基于微流控芯片单细胞电泳淌度和组分分析研究

基于微流控芯片细胞培养，分选，定位，裂解等单元技术以及在此单元技术上展开的细胞形态，结构、功能，及胞内组分分析等是当前研究的一个热点。本论文以微流控芯片为平台考察了单细胞定位和裂解等单元技术，并在此基础上对单细胞电泳淌度和单细胞内组分分析进行一些研究。 1．利用自制的PMMA芯片，以单细胞成像法测量了在不同水质条件下经功夫菊酯处理的杂交鲤鱼红细胞的电泳淌度。实验结果表明农药处理过的鲤鱼红细胞电泳速率明显增大，水质条件对红细胞速度亦有相当影响。 2．利用自行搭建的多点激光诱导荧光检测系统，在玻璃芯片上研究了单细胞电泳淌度。在不同浓度砷剂作用下，K562细胞电泳淌度和细胞内罗丹明123荧光强度随着砷剂浓度和作用时间的增大而下降。这种基于多点激光诱导荧光检测的单细胞芯片电泳法具有操作简单，通量高，可同时测量电泳淌度和荧光强度等优点。 3．利用光刻技术制作了具有不同深度微通道的玻璃芯片，以空间位阻的方式，将单细胞定位在坝处，实现了单个K562细胞在SDS作用下的快速裂解和胞内核酸组分分离、检测的全集成过程。 4．发现了微通道表面电渗被完全抑制后可加速细胞裂解的现象，以此为基础建立了一种基于PDMS芯片的简单、快速、高效的化学试剂溶膜法。实现细胞在SDS作用下在0.5s内快速裂解，并连续检测了单个K562细胞内的Rh-123和GSH，分析通量达到~10cells/min。同时还实现了细胞在碱作用下在0.2s内快速裂解，并在HPMC缓冲液中检测了单个细胞内的核酸，显示了该方法在胞内多组分分离分析方面的应用潜力

一种基于微流控芯片的细胞内涵物分析方法

本发明一种基于微流控芯片的细胞内涵物分析方法，其特征在于：引入生物素和亲合素体系；把细胞固定在微通道特定位置并用化学试剂法裂解；其过程在于：首先在微通道表面制作生物素―亲和素的蛋白吸附微模式，利用生物素和亲和素之间的特异相互作用，介导生物素化的细胞固定在微通道表面的特定位置；然后用高电压驱动含化学试剂的缓冲液对已经定位的细胞进行裂解，释放内涵物经电泳分离检测。本发明可以保证融膜试剂与细胞充分接触，细胞融膜时间短，并且无需复杂的装置就可实现单个细胞进样、操作、裂解、内涵物的分离、检测。本发明方法简单，有效，适用于贴壁和悬浮细胞，为微流控芯片在线细胞裂解和内涵物分析提供了一种新的可行的方法。带填

一种基于微流控芯片的细胞内涵物分析方法及专用芯片

一种基于微流控芯片的细胞内涵物分析方法，其特征在于：首先在微流控芯片的进样通道壁两侧施以交变电场，使细胞裂解；所释放的产物再经分离通道进行电泳分离检测。本发明可以实现细胞的裂解与分析同步完成，并且操作简单可控。带填

微流控芯片上的红细胞电泳淌度研究

以单细胞成像法分别测量了3组无农药含水质净化剂、有农药无水质净化剂及其有农药有水质净化剂处理后的杂交鲤鱼红细胞在塑料(polymethal methacrylate，PMMA)微流控芯片上的电泳淌度。其值分别为1．138×10^-4、0．1279×10^-4和-0．8520×10^-4 cm^2v^-1s^-1。从电泳淌度的差别可以看出功夫菊酯和水质条件恶化均可使鲤鱼红细胞表面的电荷密度发生变化，从而引起电泳淌度的变化。同时还初步考察了细胞电泳淌度作为参数进行细胞分类的可行性，显示这种淌度差别有可能作为细胞分类的一项依据