalyzed production of bradykinin-related peptides (kinins) that contribute to inflammatory states associated with microbial infections. We recently identified several proteins, associated with the candidal cell walls, and probably involved in the binding of HK. In our present study, a list of potential FXII- and PPK-binding proteins was proposed, using an affinity selection (on agarose-coupled FXII or PPK) from a whole mixture of β-1,3-glucanase-extrated cell wall-associated proteins and the mass-spectrometry protein identification. Five of these fungal proteins, including agglutinin-like sequence protein 3 (Als3), triosephosphate isomerase 1 (Tpi1), enolase 1 (Eno1), phosphoglycerate mutase 1 (Gpm1) and glucose-6-phosphate isomerase 1 (Gpi1), were purified and characterized in terms of affinities to the human contact factors, using the surface plasmon resonance measurements. Except Gpm1 that bound only PPK, and Als3 that exhibited an affinity to HK and FXII, the other isolated proteins interacted with all three contact factors. The determined dissociation constants for the identified protein complexes were of 10-7 M order, and the association rate constants were in a range of 104-105 M-1s-1. The identified fungal pathogen-host protein interactions are potential targets for novel anticandidal therapeutic approaches

Aspartic proteases and major cell wall components in Candida albicans trigger the release of neutrophil extracellular traps

Neutrophils use different mechanisms to cope with pathogens that invade the host organism. The most intriguing of these responses is a release of neutrophil extracellular traps (NETs) composed of decondensed chromatin and granular proteins with antimicrobial activity. An important potential target of NETs is Candida albicans—an opportunistic fungal pathogen that employs morphological and phenotype switches and biofilm formation during contact with neutrophils, accompanied by changes in epitope exposition that mask the pathogen from host recognition. These processes differ depending on infection conditions and are thus influenced by the surrounding environment. In the current study, we compared the NET release by neutrophils upon contact with purified main candidal cell surface components. We show here for the first time that in addition to the main cell wall-building polysaccharides (mannans and β-glucans), secreted aspartic proteases (Saps) trigger NETs with variable intensities. The most efficient NET-releasing response is with Sap4 and Sap6, which are known to be secreted by fungal hyphae. This involves mixed, ROS-dependent and ROS-independent signaling pathways, mainly through interactions with the CD11b receptor. In comparison, upon contact with the cell wall-bound Sap9 and Sap10, neutrophils responded via a ROS-dependent mechanism using CD16 and CD18 receptors for protease recognition. In addition to the Saps tested, the actuation of selected mediating kinases (Src, Syk, PI3K, and ERK) was also investigated. β-Glucans were found to trigger a ROS-dependent process of NET production with engagement of Dectin-1 as well as CD11b and CD18 receptors. Mannans were observed to be recognized by TLRs, CD14, and Dectin-1 receptors and triggered NET release mainly via a ROS-independent pathway. Our results thus strongly suggest that neutrophils activate NET production in response to different candidal components that are presented locally at low concentrations at the initial stages of infection. However, NET release seemed to be blocked by increasing numbers of fungal cells

Alloimmunizacja u chorych na niedokrwistość autoimmunohemolityczną oraz genotypowanie krwinek czerwonych w celu udoskonalenia doboru krwi do przetoczeń

Wstęp: Autoprzeciwciała typu ciepłego występujące w surowicy chorych na niedokrwistość autoimmunohemolityczną powodują niezgodność w próbie zgodności i utrudniają wykrycie klinicznie istotnych alloprzeciwciał, stwarzając ryzyko hemolitycznego powikłania poprzetoczeniowego. Dobór krwi do przetoczenia dla tych chorych wymaga szczególnych procedur dla większego bezpieczeństwa transfuzji. Materiał i metody: Analizowano częstość alloimmunizacji u 163 chorych z NAIH (155 z autoprzeciwciałami typu ciepłego, 8 typu mieszanego). U wszystkich chorych określano fenotyp w antygenach Rh, K, konieczny dla doboru krwi do przetoczenia, a u 53 spośród nich, badano ponadto fenotyp Kidd, Duffy, S, s, k jak również stosowano metodę genotypowania krwinek czerwonych. Wyniki: Alloprzeciwciała istotne klinicznie wykryto u 31 chorych (19%). Łącznie zidentyfikowano 42 przeciwciała o różnej swoistości (u 7 chorych występowały przeciwciała o dwóch lub więcej swoistościach) z układów grupowych: Rh, Kell, Kidd, Duffy, MNS i LW. U 14 chorych z alloprzeciwciałami, wykrycie ich wymagało uprzedniego wyadsorbowania autoprzeciwciał z surowicy metodą auto- lub alloadsorpcji. W grupie 53 chorych, fenotyp Rh, K, Kidd i S udało się określić u 37 (70%) w testach serologicznych, zaś fenotyp rozszerzony o antygeny Duffy, s i k, tylko u 9 chorych (17%). Wyniki fenotypowania były zgodne z oznaczeniami genetycznymi. U pozostałych chorych o rozszerzonym fenotypie wnioskowano na podstawie genotypowania, ponieważ wyniki serologiczne nie były miarodajne - dwie populacje krwinek (przetoczenia krwi w ostatnich 3 miesiącach) lub/i autoaglutynacja krwinek chorego. Wnioski: Wprowadzenie metod genotypowania obok metod fenotypowania okazało się konieczne dla ustalenia rozszerzonego fenotypu krwinek czerwonych u chorych z NAIH. Badania te usprawniają dobór krwi do przetaczania i zwiększają bezpieczeństwo transfuzji.Background: The presence of warm autoantibodies in the sera of patients with autoimmune haemolytic anaemia are the cause of incompatibility in the compatibility test, which produces difficulties in the detection of clinically significant alloantibodies thus generating the risk of haemolytic transfusion reactions. For such patients the selection of red cells for transfusion requires special procedures to ensure safety. Material and methods:Alloimmunization was analyzed in 163 AIHA patients (155 with warm type and 8 with mixed type of autoantibodies). In all patients, red cell phenotyping for Rh, K, was performed prior to transfusion and in 53 of them, red cells were phenotyped additionally in Kidd, Duffy, S, s, k with genotyping as well. Results: Clinically significant alloantibodies were found in 31 patients (19%). In all, 42 antibodies of different specificities were identified (in 7 cases we detected antibodies with two or more specificities) within the following blood group systems: Rh, Kell, Kidd, Duffy, MNS and LW. In 14 of the alloimmunized patients, auto- or alloadsorption was required for alloantibody detection. In the group of 53 patients, phenotyping of Rh, K, Kidd and S antigens was successful in 37 patients (70%) with serological tests only, whereas the extended phenotype for Duffy, s, k antigens was successful only in 9 patients (17%). In each case, the genotype results were consistent with the phenotype. In the remaining patients, the results of extended phenotyping with serological method proved unreliable, due either to mixed-field reactions (after recent transfusion < 3 months) or autoagglutination. Genotyping was useful for predicting the phenotype in such cases. Conclusions: In addition to phenotyping, genotyping of red cells is necessary for establishing the extended phenotype in AIHA patients. Such procedure is important for blood transfusion safety

Określenie zapotrzebowania na prace scalenia gruntów we wsiach o wstęgowym układzie gruntów

In the European Union, the restructuring of rural areas based on the consolidation process is a common activity, and therefore Poland’s membership in the EU has enabled the development of these zones through financial support for the analysed activities. The development of agriculture in Poland, as well as its production capabilities, are spatially very diverse. One of the reasons for this is the process of long-term transformations of the agricultural economy in areas with a different socio-economic situation, lasting for many years. Land consolidation works are aimed at creating more favourable farming conditions in agriculture and forestry by improving the area structure of farms, forests and forest lands, rational land layout, adapting property borders to the land drainage system, roads and land relief. The research was carried out in the rural commune of Żarnów, located in the Opoczno poviat, in the Łódź voivodship, which included 41 registration precincts with a total area of 14,106.0 hectares. In order to create a ranking of urgency of performed land consolidation and exchange works in the Żarnów commune, 32 most important factors characterizing individual villages were used previously. A ranking was made using the zero unitarisation and Hellwig’s methods. The article is a continuation of research, where the authors identified spatial and technical parameters of agricultural land in the villages of Central Poland on the example of the examined commune.W krajach Unii Europejskiej restrukturyzacja obszarów wiejskich na bazie procesu scaleniowego jest działaniem powszechnym, a zatem członkostwo Polski w UE umożliwiło rozwój tych stref poprzez finansowe wsparcie analizowanych działań. Rozwój rolnictwa w Polsce, a także jego możliwości produkcyjne, są przestrzennie bardzo zróżnicowane. Jednym z powodów takiej sytuacji jest proces długotrwałych przekształceń gospodarki rolnej na obszarach o odmiennej sytuacji społeczno-gospodarczej, trwających od wielu lat. Prace scalenia gruntów maja na celu tworzenie korzystniejszych warunków gospodarowania w rolnictwie i leśnictwie poprzez poprawę struktury obszarowej gospodarstw rolnych, lasów i gruntów leśnych, racjonalne ukształtowanie rozłogów gruntów, dostosowanie granic nieruchomości do systemu melioracji wodnych, dróg oraz rzeźby terenu. Badania przeprowadzono na terenie gminy wiejskiej Żarnów, położonej w powiecie opoczyńskim, w województwie łódzkim, w skład której wchodziło 41 obrębów ewidencyjnych o łącznej powierzchni 14106,0 hektarów. W celu stworzenia rankingu pilności wykonywanych prac scalenia i wymiany gruntów w gminie Żarnów, wykorzystano opracowane wcześniej 32 najistotniejsze czynniki charakteryzujące poszczególne miejscowości. Dokonano opracowania rankingu, do którego wykorzystano metody unitaryzacji zerowej oraz Hellwiga. Artykuł jest kontynuacja badań, gdzie autorzy dokonali identyfikacji parametrów przestrzenno-technicznych gruntów rolnych we wsiach Polski centralnej na przykładzie badanej gminy

Identyfikacja parametrów przestrzenno-technicznych gruntów rolnych we wstęgowym układzie gruntów

Each developed area in which there are various objects is characterized by specific structures that together form a broadly understood spatial structure. It covers spatial and natural objects as well as those resulting from human activities. Unfortunately, the spatial structure of the Polish countryside seems to be increasingly unfavourable. Rural areas in different regions of Poland are characterized by different spatial parameters. Therefore, it is necessary to carry out detailed research and analysis enabling the selection of appropriate factors describing the area under study in terms of determining the urgency of undertaking comprehensive land consolidation and exchange works, as rural areas in Poland need deep structural changes related to agricultural production, farm size, shaping land layout, demographic, spatial and institutional structure. The selection of factors describing the examined villages was made on the basis of a comprehensive analysis of the natural, social and economic conditions of the villages on the basis of data obtained from the Land and Property Register of the County Office in Opoczno and data from the Żarnów commune. The research results will allow the selection of the most important factors characterizing the spatial structure of the research area. The purpose of the paper is to identify the spatial and technical parameters of agricultural lands in the villages of Central Poland on the example of the Żarnów commune, which will be the starting point for determining the needs of land consolidation works in 41 villages of the Żarnów commune, located in the Opoczno poviat, the Łódź voivodship.Każdy zagospodarowany obszar, na którym występują różnorodne obiekty charakteryzuje się określonymi strukturami, które łącznie tworzą szeroko pojętą strukturę przestrzenną. Swym zasięgiem obejmuje ona obiekty przestrzenne, przyrodnicze i te, które powstały na skutek działalności ludzkiej. Niestety struktura przestrzenna polskiej wsi wydaje się być coraz to bardziej niekorzystna. Obszary wiejskie w różnych regionach Polski charakteryzuje się odmiennymi parametrami przestrzennymi. Dlatego też koniecznym jest przeprowadzenie szczegółowych badań i analiz pozwalających na dobór odpowiednich czynników opisujących badanych obszar pod kątem określenia potrzeb pilności podejmowania kompleksowych prac scalenia i wymiany gruntów, gdyż obszary wiejskie w Polsce potrzebują głębokich zmian strukturalnych, związanych zarówno z produkcją rolną, jak i wielkością gospodarstw, ukształtowaniem ich rozłogów, strukturą demograficzną, przestrzenną i instytucjonalną. Wyboru czynników opisujących badane wsie dokonano na podstawie przeprowadzonej kompleksowej analizy warunków przyrodniczych, społecznych, gospodarczych i ekonomicznych wsi na podstawie danych pozyskanych ze Ewidencji Gruntów i Budynków Starostwa Powiatowego w Opocznie oraz danych z Gminy Żarnów. Wyniki badań pozwolą na wytypowanie najistotniejszych czynników charakteryzujących strukturę przestrzenną obszaru badań. Celem artykuł jest identyfikacja parametrów przestrzenno-technicznych gruntów rolnych we wsiach Polski centralnej na przykładzie gminy Żarnów, które będą stanowiły bazę wyjściowa do określenia potrzeb wykonywania prac scalenia gruntów w 41 wsiach gminy Żarnów, położonej w powiecie opoczyńskim, województwo łódzkie

Krakowskie Studia Międzynarodowe nr 4, 2010 (Wyzwania bezpieczeństwa, integracji europejskiej oraz współpracy międzynarodowej w XXI w.)

Autorzy w swoich rozważaniach skupili się m.in. na wymiarze globalnym i regionalnym procesów polityczno-prawnych, społeczno-gospodarczych i militarnych w ujęciu zarówno historycznym, jak i współczesnym. Omówili także strategie państw, założenia doktrynalne partii i ruchów politycznych. Zaakcentowali rolę instytucji i organizacji międzynarodowych w działaniach na rzecz bezpieczeństwa i współpracy międzynarodowej

Characterization of the interactions between human high-molecular-mass kininogen and cell wall proteins of pathogenic yeasts Candida tropicalis

Candida tropicalis is one of the most frequent causes of serious disseminated candidiasis in human patients infected by non-albicans Candida species, but still relatively little is known about its virulence mechanisms. In our current study, the interactions between the cell surface of this species and a multifunctional human protein - high-molecular-mass kininogen (HK), an important component of the plasma contact system involved in the development of the inflammatory state - were characterized at the molecular level. The quick release of biologically active kinins from candidal cell wall-adsorbed HK was presented and the HK-binding ability was assigned to several cell wall-associated proteins. The predicted hyphally regulated cell wall protein (Hyr) and some housekeeping enzymes exposed at the cell surface (known as "moonlighting proteins") were found to be the major HK binders. Accordingly, after purification of selected proteins, the dissociation constants of the complexes of HK with Hyr, enolase, and phosphoglycerate mutase were determined using surface plasmon resonance measurements, yielding the values of 2.20 × 10-7 M, 1.42 × 10-7 M, and 5.81 × 10-7 M, respectively. Therefore, in this work, for the first time, the interactions between C. tropicalis cell wall proteins and HK were characterized in molecular terms. Our findings may be useful for designing more effective prevention and treatment approaches against infections caused by this dangerous fungal pathogen