In vitro effects of isoprinosine and of a dipeptide methyl ester on Echinococcus multilocularis.

International audienceA protoscoleces/vesicles in vitro maintenance test with assessment of viability by eosin exclusion was used to evaluate the quantitative and qualitative activities of isoprinosine, its active component inosine and the dipeptide methylester L-Phe-Phe-OMe on isolated protoscoleces of Echinococcus multilocularis for 24 and 48 h. Isoprinosine and inosine showed dose- and time-dependent activity, the latter displaying a more rapid effect than the former. A high activity was shown with L-Phe-Phe-OMe, when compared to praziquantel. Ultrastructural alterations were much more striking with L-Phe-Phe-OMe, with an effect similar to that of praziquantel, whereas the chemotherapeutic activity of inosine and isoprinosine appeared to be directed against a metabolic target, with a lethal effect not immediately visible at the ultrastructural level. Thus, the previously reported in vivo activities of these drugs result largely from a direct effect on the parasite

Overexpression, purification and characterization of a hexahistidine-tagged recombinant extended nucleotide-binding domain 1 (NBD1) of the Cryptosporidium parvum CpABC3 for rational drug design

International audienceIts natural resistance to antiprotozoal chemotherapy characterizes the intestinal protozoan parasite Cryptosporidium parvum and the P-glycoprotein-related multidrug resistance proteins such as CpABC3 could be involved. In order to design and study specific inhibitors of the CpABC3 nucleotide-binding domain, a hexahistidine-tagged recombinant protein encompassing the N-terminal cytosolic NBD1 domain was over-expressed in E. coli and purified. The 45 kDa H6-NBD1 displayed intrinsic fluorescent properties consistent with the presence of two Trp residues in a hydrophobic environment. The binding of ATP and the fluorescent analogue TNP-ATP produced a dose-dependent quenching as well as progesterone and the flavone quercetin. The extrinsic fluorescence of TNP-ATP was enhanced upon binding to H6-NBD1, which was only partially displaced by the natural substrate ATP. The recombinant protein hydrolyzed ATP (K m = 145.4 ± 18.2 M), but ADP (K m = 4.3 ± 0.6 mM) and AMP (K m = 5.4 ± 1.5 M) were also substrates. TNP-ATP is a competitive inhibitor of the catalytic activity (K i = 36.6 ± 4.5 M), but quercetin and progesterone were not inhibitors, evidencing different binding sites. The recombinant C. parvum H6-NBD1 should be a valuable tool for rational drug design and will allow the discrimination between specific inhibitors of the catalytic site and molecules binding to other sites

Recherche de composés antiparasitaires (voie d'accès aux 1-alkylbenzimidazole-4,7-diones et synthèse régiospécifique d'imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-diones)

Le thème de recherche développé dans ce mémoire est orienté vers la synthèse de produits potentiellement actifs contre un protozoaire intracellulaire : Toxoplasma gondii. La purine nucléoside phosphorylase (PNP) étant une enzyme indispensable au développement de ce parasite, une recherche de composés inhibiteurs de celle-ci a été initiée. Des dérivés de benzimidazole-4,7-diones ont alors montré une bonne activité dans ce domaine. La première phase de nos travaux a consisté à améliorer la voie d'accès à de tels composés. Ainsi une nouvelle méthodologie a été mise au point, qui permet d'accéder plus rapidement et avec un meilleur rendement global à la 1-benzyl-1H-benzimidazole-4,7-dione, prise comme modèle. D'autre part, grâce aux premiers résultats des tests d'inhibition de la PNP, une étude de relation structure/activité quantitative (QSAR) a été menée, ce qui a permis une sélection de nouveaux substituants à introduire au niveau du cycle imidazole des benzimidazole-4,7-diones, en vue d'en améliorer l'activité biologique. En conséquence, de nouvelles benzimidazole-4,7-diones ont été synthétisées, incluant comme substituant : -CH2(o-C6H4CN), -CH2C6H11, -CH2OH, -CCl=CCl2. Enfin, nous avons également développé une voie d'accès aux 5- et 6-bromo-1benzyl-1H-benzimidazole-4,7-diones. Ces derniers, en présence de deux N,N-diméthylhydrazones-a,b-insaturées différentes, nous ont alors permis d'accéder de manière régiospécifique à des imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-dionesLYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

Synthèse de dérivés benzimidazole-4,7-diones et imidozo[4,5]quinoléine-4,9 diones, inhibiteurs potentiels de la purine nucléoside phosphorylase issue de Toxoplasma gondii

La toxoplasmose est une maladie parasitaire dont l'agent infectieux est Toxoplasma gondii. La purine nucléoside phosphorylase (PNP), une enzyme prenant part au métabolisme des purines, est essentielle au développement de ce parasite. Après une analyse des données de la littérature concernant les inhibiteurs connus de PNP, il nous a semblé intéressant de mettre au point des voies d'accès à de nouveaux inhibiteurs potentiels, de la famille des 2,3-dihydrobenzimidazole-4,7-diones, des benzimidazole-4,7-diones et des imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-diones. Dans le cas des 2,3-dihydrobenzimidazole-4,7-diones, la voie d'accès envisagée a échoué. Par contre, la stratégie de synthèse pour l'obtention des benzimidazole-4,7-diones a été conduite avec succès puisque neuf composés originaux ont ainsi pu être isolés. Ceux-ci ont par la suite montré de bonnes propriétés inhibitrices vis-à-vis de la PNP de T. gondii. Six composés inédits de type imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-diones ont été ensuite synthétisés, par une réaction d'hétéro Diels-Alder entre deux hydrazones a,b-insaturées et deux benzimidazole-4,7-diones. Parallèlement, une nouvelle naphto[2,3-d]imidazole-4,9-dione a également été obtenue par une réaction de type [4+2] en présence du 1-acétoxybuta-1,3-diène. L'attribution structurale des régioisomères obtenus après ces différentes cycloadditions a été réalisée par des expériences de diffractométrie des rayons X, de NOE différentiel ou à la suite d'une étude par simulation de dynamique moléculaire. Les résultats ainsi obtenus nous ont de plus permis de vérifier que la méthode semi-empirique PM3 demeurait fiable pour prédire la régiochimie des cycloadditions uniquement dans le cas où les valeurs des coefficients orbitalaires, calculées grâce à celle-ci, sont significativement différentes.Les dérivés testés d'imidazoquinoléinediones se sont révélés non inhibiteurs de la PNP de Toxoplasma gondii.LYON1-BU Santé (693882101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Recherche de composés antiparasitaires (voie d'accès aux 1-alkylbenzimidazole-4,7-diones et synthèse régiospécifique d'imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-diones)

Le thème de recherche développé dans ce mémoire est orienté vers la synthèse de produits potentiellement actifs contre un protozoaire intracellulaire : Toxoplasma gondii. La purine nucléoside phosphorylase (PNP) étant une enzyme indispensable au développement de ce parasite, une recherche de composés inhibiteurs de celle-ci a été initiée. Des dérivés de benzimidazole-4,7-diones ont alors montré une bonne activité dans ce domaine. La première phase de nos travaux a consisté à améliorer la voie d'accès à de tels composés. Ainsi une nouvelle méthodologie a été mise au point, qui permet d'accéder plus rapidement et avec un meilleur rendement global à la 1-benzyl-1H-benzimidazole-4,7-dione, prise comme modèle. D'autre part, grâce aux premiers résultats des tests d'inhibition de la PNP, une étude de relation structure/activité quantitative (QSAR) a été menée, ce qui a permis une sélection de nouveaux substituants à introduire au niveau du cycle imidazole des benzimidazole-4,7-diones, en vue d'en améliorer l'activité biologique. En conséquence, de nouvelles benzimidazole-4,7-diones ont été synthétisées, incluant comme substituant : -CH2(o-C6H4CN), -CH2C6H11, -CH2OH, -CCl=CCl2. Enfin, nous avons également développé une voie d'accès aux 5- et 6-bromo-1benzyl-1H-benzimidazole-4,7-diones. Ces derniers, en présence de deux N,N-diméthylhydrazones-a,b-insaturées différentes, nous ont alors permis d'accéder de manière régiospécifique à des imidazo[4,5-g]quinoléine-4,9-dionesLYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

Regioselective N-alkylation of imidazo[4,5-b]pyridine-4-oxide derivatives: an experimental and DFT study

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Synthèse de nouvelles quinones hétérocycliques par application des réactions de cycloadditions de Diels-Alder et 1,3-dipolaire (évaluation in vitro de leur activité sur Toxoplasma gondii)

Toxoplasmosis is an ubiquitous anthropozoonosis induced by Toxoplasma gondii. Despite of several researchs, the whole stock of drugs remain restricted. The aim of the works in this report is the synthesis of carbazolequinones and valuation of efficacy against T. gondii. Natural carbazolequinones like Calothrixines exhibit antiparasitic et cytoxotoxic properties. The para- and ortho-quinones like benzo-, isoxazolo- and triazolo-carbazolequinones synthesis was investigate by regioselective [4+2] or 1,3-dipolar cycloaddition. The strategy of synthesis from monobromide dipolarophile can in fact have an access to required regioisomer with selectivity. Proofs of regiochemistry was made by NMR 1H NOE and study of correlation by 1H-13C HMBC. Concerning biological assessment, compounds inhibit the growth of T. gondii like sulfadiazine and pyrimethamine with cytotoxicity against myelomonocytic THP1 cells. Any synthesised compounds inhibit PNP, key enzyme of purine salvage pathway, unique way for the parasit to have access to puric basis. The inhibition of growth of T. gondii by our compounds isn t due to inhibition of PNPLa toxoplasmose est une anthropozoonose ubiquitaire causée par Toxoplasma gondii. Malgré de nombreuses recherches, l arsenal thérapeutique reste très restreint. L objectif des travaux présentés dans ce mémoire est la synthèse de carbazolequinones et l évaluation de leur efficacité sur T. gondii. Les carbazolequinones naturelles comme les calothrixines ont des propriétés antiparasitaires et cytotoxiques. La synthèse de para- et ortho-quinones de type benzo-, isoxazolo- et triazolo-carbazolequinones a été réalisée par application des réactions de cycloaddition [4+2] ou 1,3-dipolaires régiosélectives. La stratégie de synthèse à partir de dipolarophiles monobromés permet en effet, d accéder sélectivement au régioisomère souhaité. Les attributions de structure des régiosiomères ont été confirmées par RMN 1H NOE et par une étude des corrélations 1H -13C HMBC. Concernant l évaluation biologique in vitro, les composés inhibent la croissance de T. gondii comme la sulfadiazine et la pyriméthamine, avec une cytotoxicité sur les cellules myélomonocytiques THP1. Aucun des composés synthétisés n inhibent la PNP, enzyme clé de la voie de sauvetage des purines, seule voie d accès pour le parasite aux bases puriques. L inhibition de la croissance de T. gondii par nos composés n est pas liée directement liée à l inhibition de la PNPLYON1-BU.Sciences (692662101) / SudocSudocFranceF

Unsymmetrical α,ω-end-functionalized oligo(cyclohexylidenes): efficient synthesis and conformational analysis

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Design, synthesis and evaluation of progesterone–adenine hybrids as bivalent inhibitors of P-glycoprotein-mediated multidrug efflux

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Synthesis and modulation properties of imidazo[4,5-b]pyridin-7-one and indazole-4,7-dione derivatives towards the Cryptosporidium parvum CpABC3 transporter

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