Sağlıklı bebeklerde galaktoz-1-fosfat üridil transferaz aktivitesinin kantitatif analizi ve referans aralık tayini

Bu tezin, veri tabanı üzerinden yayınlanma izni bulunmamaktadır. Yayınlanma izni olmayan tezlerin basılı kopyalarına Üniversite kütüphaneniz aracılığıyla (TÜBESS üzerinden) erişebilirsiniz.SUMMARY Classical galactosemia, a life-threatening disorder with severe symptoms in the neonatal period, is caused by deficiency of the enzyme galactose-1 -phosphate uridyl transferase (GALT; EC2.7.7.12). In this autosomal recessive inherited disorder, ingestion of milk causes accumulation of galactose in the blood and urine and leads to high intracellular concentrations of galactose-1 -phosphate. Neonates with classical galactosemia are prone to failure to thrive, jaundice, hepatic dysfunction, cataracts and severe sepsis, principally due to Escherichia coli. Galactose-restricted diet reverses these acute complications immediately. However, because of suboptimal clinical awareness, diagnosis is often delayed or symptoms are misinterpreted as sepsis or isoimmunization, leading to death or sequelae because of late intervention. The aim of this study was to determine the GALT activity in erythrocytes of healthy 127 babies aged between 0-12 months and to observe the reference interval determination of this enzyme among these babies. EDTA collected whole blood was used for enzyme activity and hemoglobin determination. Kinetic method based on uridine 5'-diphosphoglucose (UDPG) consumption was used to determine the activity of GALT. In the UDPG consumption assay based on the method of Beutler, the disappearance of UDPG from a mixture containing UDPG, gal-1-P and hemolysate was estimated by measuring residual UDPG in the NAD- linked reaction catalysed by UDPG dehydrogenase. For every sample one sample blank was used to monitor the activity at 340 nm using Shimadzu UV-VIS spectrophotometer. The reaction was followed for about 45 minutes until there was no further change in the optical density. After determining the mean value of GALT activity for 127 babies, values > 50% of mean (> 10.28 U/gHb) were accepted as normal (n=113). Sex difference in terms of GALT activity was not observed when subclass analysis according to sex divergency was performed. Finally reference interval determination was performed according to the guidelines of IFCC and NCCLS. For 103 babies aged between 1-12 months the mean value of GALT activity was 23.06 U/gHb, the lower end was 11.08 U/gHb (2.5th percentile) and the higher end of it was 51.87 U/gHb (97.5th percentile). For 10 newborns the 65mean value of GALT activity was 15.42 U/gHb, the lower end (10th percentile) was 10.49 U/gHb and finally the higher end (90th percentile) of it was 24.94 U/gHb. The confidence intervals were also calculated according to I FCC recommendation. 66ÖZET Galaktoz-1 -fosfat üridil transferaz (GALT; EC2.7.7.12) eksikliği sonucu oluşan klasik galaktozemi, yenidoğan döneminde gelişme geriliği, sarılık, hepatik disfonksiyon, katarakt ve Escherichia colt ye bağlı sepsisle seyreden bir hastalıktır. Otozomal resesif olarak kalıtılan bu bozuklukta, süt alımı kanda ve idrarda galaktoz birikimine ve hücre içi yüksek galaktoz-1 -fosfat konsantrasyonuna yol açar. Galaktozdan yoksun diyet ile bu akut komplikasyonlar geriye dönebilir. Ancak, tanının gecikmesi veya semptomların yanlış değerlendirilmesi sonucu gecikmiş müdahale ölüm veya sekelle sonuçlanabilir. Bu çalışmanın amacı, kantitatif GALT aktivitesi referans değerlerini yüksek sayıda hastada belirleyerek, kalıcı rehber olabilecek veri tabanı oluşturmaktır. Bu nedenle, 0-12 ay arasındaki 127 sağlıklı bebekte eritrosit GALT aktivitesinin kantitatif ölçümü yapılmış ve enzimin referans aralık değerleri belirlenmiştir. Enzim aktivitesi ve hemoglobin tayini için EDTA'lı tüplere tam kan alınmıştır. GALT aktivitesi tayini için Beutler'in üridin 5'-difosfoglukoz (UDPG) tüketimine dayalı kinetik metodu kullanılmıştır. UDPG tüketim yönteminde: UDPG, gal-1-P ve hemolizat içeren karışımda harcanmamış UDPG, UDPG dehidrogenaz tarafından katalizlenen NAD-aracılı reaksiyonda, açığa çıkan NADH ile ölçülür. UDPG tüketilmesi enzim aktivitesi ile orantılıdır. Her örnek için bir örnek körü kullanılmış ve enzim aktivitesi 340 nm'de 45 dakika boyunca optik dansitedeki değişkenlik sabit kalana kadar takip edilmiştir. 127 bebekten elde edilen GALT aktivitesi ortalaması belirlendikten sonra ortalamanın % 50' sinin üzerinde (£ 10.28 U/gHb) kalan değerler (n=113), dağılım özelliği açısından istatistiksel olarak incelenmiş ve GALT aktivitesi açısından cinsiyet farkı bulunmamıştır. 0-1 ay yaş grubundaki bebeklerin GALT aktivitelerinin yüksek hemoglobin konsantrasyonlarından dolayı, 1-12 ay yaş grubundaki bebeklere göre daha düşük olmasından dolayı, 1 ay üzerindeki grupları birleştirdik ve referans aralık çalışmamızı 0-1 ay (n=10) ve 1-12 ay (n=103) olmak üzere iki grup üzerinden yaptık. 1-12 ay yaş aralığındaki 103 bebeğin GALT aktivitesinin ortalaması 23.06 U/gHb, alt referans sınırı 11.08 U/gHb ve üst referans sınırı 51.87 U/gHb olarak tespit edilmiştir. IFCC kriterlerine göre hesaplanan %90 güven aralıkları ise alt sınır için 10.70-12.06 U/gHb, üst sınır 63için ise 37.35-57.40 U/gHb'dir. 0-1 ay yaş grubundaki 10 bebeğin GALT aktivitesinin ortalaması 15.42 U/gHb, alt sının (10. persentil) 10.49 U/gHb ve üst sınırı (90. persentil) 24.94 U/gHb olarak bulunmuştur. 6