Thiết kế hệ thống biểu hiện ổn định gen mã hóa endoglucanase trong Bacillus subtilis 168M

Beta-D-1,4-endoglucanase plays an important role in biomass hydrolysis, the microorganisms in nature can synthesize this enzyme at very low activity. Together with development of biotechnology, a low enzymatic activity problem has been overcome by using the recombinant method. Several expression systems for β-D-1,4-endoglucanase were designed for use of different cell lines. In this paper, we have constructed a stable expression system for β-D-1,4-endoglucanase gene in Bacillus subtilis 168M. Three main components including the promoter (180 bp) of α–amylase gene from the host strain B. subtilis 168M, the whole open reading frame of β-D-1,4-endoglucanase (1,500 bp) gene from B. amyloliquefacient VLSH08 strain, and the terminator (81 bp) of α–amylase gene from B. licheniformis 3BT2 strain, were reconstructed via megaprimer method. Subsequently, this new reconstitution was ligated into a modified pHT43 vector which was cleaved its own promoter and signal peptide fragment (AmyQ) and transformed into the compotent B. subtilis 168M. The recombinant B. subtilis 168M carrying pHT43[Bspr.endo.Blter] vector showed β-D-1,4-endoglucanase activity at 7 U/ml, 23 times higher than that of the wild type B. amyloliquefacient VLSH08 strain. The successful design and expression of the expression system β-D-1,4-endoglucanase isolated from B. amyloliquefacient strain VLSH08 in pHT43 vector carrying the promoter of the α- amylase gene from B. subtilis strain 168M and the terminator of the α-amylase gene from B. licheniformis strain 3BT2, actively contribute effectively expression of β-D-1,4-endoglucanase for use.Trong thuỷ phân sinh khối lignocellulose, β-D-1,4-endoglucanase là một trong những enzyme quan trọng nhất. Tuy nhiên, các chủng vi khuẩn trong tự nhiên thường có hoạt độ β-D-1,4-endoglucanase thấp, do đó việc ứng dụng công nghệ tái tổ hợp để nâng cao hiệu suất tổng hợp enzyme đích là cần thiết. Một số hệ thống biểu hiện gen β-D-1,4-endoglucanase đã được thiết kế sử dụng các dòng tế bào chủ khác nhau. Bài báo này trình bày kết quả thiết kế hệ thống biểu hiện gen β-D-1,4-endoglucanase ổn định trong tế bào Bacillus subtilis 168M. Ba thành phần chính được tổ hợp với nhau dựa trên phương pháp megaprimer bao gồm promoter (180bp) của gen α–amylase từ chủng chủ B. subtilis 168M, toàn bộ khung đọc mở của gen β-D-1,4-endoglucanase (1500 bp) từ chủng B. amyloliquefacient VLSH08 với đoạn terminator (81 bp) tổng hợp của gen α–amylase từ chủng B. licheniformis 3BT2. Toàn bộ tổ hợp này có độ dài 1800 bp được đưa vào vector pHT43 đã được cắt bỏ trước đoạn promoter và peptide tín hiệu và biến nạp vào tế bào khả biến B. subtilis 168M. Chủng B. subtilis 168M tái tổ hợp mang vector pHT43[Bspr.endo.Blter] có hoạt tính β-D-1,4-endoglucanase là 7 U/ml, cao hơn 23 lần so với hoạt tính enzyme từ chủng tự nhiên B. amyloliquefacient VLSH08. Việc thiết kế và biểu hiện thành công thống biểu hiện gen β-D-1,4-endoglucanase của chủng B. amyloliquefacient VLSH08 trong vector pHT43 mang đoạn promoter của gen α- amylase từ chủng B. subtilis 168M và terminator của gen α-amylase từ chủng B. licheniformis 3BT2 góp phần chủ động tổng hợp hiệu quả β-D-1,4-endoglucanase hoạt tính để sử dụng

Các yếu tố ảnh hưởng đến ý định mua xe hơi tại thành phố Đà Lạt : Luận văn Thạc sĩ Quản trị kinh doanh

xi, 62, [34] tr. ; 29 cm

Tiếng Việt 3. t.II

152 tr. : minh hoạ màu ; 24 cm

Tiếng Việt 3 : Sách giáo viên. t.II

288 tr. ; 24 cm

Tiếng Việt 1 : Sách giáo viên. t.I

267 tr. ; 24 cm

Phân tích hoạt động kinh doanh

203 tr. : minh hoạ ; 23 cm

NHÂN GIỐNG CÂY GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino) BẰNG NUÔI CẤY CALLUS

Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino (Jiaogulan) has long been used as folk medicine and tea in Asia. G. pentaphyllum is a perennial creeping herb belonging to the Cucurbitaceae family. It contains saponins, flavonoids, polysaccharides, vitamins, and amino acids. In this study, the in vitro propagation capacity of this species via callus induction was investigated. The results show that suitable media for callus induction are basal MS with 1.5 mg/L NAA (naphthaleneacetic acid) (for leaf) and 0.2 mg/L 2.4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) (for petiole), and the ratio of callus induction was 100% and 97.8%, respectively. Shoots grow from callus on the MS medium with 2.0 mg/L BAP (6-Benzylaminopurine) and 0.2 mg/L NAA at a rate of 55.6%. MS medium containing 1.0 mg/L BAP has the highest shoot multiplication efficiency for apical buds (6.17 shoots/sample) while MS with 0.3 mg/L BAP has the highest efficiency for lateral buds (7.72 shoots/sample). The MS medium with 0.5 mg/L NAA is suitable for rooting at a rate of 7.22 roots/shoot.Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino) từ lâu đã được sử dụng làm thuốc dân gian cũng như được dùng để chế biến thành trà ở các nước châu Á. Đây là cây thân thảo lâu năm thuộc họ bầu bí chứa saponin, flavonoid, polysaccharide, vitamin và các amino acid. Trong nghiên cứu này, nhân giống in vitro loài cây này thông qua giai đoạn callus đã được thực hiện. Kết quả cho thấy môi trường cảm ứng sinh callus hiệu quả nhất đối với mẫu lá là MS cơ bản có bổ sung 1,5 mg/L NAA (naphthaleneacetic acid), đối với mẫu cuống lá là 0,2 mg/L 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid), tỷ lệ mẫu có cảm ứng tạo callus tương ứng là 100% và 97,8%. Môi trường tái sinh chồi từ callus cho hiệu quả cao nhất là MS cơ bản có bổ sung 2,0 mg/L BAP (6-Benzylaminopurine) và 0,2 mg/L NAA, tỷ lệ tái sinh chồi đạt 55,6%. Môi trường MS cơ bản bổ sung 1,0 mg/L BAP cho hiệu quả nhân chồi cao nhất đối với chồi đỉnh (6,17 chồi/mẫu) trong khi bổ sung 0,3 mg/L BAP cho hiệu quả cao nhất đối với chồi bên (7,72 chồi/mẫu). Môi trường tạo rễ tốt nhất đối với cây Giảo cổ lam là MS bổ sung 0,5 mg/L NAA với số lượng rễ là 7,22 rễ/chồi