银鲫两个蛋白合成相关基因全长cDNA的克隆及其特征分析

通过构建雌核发育银鲫心跳期SMARTcDNA质粒文库并从文库中随机挑选克隆测序 ,克隆得到银鲫翻译起始因子 3亚单位 2 (GTIF3 S2 )和翻译延伸因子 1亚单位α(GEF 1α)基因全长cDNA。银鲫翻译起始因子 3亚单位 2基因cDNA全长 12 80bp ,开放阅读框位于 117— 10 91bp之间 ,编码 32 5个氨基酸。其推断的氨基酸序列存在三个WD结构域。该基因在鱼类中为首次报道。银鲫翻译延伸因子 1亚单位alpha基因cDNA全长 1784bp ,开放阅读框位于82— 14 6

雌核发育银鲫四种孵化酶基因全长cDNA的克隆及其特征分析

用抑制性差减杂交结合SMART cDNA合成和RACE-PCR技术，克隆得到雌核发育银鲫(Carassius auratus gibelio)4种孵化酶基因的全长eDNA。4种孵化酶基因分别被命名为GHEl、GHE2、GHE3、GHE4。序列分析表明，4种孵化酶基因cDNA的开放阅读框均为795bp，都编码265个氨基酸。它们推断的编码氨基酸序列同源性在79．6～95．1％之间。种系分析表明，GHEl、GHE2、GHE3、GHE4的进化地位位于日本鳗鲡(Anguilla japonica)孵化酶和青鳉(Oryzias latipes)孵化酶之间。不同发育时期胚胎的RT-PCR分析表明，银鲫GHEl、GHE2、GHE3、GHE4 4种孵化酶基因从尾芽期到幼苗期都检测到表达，且GHE3和GHE4在神经胚期也检测到表达。各种组织的RT-PCR表明，它们在成鱼组织中不表达

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期’739个和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交，得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因数据库比对结果表明：72个原肠期斑点杂交阳性克隆中，包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的cDNA片段；98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中，包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片段。采用虚拟Northern杂交和RT-PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这些差异表达基因的呈现为进一步研究银鲫胚胎发育的分子机制奠定了基础

银鲫两个蛋白合成相关基因全长cDNA的克隆及其特征分析

通过构建雌核发育银鲫心跳期SMART cDNA质粒文库并从文库中随机挑选克隆测序，克隆得到银鲫翻译起始因子3亚单位2(GTIF3—S2)和翻译延伸因子1亚单位α(GEF-1α)基因全长cDNA。银鲫翻译起始因子3亚单位2基因cDNA全长1280bp，开放阅读框位于117—1091bp之间，编码325个氨基酸。其推断的氨基酸序列存在三个WD结构域。该基因在鱼类中为首次报道。银鲫翻译延伸因子1亚单位alpha基因cDNA全长1784bp，开放阅读框位于82—1467bp之间，编码462个氨基酸。RT-PCR表明，这两个基因在成熟卵母细胞和胚胎发育早期可以检测到少量的转录产物，在胚胎发育期间从原肠期开始转录，并随着发育进程逐渐增强。成鱼组织中除精巢表达较弱外，其他组织都表达较强。同源分析比较表明，TIF3-S2和EF-1α在物种进化过程中具有高度的进化保守性，在物种间的同源性很高。因此，作者认为，这两个基因是研究物种间系统发育的优良对象

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期739个 和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交,得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因 数据库比对结果表明:72个原肠期斑点杂交阳性克隆中,包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的 cDNA片段;98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中,包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片 段。采用虚拟Northern杂交和RT PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这