Protection from inflammatory organ damage in a murine model of hemophagocytic lymphohistiocytosis using treatment with IL-18 binding protein

Hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) is a life threatening condition due to the association of an infectious agent with lymphocyte cytotoxicity defects, either of congenital genetic origin in children or presumably acquired in adults. In HLH patients, an excess of lymphocyte or macrophage cytokines, such as IFN-gamma and TN Fu is present in serum. In animal models of the disease, IFN-gamma and INF-alpha have been shown to play a central pathogenic role. In humans, unusually high concentrations of IL-18, an inducer of IFN-gamma, and INF-alpha have been reported, and are associated with an imbalance between IL-18 and its natural inhibitor IL18 binding protein (IL18BP) resulting in an excess of free IL18 Here we studied whether IL-18B P could reduce disease severity in an animal model of HLH. Mouse cytomegalovirus infection in perforin-1 knock out mice induced a lethal condition similar to human HLH characterized by cytopenia with marked inflammatory lesions in the liver and spleen as well as the presence of hemophagocytosis in bone marrow. IL-18B P treatment decreased hemophagocytosis and reversed liver as well as spleen damage. IL-18BP treatment also reduced both IFN-gamma and TNF-alpha production by CD8+ T and NK cells, as well as Fas ligand expression on NK cell surface. These data suggest that IL-18B P is beneficial in an animal model of HLH and in combination with anti infectious therapy may be a promising strategy to treat HLH patients

PCR faisability for the detection of Toxoplasma gondii development in MRC5 cell cultures

OBJECTIF Etudier la faisabilité de la technique PCR pour la détection du développement de Toxoplasma gondii sur milieu cellulaire à partir des culots et des surnageants de cultures sur fibroblastes humains MRCS. METHODES Les surnageants de culture et les cellules correspondant à différents inoculums sont prélevés après un délai variant de 24 à 120h. La technique PCR utilisée comporte une extraction à l'iodure de sodium, l'amplification d'une séquence anonyme TGRI E spécifique de T.gondii (191 paires de bases) et une révélation après électrophorèse sur gel d'agarose-bromure d'éthidium en· UV. La positivité des cultures est controlée parallèlement par immunofluorescence à l'aide d'un anticorps monoclonal antiP30 (Sanofi Pasteur) réalisée sur les culots cellulaires des mêmes cultures. RESULTATS La positivité et la cohérence des résultats erl PCR (positivité de tous les inoculums > plus faible inoculum donnant un résultat positif), aussi bien à partir des culots cellulaires que des surnageants, démontrent la faisabilité de la méthode avec en particulier l'absence d'inhibiteur de la Taq polymérase dans le milieu de culture. CONCLUSION Le développement des toxoplasmes sur milieu cellulaire peut être détecté par la technique PCR. La version sur surnageant de culture à l'intérêt de laisser intact les cellules et de témoigner du développement réel des toxoplasmes