Quantificação de esteróides fecais de fêmeas de onça-pintada (Panthera onca) mantidas em cativeiro: validação da técnica

Foi estudada a atividade ovariana de fêmeas de onça-pintada (Panthera onca; adultas n=2 e pré-púberes n=3) mantidas em cativeiro, pela extração e quantificação de estrógenos e progestinas fecais. Foram colhidas amostras fecais de 2-7 vezes por semana durante 16-18 meses. Foi realizada a validação dos radioimunoensaios em fase sólida, para progesterona e 17b-estradiol, para uso em extratos fecais em onça-pintada. A concentração média de estrógenos fecais (ng/g de fezes secas) para o grupo dos animais pré-púberes foi de 10,97 (variando de 0,28 a 59,16) e para o grupo dos animais adultos foi de 68,99 (variando de 3,50 a 609,37). A concentração média de progestinas fecais (mg/g de fezes secas) para o grupo dos animais pré-púberes foi de 0,26 (variando de 0,02 a 4,44) e para o grupo dos animais adultos foi de 0,85 (variando de 0,08 a 6,51).Ovarian function of captive jaguars (Panthera onca; adults n=2 and pre-pubertal n=3) was assessed by extraction and quantification of fecal estrogens and progestins. Fecal samples were obtained 2-7 times per week during 16-18 months. Validation of solid phase radioimmunoassay for progesterone and 17b-estradiol was performed for jaguar fecal extracts. Mean concentration the fecal estrogen (ng/g of dry feces) in pre-pubertal animals was 10,97 (range, 0,28 - 59,16) and adults animals was 68,99 (range, 3,50 - 609,37). Fecal progestins (mg/g of dry feces) had a mean concentration of 0,26 (range, 0,02 - 4,44) in pre-pubertal animals and adults animals was 0,85 (range, 0,08 - 6,51)

Eficiência da mensuração de progesterona salivar para identificar a ovulação em cadelas

Several authors have emphasized the importance of monitoring estrous cycle in bitches and mentioned technique examples of how it can be done. The aim of this study was to evaluate the salivary progesterone quantification technique in order to identify ovulation in this species. To compound the experimental group, 13 bitches of different breeds (no specific breed, English Bulldog, Bernesse Mountain Dog)and different ages (from 11 months to 9 years old) were used. Blood and saliva samples were collected simultaneously in all animals, starting about the first day of proestrus clinical signs. Salivary samples were collected with a specific commercial device (Salivette®). This method was effective, since it has become possible to obtain enough volume in almost all samples to quantify salivary progesterone (100 μLfor duplicate quantification). Serum progesterone was quantified by radioimmunoassay and salivary progesterone by enzyme immunoassay, both of them with commercial kits. There was an increasing, linear and positive correlation between salivary and serum progesterone (r=0.704; p<0.0001) in bitches. One of the animals had an anovulatory cycle, in which, for 13 days, seric progesterone levels were maintained between 1.67 and 3.76 ng/mL and salivary progesterone levels were maintained between 19.55 and 236.77 pg/mL. It was concluded that salivary progesterone levels measured by enzyme immunoassay is a technique that can be used to evaluate the presence or absence of ovulation in bitches.Vários autores enfatizaram a importância do monitoramento do ciclo estral em cadelas e citaram exemplos de como realizar tal procedimento. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de dosagem de progesterona salivar em cadelas para identificar a ovulação nesta espécie. Para composição do grupo experimental, foram utilizadas 13 cadelas, de diferentes raças (sem raça definida, Buldogue Inglês, Bernesse Mountain Dog) e diferentes idades (11 meses a 9 anos).Amostras de sangue e saliva foram colhidas simultaneamente em todos os animais, a partir dos primeiros sinais clínicos de proestro. Amostras salivares foram obtidas com o uso de dispositivo comercial específico (Salivette®). Este método foi eficaz, visto ter tornado possível obter volume suficiente para dosagem de progesterona na grande maioria das amostras(100 μL para dosagens em duplicata). As concentrações de progesterona no soro foram determinadas pela técnica de radioimunoensaio e na saliva por enzimaimunoensaio, ambas com kits comerciais. Observou-se uma relação linear crescente e positiva entre a progesterona sérica e salivar (r=0,704; p<0,0001) em cadelas. Uma das cadelas apresentou ciclo anovulatório, no qual, durante 13 dias, as concentrações séricas de progesterona sérica se mantiveram entre 1,67 e3,76 ng/mL e as concentrações salivares de progesterona entre 19,55 e 236,77 pg/mL. Conclui-se que as concentrações de progesterona salivar mensuradas pela técnica de enzimaimunoensaio podem ser utilizadas para avaliar a ocorrência ou ausência de ovulação em cadelas

Estabilidade pré-analítica do hormônio adrenocorticotrófico endógeno canino após remessa de amostras em gelo seco ou com barras de gelo reciclável

Endogenous adrenocorticotrophic hormone (eACTH) measurement is useful in hypercortisolism and hypoadrenocorticism investigation; however, since the hormone is highly unstable, blood samples require proper processing and storage, as well as shipping is often a step limiting since few laboratories offer this assay in Brazil. The aim of this note was to compare overnight dog´s eACTH preanalytical stability when frozen samples were shipped in dry ice (DI), or with recyclable ice bars (RIB). A total of 56 paired samples for Eacth measurement were analyzed. Blood samples were properly handled, plasma aliquots transferred into plastic microtubes, and stored at -80ºC. The fifty-six paired samples were overnight shipped in two thermic isolated boxes with DI or involved by RIB. Despite there was a high correlation between results from both shipping methods (r Spearman = 0.958, P<0.001), the Wilcoxon matched-pairs rank test showed that the shipping method may influence results (P<0.001). However, this difference does not affect results interpretation. By this way, when DI shipping was not possible, RIB shipping may represent a risk to eACTH preanalytical stability.A mensuração do hormônio adrenocorticotrófico endógeno (ACTHe) é útil na investigação do hipercortisolismo e hipoadrenocorticismo. No entanto, como o hormônio é bastante instável, as amostras de sangue necessitam um manejo adequado no processamento e armazenamento, assim como o envio para laboratórios pode ser um passo limitante, uma vez que poucos laboratórios oferecem este ensaio no Brasil. O objetivo deste trabalho foi comparar a estabilidade pré-analítica do ACTHe durante longo período de envio de amostras congeladas em gelo seco (GS), ou com barras de gelo reciclável (BGR). Um total de 56 amostras pareadas para mensuração de ACTHe foram analisadas. As amostras de sangue foram adequadamente manejadas, sendo o plasma transferido para micro tubos plásticos estocados a -80ºC. Os 56 pares de amostras foram enviados à tarde para chegada ao laboratório na manhã seguinte em dois isopores, um com GS e outro com BGR. Apesar de uma alta correlação entre os resultados dos diferentes métodos de envio (r Spearman = 0,958, P<0,001), o teste de Wilcoxon para amostras pareadas mostrou que o método de envio influencia os resultados P<0,001). Apesar desta diferença, os resultados não afetaram a interpretação dos resultados. Desta forma, quando o envio em gelo seco não for possível, o envio das amostras com barras de gelo reciclável pode representar um risco à estabilidade pré-analítica do ACTHe

Evidence of pituitary hypoplasia associated with partial central diabetes insipidus in a young Persian cat

Background: Congenital anomalies are an uncommon pituitary hypofunction cause associated to multiple hormone deficiencies. Congenital hyposomatotropism is often related to an inherited anomaly, characterized mainly by delayed growth. It is not uncommon to find associated thyroid-stimulating hormone and gonadotropin deficiencies. Pituitary malformation may be associated to progressive cystic lesion expansion. Central diabetes insipidus (CDI) is another rare disease associated to polyuria (PU) and polydipsia (PD) secondary to antidiuretic hormone (ADH) deficient secretion. The aim of this report is to describe a likely case of pituitary hypoplasia, associated with partial CDI in a cat. Case: A 9-month-old unneutered male Persian cat weighing 2 kg was presented due to severe polyuria and polydipsia associated with growth deficit when compared with its sibling. After clinical and laboratory evaluations during the months in which the patient was monitored, reduced serum concentration of insulin-like growth factor-1 (IGF-1), thyroid-stimulating hormone (TSH), thyroid hormones, and testosterone were documented, confirming the diagnosis of hyposomatotropism, hypogonadism, and secondary hypothyroidism. Furthermore, therapeutic diagnosis with desmopressin revealed partial central diabetes insipidus (CDI). As the sibling showed normal development aging 13-months, a radiographic examination of the forelimb (carpus) was performed on both cats. There was lack of growth plate fusion in the patient, without any other evidence of dysgenesis, whereas complete epiphyseal closure was observed in the sibling. Despite therapeutic prescriptions of desmopressin and levothyroxine, the owners refused further follow-up to the case. Discussion: Notwhistanding neuroimaging was not available for investigation of pituitary aspect in this particular case, the clinical symptoms added to the results of the complementary tests were consistent with pituitary hypoplasia, associated with hyposomatotropism, secondary hypothyroidism, hypogonadism, and partial CDI. Hyposomatotropism was presumably diagnosed based on the patient’s clinical characteristics, which included proportional growth delay, delayed tooth eruption, delayed growth plate fusion, associated with serum reduced IGF-1 results in comparison with its sibling. The report of low free T4 by equilibrium dialysis and of low total T4 levels, associated with low TSH levels, was considered compatible with secondary hypothyroidism. TRH stimulation test is considered the gold standard for secondary hypothyroidism diagnosis since low TSH could be secondary to assay’s low sensibility. However, normal TSH and thyroid hormone results in the sibling results ruled out this possible dismissed diagnose. The patient’s lack of sexual interest, associated with hypotestosteronemia and underdeveloped genitals (absence of penile spines and testicular hypoplasia), indicates hypogonadism. Finally, partial CDI diagnosis was demonstrated by cat’s partial ability to increase urinary specific gravity under water deprivation often made by the owners, as well as the response pattern to desmopressin therapy. Owing the lack of neurological signs expected to be associated with neoplastic or traumatic hypopituitarism etiology, hypoplasia hypothesis was raised. Quite often, patients with pituitary hypoplasia develop Rathke cleft cysts that might expand over time. In the present case, partial CDI was likely to be caused by the compression of the neurohypophysis by cystic formation secondary to adenohypophyseal hypoplasia since this kind of pituitary congenital anomaly does not justify per se neurohypophysis implications

Validação laboratorial e fisiológica de conjunto comercial para a quantificação de corticóides fecais em chimpanzé (Pan troglodytes) e orangotango (Pongo pygmaeus), cativos e submetidos a enriquecimentos ambientais

Neste trabalho foi realizado estudo comparativo dos níveis de corticóides fecais (CF) de chimpanzé (Pan troglodytes) e orangotango (Pongo pygmaeus). Foram analisadas amostras coletadas em duas fases distintas, relacionadas com a introdução de técnicas de enriquecimento ambiental, a saber: Base (antes da introdução) e Habituação (imediatamente após). Realizamos as validações do conjunto comercial para radioimunoensaio ImmunuChemTM Double Antibody Corticosterone da MP Biomedicals, para mensuração de CF. A validação laboratorial dos conjuntos diagnósticos para uso em extrato fecal de primatas foi realizada pelo método de paralelismo, no qual, para cada espécie, concentrações conhecidas de corticosterona foram adicionadas a um pool de extratos fecais, sendo estas amostras analisadas em seguida. As inclinações das curvas obtidas nestes ensaios e da curva padrão do ensaio foram então comparadas. Os resultados obtidos para chimpanzé e orangotango, foram respectivamente, Y= 17,23+1,31*X;R^2=0,98 e Y=11,14+1,29*X; R^2=0,99. Para a validação fisiológica, foi utilizada a introdução de técnicas de enriquecimento ambiental como causador de aumento dos níveis de CF, conseqüentes à indução de resposta do tipo estresse. Os resultados foram expressos em médias e erros-padrão da média. As concentrações médias destes corticóides foram: chimpanzés: Base (5,90 +/-2,41x10³ ng/g de fezes), Habituação (14,92 +/- 4,66x10³ ng/g de fezes) e para o orangotango: Base (91,1 +/- 30,0x10³ ng/g de fezes), Habituação (185,1 +/- 57x10³ng/g de fezes). Houve diferença significativa (P&lt;0,05) para os valores destes CF para ambas as espécies entre as duas fases estudadas.A comparative study of fecal corticoids (FC) concentrations was carried out with chimpanzees (Pan troglodytes) e orangutans (Pongo pygmaeus). Fecal samples were collected before (Basal) and just after (Habituation) enrichment introduction and analyzed. We performed biochemical and physiological validations of the ImmunuChemTM Double Antibody Corticosterone kit for radioimmunoassay from MP Biomedicals for quantifying FC concentrations. To establish the biochemical validity of our assay we performed parallelism assays in which pooled fecal extracts from both species were spiked with known quantities of corticosterone standard and the slopes of the curves obtained with these samples and the standard curves of the kits were compared.The correlation coefficients were R^2=0.98 (Y= 17.23+1.31*X) for chimpanzees and R^2=0.99 (Y=11.14+1.29*X) for orangutans. For biological validation, we used the introduction of environmental enrichment to trigger a rise in FC levels as a consequence of the response to a stressor. Concentrations were expressed as mean and SEM. Mean concentrations of fecal corticosteroids were: Basal: 5.90 ± 2.41 x10³ ng/g of feces, Habituation: 14.92± 4.66 x10³ ng/g of feces for chimpanzees and Basal: 91.1 ± 30.0 x10³ ng/g of feces, Habituation: 185.1 ± 57 x10³ ng/g of feces for orangutans. For both species, the mean concentrations of Basal and Habituation periods were significantly different

Diferenças no aumento da glicemia entre equinos recebendo xilazina e detomidina para procedimentos clínicos cirúrgicos e não-cirúrgicos

The aim of this prospective randomized clinical study was to compare blood glucose and cortisol levels between horses receiving xylazine and detomidine for surgical and non-surgical procedures. Horses from non-surgical groups received 0.5 mg/kg of xylazine (GX group, n=5) or 0.01 mg/kg of detomidine (GD group, n=5) for gastroscopic examination. Horses from the surgical groups received similar doses of xylazine (AX group, n=7) or detomidine (AD group, n=7), followed by anesthetic induction with 2 mg/kg of ketamine and 0.05 mg/kg of diazepam for an arthroscopic procedure under isoflurane anesthesia. Blood samples were obtained prior to the alpha-2 agonist administration (baseline) and after 10, 30, 60 and 90 minutes. All groups had a significant increase in blood glucose from 30 to 90 minutes after alpha-2 agonist administration, compared to baseline. After receiving the alpha-2 agonist, the AD group had blood glucose levels (118-150 mg/dL) significantly higher than GD (99-119 mg/dL) and AX (97-116 mg/dL) groups. Cortisol had no significant changes within a group. However, the AX group had cortisol levels (3.6-3.7 mg/dL) significantly lower than GX group (5.4-5.7 mg/dL) from 30 to 90 minutes after xylazine administration. We concluded that blood glucose levels were when detomidine was administered for surgical procedure, compared to xylazine also for surgical procedure, and non-surgical procedure. Serum cortisol was minimally affected by administration of xylazine and detomidine regardless procedures were surgical or non-surgical.O objetivo deste estudo clínico, radomizado e prospectivo, foi comparar as concentrações sanguíneas de glicose e cortisol entre equinos recebendo xilazina e detomidina para procedimentos cirúrgicos e não-cirúrgicos. Os equinos dos grupos não-cirúrgicos receberam 0,5 mg/kg de xilazina (grupo GX, n=5) ou 0,01 mg/kg de detomidina (grupo GD, n=5) para realização de exame gastroscópico. Os equinos dos grupos cirúrgicos receberam doses semelhantes de xilazina (grupo AX, n=7) ou detomidina (grupo AD, n=7), seguindo-se a indução anestésica com 2 mg/kg de cetamina e 0,05 mg/kg de diazepam para realização de procedimento artroscópico durante anestesia com isofluorano. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração do alfa-2 agonista (basal) e após 10, 30, 60 e 90 minutos. Todos os grupos tiveram um aumento significativo da glicemia, a partir de 30 até 90 minutos da administração do alfa-2 agonista, em relação ao basal. Após receber o alfa-2 agonista, o grupo AD apresentou glicemia (118-150 mg/dL) significativamente maior que os grupos GD (99-119 mg/dL) e AX (97-116 mg/dL). Não houve diferenças significativas da concentração de cortisol dentro de cada grupo. Entretanto, o grupo AX apresentou níveis de cortisol (3,6-3,7 mg/dL) significativamente mais baixos que o grupo GX (5,4-5,7 mg/dL), a partir de 30 até 90 minutos da administração de xilazina. Concluímos que a glicemia apresentou valor mais elevadoapós a administração de detomidina para realização de procedimento cirúrgico, comparado à xilazina administrada também para procedimento cirúrgico, e para procedimento não-cirúrgico. A concentração sérica de cortisol foi minimamente influenciada pela administração de xilazina e detomidina independentemente dos procedimentos serem cirúrgicos ou não-cirúrgico

Altrenogest during early pregnancy modulates uterine glandular epithelium and endometrial growth factor expression at the time implantation in pigs

This study evaluated the effects of supplying altrenogest from day 6-12 of pregnancy on the endometrial glandular epithelium, corpora lutea (CL) morphology, and endometrial and CL gene expression. A total of 12 crossbred females (Landrace × Large White) were used. The females were assigned to 4 treatments according to a random design with a 2 × 2 factorial arrangement, with two categories (sow or gilt) and two treatments (non-treated and treated with altrenogest). On day 6 of pregnancy, animals were allocated to one of the following groups: non-treated (NT, n = 6; 3 sows and 3 gilts), and (T, n = 6; 3 sows and 3 gilts) treated daily with 20 mg of altrenogest, from day 6-12 of pregnancy. All animals were euthanized on day 13 of pregnancy. All CLs were individually weighed, and their volume were determined. The endometrial glandular density (GD), mean glandular area (MGA), and vascular density (VD) were determined by histomorphometric and immunohistochemical analyses. Endometrium samples were collected and analyzed by qRT-PCR to evaluate the abundance of transcripts for VEGF and IGF-I. Females in the T group had higher MGA (P < 0.05) compared to the NT group. There was no effect of treatment on GD or VD for both experimental groups. Sows in the T group had augmented expression of IGF-I (P < 0.05). Progestagen had no detrimental effect on CL morphology. In conclusion, altrenogest improves the uterine environment during the peri-implantation period in pigs without compromising corpora lutea development

Estudo endócrino reprodutivo e do comportamento sócio-sexual de sagui-de-tufo-preto (Callithrix penicillata) mantido em cativeiro

A comunicação do estado reprodutivo nos primatas da família Callithrichidae, depende principalmente dos comportamentos sócio-sexuais como um sistema de sinalização primário, uma vez que nestas espécies a ovulação não é percebida pelos machos. Neste trabalho, os padrões de comportamentos sócio-sexuais foram analisados em conjunto com as concentrações de metabólitos fecais dos esteróides sexuais progesterona (MFP), estradiol (MFE) e testosterona (MFT) em casais cativos de Sagüi-de-tufos-pretos (Callithrix penicillata), nas diferentes fases do ciclo ovariano. O grupo estudado era composto por quarto casais adultos, mantidos no Centro de Reabilitação de Animais Selvagens da prefeitura de São Paulo. Os padrões comportamentais foram registrados pelo método de amostragem focal por intervalo de tempo a cada 30 segundos, cinco vezes por semana, totalizando 14.400 registros por animal. A mensuração das concentrações de metabólitos fecais dos esteroides sexuais foram realizados pelo método de enzima imunoensaio (EIE). Os resultados obtidos dessas concentrações possibilitaram a determinação endócrina das fases do ciclo ovariano (folicular e luteal) e de suas respectivas durações, assim como a determinação da fase periovulatória. Foram caracterizados 31 ciclos ovarianos completos, com duração de 24,3±4,1 dias (média ±DP), sendo que a fase folicular compreendeu 13,04±4,8dias e a fase lútea 11,2±4,2 dias. Os comportamentos sócio-sexuais (marcação por cheiro, cheirar genitália, catação e apresentação sexual) e a variável "proximidade" mostraram-se significativamente mais prevalentes na fase periovulatória do que nas demais fases do ciclo. Não houve alteração das concentrações de MFT dos machos ao longo de todo o período estudado. A análise conjunta das concentrações de metabólitos fecais de esteróides sexuais e dos comportamentos sócio-sexuais possibilitou um melhor entendimento das relações endócrino-comportamentais e reprodutivas de C. penicillata

Ovarian function assessment in captive jaguars (Panthera onca, LINNAEUS, 1758) by fecal steroid extraction and quantification

Foi estudada a atividade ovariana de fêmeas de onça-pintada (Panthera onca; adultas n=2 e pré-púberes n=3) mantidas em cativeiro, pela extração e quantificação de estrógenos e progestinas fecais. Foram colhidas amostras fecais de 2-7 vezes por semana durante 16-18 meses. Foi realizada a validação dos radioimunoensaios em fase sólida, progesterona e 17&beta;-estradiol, para uso em extratos fecais em onça-pintada. A duração média (±EPM) do ciclo ovariano (n=7) definido por dois picos consecutivos de estrógenos fecais foi de 38,28 ±2,52dias (variando de 25 a 44 dias). A fase de estro teve duração média de 10,42 ±1,15dias (variando de 7 a 15dias) e a fase de inter-estro durou em média 28,00 ±1,43dias (variando de 28 a 31 dias). O nível basal médio de estrógenos fecais no período de inter-estro foram de 31,26 ±1,34ng/g de fezes secas. No período de estro, os valores médios encontrados foram de 115,91 ±8,82ng/g de fezes secas, foi observado um pico entre o D-5 e o D-2, com valores médios de 164,45 ±3,49ng/g de fezes secas. As progestinas fecais apresentaram valores médios de 0,44 ±0,05&micro;g/g de fezes secas, não apresentando variações significantes durante todo o ciclo. Os dados obtidos durante a avaliação do perfil longitudinal das concentrações de estrógenos fecais, no grupo dos animais pré-púberes, permitem indicar um possível início da atividade ovariana a partir do bimestre agosto-setembro, onde os valores médios dos picos detectados para estrógenos fecais, foram de 135,31 ±3,16ng/g de fezes secas. Todos os animais entraram na fase peripuberal com idade aproximada de 20 meses.Ovarian function of captive jaguars (Panthera onca; adults n=2 and pre-pubertal n=3) was assessed by extraction and quantification of fecal estrogens and progestins. Fecal samples were obtained 2-7 times per week during 16-18 months. Validation of solid phase radioimmunoassay for progesterone and 17&beta;-estradiol was performed for jaguar fecal extracts. Ovarian cycle mean duration (±SEM), defined by two consecutive peaks of fecal estrogens, was 38.28 ±2.52days (range, 25 - 44days; n=7). Mean estrous phase duration was 10.42 ± 1.15days (range, 7 - 15days), and inter-estrous phase mean duration was 28.00 ±1.43days (range, 28 - 31days). Basal fecal estrogen mean concentration in inter-estrous period was 31.26 ± 1.34ng/g of dry feces. During estrous period mean value was 115.91 ±8.82ng/ g of dry feces, and was observed a mean peak (164.45 ±3.49 ng/g of dry feces) between D-5 and D-2. Fecal progestins had a mean concentration of 0,44 ± 0.05&micro;g/g of dry feces, with no significant variations during the cycles. Data obtained during the evaluation of fecal estrogen longitudinal profiles in the pre-pubertal group, allow to indicate the beginning of ovarian activity in August-September bimester with fecal estrogen mean peaks of 135.31 ± 3.16ng/ g of dry feces. AlI animaIs started pre-pubertal phase around 20 months of age