Investigation of vaccinia virus in bovines and buffaloes from the Marajó region, Brazil: standardization of a diagnostic test

The genus Orthopoxvirus (OPXV), belongs to the family Poxviridae and has 12 species, including Vaccinia virus (VACV) and Smallpox virus (VARV). Clinically, lesions in cattle are mostly seen on the teats and udders of lactating cows, which appear as bloody sores. The course of infection to complete healing takes two to four weeks. In humans, infections are currently occupational zoonoses. Little is still known about the ecoepidemiology of these viral agents, requiring further studies to seek alternatives for infection prevention and control. We sought to evaluate the epidemiology of VACV in asymptomatic buffaloes and cattle from farms on Marajó region, Brazil. Serum samples of 247 animals were tested collected in 2009. Viral DNA was extracted using commercial kits and detection was performed by the Polymerase Chain Reaction (PCR), targeting the growth factor gene of Vaccinia (VGF), followed by Nested PCR. Samples were undetectable to VACV by the methods used in the animals studied, requiring continuous epidemiological surveillance in the region, especially considering previous reports of outbreaks involving poxviruses in the country

Investigação de Poxvírus em amostras de roedores pertencentes ao bioma amazônico provenientes da região de Carajás, Pará

Introdução: Embora as medidas de controle e tratamento das doenças infecciosas tenham avançado nas últimas décadas, patógenos emergentes e reemergentes ainda compreendem a principal pauta de saúde pública no Brasil. Uma das maiores pandemias já registrada, foi ocasionada pelo vírus da Varíola (VARV). Que pertence ao gênero mais importante dentro da família Poxviridae, do ponto de vista da infecção em humanos, o Orthopoxvirus, neste estão os vírus, Vaccinia, Monkeypox e Cowpox. Dessa forma, apesar do vírus da varíola ter sido erradicado do Brasil desde 1980, outros poxvírus podem ocasionar doenças em humanos e animais. Objetivo: Investigar a existência de poxvírus em amostras de pequenos roedores pertencentes ao bioma amazônico, provenientes da região de Carajás no Estado do Pará. Material e métodos: Foram selecionadas 75 amostras de roedores, sendo 42 amostras de fígado e 33 de sangue, oriundas dos municípios de Canaã dos Carajás e Curionópolis, tais amostras fazem parte do acervo de materiais biológicos da Seção de Arbovirologia e Febres Hemorrágicas do Instituto Evandro Chagas. Apenas as amostras de fígado foram maceradas e levadas ao aparelho tissuelyser e posteriormente armazenadas em freezer -70ºC. Em seguida, foram inoculadas em cultivo de células de neuroblastoma humano (IMR-32) na tentativa de obter o isolamento viral. As células infectadas com as suspensões de fígado e sangue foram observadas por 7 dias para a detecção de possível efeito citopático viral e ao final deste período foi realizada a técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI) visando confirmar ou não a positividade da amostra.  Resultados e Conclusão:  Até o presente momento foram inoculadas 67 amostras, sendo possível observar alterações na monocamada celular de 36. O presente trabalho demonstrou a importância da vigilância visando o controle e prevenção de casos zoonóticos de poxvírus, na região Norte do país, sobretudo no estado do Pará, o qual apresenta densas áreas florestais com inúmeras espécies de animais que podem vir a ser reservatórios de tais agentes. A linhagem celular utilizada apesar de demonstrar alterações na monocamada celular pós-infecção, demonstrou uma menor eficiência quando comparada a estudos prévios com outras linhagens celulares. Além disso, as reações de IFI obtidas foram evidenciadas com reduzida reação fluorescente, demonstrando que talvez essa linhagem celular não seja o modelo ideal para a replicação do poxvírus

Suscetibilidade da linhagem celular de neuroblastoma humano (IMR-32) à infecção por arbovírus neurotrópicos

Introdução:  Os arbovírus neurotrópicos representam um importante problema de saúde em escala global, sendo necessário a utilização de medidas de prevenção, controle e diagnóstico. Objetivo:  Avaliar a efetividade da infecção de dois arbovírus neurotrópicos, vírus do Nilo Ocidental (WNV) e vírus da Encefalite de Saint Louis (SLEV), em células de neuroblastoma humano (IMR-32). Metodologia: As suspensões-estoques dos vírus foram tituladas por ensaio de placa com incubação de 120 h para WNV e 168 h para SLEV. Os isolados foram inoculados em garrafas para cultura de células que apresentavam 80% de confluência da monocamada celular e observadas por microscopia de contraste de fase por 72 h pós infecção a fim de verificar alterações morfológicas sugestivas de efeito citopático (ECP). Em seguida, as culturas foram submetidas ao ensaio de Imunofluorescência Indireta (IFI) para detecção de antígenos virais. Resultados: O título infeccioso do SLEV apresentou-se mais baixo em relação ao WNV. Em 72 h, foram observadas alterações morfológicas nas culturas inoculadas, caracterizando um ECP resultante da infecção viral, com ECP mais acentuado na cultura inoculada com WNV, confirmado pela presença de antígenos virais nas células infectadas detectados pelo teste de IFI. Conclusão: a linhagem celular IMR-32 apresentou suscetibilidade à infecção por WNV e SLEV, representando um modelo alternativo eficaz para o isolamento de arbovírus neurotrópicos

Enteroviroses

Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil

A combined approach for predicting binding sffinity of Zika Virus NS2B-NS3 protease inhibitors using semi-empirical methods and molecular docking algorithms

Fundação Amazônia de Amparo a Estudos (FAPESPA) and Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) for funding our research under Chamada No. 002/2021-Programa de Infraestrutura para Jovens Pesquisadores-Programa Primeiros Projetos-PPPFAPESPA/CNPqUniversidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Exatas e Naturais. Laboratório de Planejamento e Desenvolvimento de Fármacos. Belém-PA, Brazil.Universidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Exatas e Naturais. Laboratório de Planejamento e Desenvolvimento de Fármacos. Belém-PA, Brazil.Universidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Exatas e Naturais. Laboratório de Planejamento e Desenvolvimento de Fármacos. Belém-PA, Brazil / Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará - Campus Bragança. Bragança-PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Universidade Federal do Pará. Instituto de Ciências Exatas e Naturais. Laboratório de Planejamento e Desenvolvimento de Fármacos. Belém-PA, Brazil.Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne virus that has emerged as a major public health concern due to its association with severe neurological disorders. In recent years, there has been increasing interest in exploring natural products as potential therapeutics for ZIKV infection. This study aimed to predict the binding affinity of natural compounds to the ZIKV NS2B-NS3 protease (NS2B-NS3pro) using multiple molecular docking algorithms and semiempirical quantum mechanical methods. Our results demonstrate that semiempirical methods can improve the accuracy of molecular docking studies for natural compounds. In this particular case, the PM7 (Parametric Method Number 7) method showed a significant improvement in the coefficient of determination (R2 = 0.85). We expect this combined approach to aid in the development of natural product-based therapies for ZIKV infection and to highlight the importance of continued research in this field

Emergence of a New Strain of DENV-2 in South America: Introduction of the Cosmopolitan Genotype through the Brazilian-Peruvian Border

Dengue virus 2 (DENV-2) seriously contributes to dengue-related mortality. It includes five nonsylvatic genotypes, with cosmopolitan being the most widespread with a significant contribution to the total number of DENV-2 cases globally. In South America, the cosmopolitan genotype was first recorded in 2019 in Madre de Dios, Peru, and then in Goiás (Midwest Brazil) in November 2021. In this study, we tested 163 human serum samples from Acre (Northern Brazil) collected during a DENV outbreak between 2020 and 2021 for all DENV genotypes by RT-qPCR. Of the 163 samples, 139 were positive for DENV-2, and 5 were positive for DENV-1. Five DENV-2-positive samples from early 2021 were sequenced, and the sequences clustered with the three other DENV-2 cosmopolitan genotype sequences already recorded on the continent. These results create a geographical link, suggesting the possible route of introduction of the DENV-2 cosmopolitan genotype into Brazil through the border with Peru, from which it may have dispersed to Midwest Brazil

Prevalence and genetic diversity of astroviruses in children with and without diarrhea in São Luís, Maranhão, Brazil

Human astroviruses (HAstV) have been increasingly identified as important etiological agents of acute gastroenteritis in children up to five years old. The aim of this study was to determine the prevalence and genotype diversity of HAstV in children with symptomatic and asymptomatic infections in São Luís, Maranhão, Brazil. From June 1997 to July 1999 a total of 183 fecal samples 84 from symptomatic and 99 from asymptomatic children were tested by enzyme immunoassay for HAstV. Prevalence rates were found to be 11 and 3% for symptomatic and asymptomatic children, respectively. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was carried out in 46 specimens (26 symptomatic and 20 asymptomatic) including the 12 samples that were positive by enzyme immunoassay (EIA). The overall positivity yielded by both methods was 8% (15/184); of these, 11% (9/84) for symptomatic and 5% (5/99) for those without symptoms or signs. Sequence analysis of amplicons revealed that HAstV-1 genotype was the most prevalent, accounting for 60% of isolates. Genotypes 2, 3, 4, and 5 were also detected, as one single isolate (10%) for each type. Variations in the sequences were observed when Brazilian isolates were compared to prototype strains identified in the United Kingdom. No seasonal pattern of occurrence was observed during these two years of study, and peak detection rate was observed in children aged between 3 and 6 months in the symptomatic group, and between 18 and 24 months in the controls

Emergence of a new strain of DENV-2 in South America: introduction of the cosmopolitan genotype through the Brazilian-Peruvian border

This research was funded by the Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel (CAPES) and the Evandro Chagas Institute, Health and Environment Surveillance Secretariat, Ministry of Health, Brazil. Grant number “88887.612806/2021-00”.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Belém, PA, Brazil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Oswaldo Cruz Foundation. Rio de Janeiro, RJ, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Belém, PA, Brazil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil.Dengue virus 2 (DENV-2) seriously contributes to dengue-related mortality. It includes five nonsylvatic genotypes, with cosmopolitan being the most widespread with a significant contribution to the total number of DENV-2 cases globally. In South America, the cosmopolitan genotype was first recorded in 2019 in Madre de Dios, Peru, and then in Goiás (Midwest Brazil) in November 2021. In this study, we tested 163 human serum samples from Acre (Northern Brazil) collected during a DENV outbreak between 2020 and 2021 for all DENV genotypes by RT-qPCR. Of the 163 samples, 139 were positive for DENV-2, and 5 were positive for DENV-1. Five DENV-2-positive samples from early 2021 were sequenced, and the sequences clustered with the three other DENV-2 cosmopolitan genotype sequences already recorded on the continent. These results create a geographical link, suggesting the possible route of introduction of the DENV-2 cosmopolitan genotype into Brazil through the border with Peru, from which it may have dispersed to Midwest Brazil