Online solid-phase extraction–liquid chromatography–mass spectrometry to determine free sterols in human serum

n automated method for analyzing free non-cholesterol sterols in human serum using online solid phase extraction–liquid chromatography–mass spectrometry is proposed herein. The method allows the determination of three phytosterols (sitosterol, stigmasterol and campesterol) and two cholesterol precursors (desmosterol and lanosterol). The analysis of sterols in human serum is critical in the study of cholesterol-related disorders, such as inherited familial hypercholesterolemias. Special effort was made to isolate the analytes from the serum lipoproteins, their natural conveyance through the bloodstream. The sample treatment consisted of a Bligh–Dyer extraction followed by dilution of the extract. This treatment allowed the sample to be injected into the online system and ensured the correct detection of the analytes, while avoiding the matrix effects commonly related to serum samples. The analytical performance showed linear ranges that covered two orders of magnitude, with correlation coefficients above 0.99. Limits of detection and quantification ranged from 0.2 ng/mL to 13 ng/mL and from 1.0 ng/mL to 43 ng/mL, respectively. Recovery when spiking serum with a half or a tenth of the average concentration reported in human serum ranged from 99% to 111% and from 102% to 120%, respectively. Intra-day precision and inter-day precision were below 20%

Desarrollo de métodos analíticos para el análisis de precursores de colesterol, fitoesteroles e hidroxiesteroles de interés biológico en el estudio del metabolismo del colesterol

La determinación de esteroles en matrices biológicas supone un reto analítico importante ya que son compuestos que se encuentran a baja concentración respecto al colesterol tanto en los tejidos como en los fluidos estudiados (hígado, suero y plasma, respectivamente); lo que siempre va a suponer una interferencia en el análisis. Por otro lado, estos analitos son compuestos poco volátiles, por lo que tradicionalmente han sido determinados mediante cromatografía de gases. Esto suponía alargar el proceso de tratamiento de muestra para transformarlos en sus formas volátiles. Con la introducción de la cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas se abrió la posibilidad de analizar estos compuestos en su forma nativa, lo que facilitó el análisis y el tratamiento de muestra. El objetivo de esta Tesis fue desarrollar métodos rápidos y automatizados utilizando la cromatografía de líquidos acoplada a la espectrometría de masas, para determinar esteroles en matrices biológicas (hígado, suero y plasma) con el fin de profundizar en el estudio de enfermedades relacionadas con las alteraciones del metabolismo del colesterol. Para ello, se estudiaron alternativas a la reacción de hidrólisis alcalina (frecuentemente llevada a cabo en el tratamiento de muestra para la determinación de esteroles) realizándola con la asistencia de los ultrasonidos. También se desarrolló un método alternativo a la hidrólisis alcalina realizando una hidrólisis enzimática utilizando diversas esterasas. Posteriormente, se desarrolló un sistema online de tratamiento de muestra; automatizando así el proceso de limpieza previo a la introducción en el cromatógrafo gracias a la integración del cartucho de extracción en fase sólida en el mismo sistema cromatográfico. Por último, se buscaron nuevos compuestos marcadores de enfermedades relacionadas con el metabolismo del colesterol gracias al empleo de un cromatógrafo de líquidos acoplado a un espectrómetro de masas con analizador tiempo de vuelo. Para todos los métodos desarrollados se determinaron sus características analíticas comprobando su adecuación para determinar este tipo de analitos en muestras biológicas

The role of iturin A from B. amyloliquefaciens BUZ-14 in the inhibition of the most common postharvest fruit rots

The aim of this work was to elucidate the role of the secondary metabolites produced by B. amyloliquefaciens BUZ-14 against B. cinerea, M. fructicola, M. laxa, P. digitatum, P. italicum and P. expansum both in vitro and in planta. The entire cell free supernatant (CFS) and the lipopeptide fraction (LPF) showed similar antifungal activities, completely inhibiting all the fungi at dilutions of 1:24 or even lower, whereas the non-butanolic fraction (NBF) barely inhibited the fungi. However, when the LPF and CFS were applied on fruit, only brown rot in peaches and blue rot in apples was totally inhibited. The main families of metabolites in the LPF were iturin A, fengycin and surfactin with maximum concentrations of 407, 853 and 658¿µg¿mL-1, respectively. Subsequently, a TLC-bioautography revealed iturin A as the key metabolite in the inhibitions and allowed us to establish in vivo MICs of 16.9 and 33.9¿µg¿mL-1 for Monilinia species and P. expansum, respectively. The application of 24 h-old BUZ-14 cultures suppressed brown rot in peaches and also blue rot in apples but failed to inhibit the other diseases. However, BUZ-14 was only able to grow and produce iturin A in peaches so we can deduce that the amount of iturin A brought with the cultures (36¿±¿14¿µg¿mL-1) could be enough to control both diseases. The strong antifungal activity of the iturin A present in the BUZ-14 CFS suggests that it could be successfully used for postharvest disease control. However, future research is necessary to maximize the iturin A production by B. amyloliquefaciens BUZ-14 in order to optimize a commercial application

Desarrollando aptitudes docentes

El presente trabajo titulado “Desarrollando aptitudes docentes” comprende una reflexión sobre la realización del Máster en Profesorado de Secundaria, concretamente en la especialidad de Procesos Sanitarios, así como del proceso de adquisición de las competencias que requiere el ejercicio de la profesión docente.Dicha reflexión se aborda desde las experiencias vividas durante las asignaturas de Practicum I, II y III, las más adecuadas también para demostrar la adquisición de todos los conocimientos que están integrados en el resto de las disciplinas del Máster.En el apartado del Practicum I se discute en primera persona, la inmersión en el contexto de la actividad docente en el marco de un centro de Educación Secundaria y Formación Profesional como es el IES Miguel Catalán de Zaragoza. El proceso relativo a la toma de las decisiones correspondientes a la organización y planificación de los procesos de enseñanza-aprendizaje a través del diseño de una Unidad de Trabajo y la impartición de la docencia al grupo de alumnos de primer curso del Ciclo Formativo de Grado Superior en Radioterapia y Dosimetría, dentro del Módulo Profesional de Protección Radiológica, se discute durante la reflexión realizada tras el periodo del Practicum II.La evaluación, innovación e investigación de los propios procesos de enseñanza-aprendizaje y el permanente objetivo de la mejora continua para un correcto desempeño de la profesión docente, se muestra durante la explicación de las actividades realizadas durante el Practicum III.Finalmente, se presentan las conclusiones obtenidas a lo largo de este Máster, destacando la importancia de mantener la motivación personal en lo que se hace para poder transmitirla y siendo consciente del esfuerzo personal que requiere la profesión docente. Por ello como propuesta de futuro, se presenta un plan de formación continua.<br /