Análisis RAPD de la diversidad genética de Theobroma cacao L. de una población del Litoral Ecuatoriano

En este estudio, los análisis con marcadores RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA) fueron usados para estimar la diversidad genética yla relación de 20 accesiones de Theobroma cacao L. de la variedad Nacional en la finca (La Buseta) ubicada en la Parroquia Tenguel provincia del Guayas. Las plantas fueron seleccionadas con criterios de productividad, resistencia, susceptibilidad a enfermedades causadas por hongos como Ceratocystis fimbriata, Moniliophtora roreri y Crinipelis perniciosa. Se utilizaron 14 primers, de los cuales nueve amplificaron, generando 67 bandas de las cuales 59 (88%) fueron polimórficas. Losresultados indican la formación de dos grupos de accesiones A y B, en el grupo A se incluyen dos accesiones y, en el grupo B se encuentran 18 de los cuales incluyen 2 subgrupos B1 y B2. E el subgrupo B1 se incluye la accesión (L-22-H-40), y en el subgrupo B2 están incluidas las accesiones que poseen características de productividad. El nivel de diversidad génica más alto se obtuvo con los primers OPC 04 (0,80), OPC 07 (0,82) y el nivel más bajo fue OPC 01 (0,37). Las accesiones (L-22-H-40; 0,75; L-34-H-07; 0,86) y el (L-42-H-60; 0.72) presentaron los niveles de variabilidad génica más altas, siendo los valores más bajos los mostrados por las accesiones (L-26-H-64; 0,48) y (L-23-H63; 0,47). El valor de la diversidad total (Ht) obtenida para las 20 accesiones de T. cacao L. mediante RAPD fue de 0,636

Implementación de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) Para el Diagnóstico de la Brucelosis de Bovinos en el Ecuador

In the present work I implement the technique of PCR for the detection of Brucella abortus, in blood samples, comparison with the Rose of bengal test. The amplification of the DNA was made using three oligonucleotidos homologous corresponding ones to the sequence 16 ARNr de Brucella abortus, giving a 725 amplification of 900 and pb respectively. A total of 172 blood samples was collected of 4 cattle ranches with historical prevalence of brucelosis presence. Were 142 refusals with the test of serológia and 143 with PCR, 30 were positive with the Pink serológica test of Bengal and 29 left positive with PCR. All the animals that left positives with Rose Bengal, 4 presented clinical symptoms as they are; weak abortions, bull calves, low production of meat and milk. The other 26 animals were negative with PCR and these animals did not present/display the clinical symptoms. From the 142 animals that gave negative with Rose of Bengal, 25 were positive with PCR. The results show that the detection of the positive animals by means of the PCR was more you specify and sensible that the serológica test of Rose of Bengal, therefore is a very useful tool in the diagnosis of Brucella abortus.En el presente trabajo se implementó la técnica de PCR para la detección de Brucella abortus, en muestras de sangre, en comparación con la prueba Rosa de bengala. La amplificación del ADN se realizó utilizando tres oligonucleotidos homólogos correspondientes a la secuencia 16 ARNr de Brucella abortus, dando una amplificación de 900 y 725 pb respectivamente. Un total de 172 muestras de sangre fueron recolectadas de 4 hatos con prevalencia histórica de presencia de brucelosis. Resultaron 142 negativas con la prueba de serológia y 143 con PCR, 30 resultaron positivas con la prueba serológica Rosa de bengala y 29 salieron positivas con PCR. Todos los animales que salieron positivos con Rosa de bengala, 4 presentaban síntomas clínicos como son; abortos, terneros débiles, baja producción de carne y leche. Los otros 26 animales resultaron negativos con PCR y estos animales no presentaron los síntomas clínicos. De los 142 animales que dieron negativo con Rosa de bengala, 25 resultaron positivos con PCR. Los resultados muestran que la detección de los animales positivos mediante la PCR fue más especificas y sensibles que la prueba serológica de Rosa de bengala, por lo tanto es una herramienta muy útil en el diagnóstico de Brucella abortus

Estudio de la Diversidad Genética de 20 Accesiones de Cacao (Theobroma cacao L.) Mediante AP-PCR de la Colección del Centro del Cacao de Aroma Tenguel en la Finca Experimental La Buseta

The present study consisted of determining the genetic diversity based on the scoreboards RAPD's (Random Amplification of Polymorphic DNA) of 20 accessions of cocoa (Theobroma cocoa L.) of the National variety, with characteristics of productivity, and levels of resistance, susceptibility and tolerance to the principal diseases caused by fungi as Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri and Crinipelis perniciosa. This germoplasma of thief is located in the Center of Cocoa of Aroma Tenguel, in the experimental estate "The Buseta" property of the Technical State University of Quevedo. The extraction of DNA realized it using the protocol of Doyle and Doyle (1990) with some modifications. 14 oligonucleótidos were used for the obtaining scoreboard RAPD's, of which 9 amplified reproducible products OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC- 13 y OPA-7. The products of amplification were migrated in gels of agarosa to 1.2 % to 90 volts for an hour. The molecular scoreboards were analyzed by means of a counterfoil of binary information to calculate the genetic distances. Nine used powderhorns generated 67 bands of which 59 (88 %) was polymorphic. The dendrograma showed two groups A and B, in the group A include two accessions, and in the group B the 18 remaining ones are which includes 2 subgroups B1 and B2 in the subgroup B1 includes the accession (L-22-H-40), and in the subgroup B2 there are included the accessions that possess characteristics of productivity. The level of diversity more high were obtained with the oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). The powder-horn that brought (reported) the lowest level was OPC 01 (0.37). The accessions that presented the levels of variability more high places were the (L-22-H-40) (Or 75), (L-34-H-07) (0.86) and the (L-42-H-60) (0.72) whereas the lowest values them showed the accessions (L-26- H-64) (Or 48) and (L-23-H63) (Or 47). The value of the total diversity (HT) obtained for 20 accessions of T. cocoa by means of RAPD was of 0.636.El presente estudio consistió en determinar la diversidad genética basada en los marcadores RAPD´s (Random Amplification of Polymorphic DNA) de 20 accesiones de cacao (Theobroma cacao L.) de la variedad Nacional, con características de productividad, y niveles de resistencia, susceptibilidad y tolerancia a las principales enfermedades causadas por hongos como Ceratocistys fimbriata, Moniliophtora roreri y Crinipelis perniciosa. Este germoplasma de cacao se encuentra localizado en el Centro de Cacao de Aroma Tenguel, en la Finca Experimental �La Buseta� propiedad de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo. La extracción de ADN se la realizó utilizando el protocolo de Doyle & Doyle (1990) con algunas modificaciones. 14 oligonucleótidos fueron utilizados para la obtención de marcadores RAPD´s, de los cuales 9 amplificaron productos reproducibles OPA-15, OPC-07, OPC-9, OPC-4, OPC-3, OPC-1, OPA-12 OPC-13 y OPA-7. Los productos de amplificación fueron migrados en geles de agarosa al 1.2% a 90 voltios por una hora. Los marcadores moleculares fueron analizados por medio de una matriz de datos binarios para calcular las distancias genéticas. Los nueve cebadores utilizados generaron 67 bandas de las cuales 59 (88%) fueron polimórficas. El dendrograma mostró dos grupos A y B, en el grupo A se incluyo dos accesiones, y en el grupo B se encuentran los 18 restantes el cual incluye 2 subgrupos B1 y B2 en el subgrupo B1 se incluye la accesión (L-22-H-40), y en el subgrupo B2 están incluidas las accesiones que poseen características de productividad. El nivel de diversidad más alto se obtuvo con los oligonucleótidos OPC 04 (0.80), OPC 07 (0.82). El cebador OPC 01 (0.37) reportó el nivel más bajo. Las accesiones (L-22-H-40) (O.75), (L-34-H-07) (0.86) y el (L-42-H-60) (0.72) presentaron los niveles de variabilidad más altos, siendo los valores más bajos los mostrados por las accesiones (L-26-H-64) (O.48) y (L-23-H63) (O.47). El valor de la diversidad total (HT) obtenida para las 20 accesiones de T. cacao mediante RAPD fue de 0.636