A critical evaluation of the fish early-life stage toxicity test for engineered nanomaterials: experimental modifications and recommendations

There are concerns that regulatory toxicity tests are not fit for purpose for engineered nanomaterials (ENMs) or need modifications. The aim of the current study was to evaluate the OECD 210 fish, early-life stage toxicity test for use with TiO2 ENMs, Ag ENMs, and MWCNT. Both TiO2 ENMS (≤160 mg l(-1)) and MWCNT (≤10 mg l(-1)) showed limited acute toxicity, whilst Ag ENMs were acutely toxic to zebrafish, though less so than AgNO3 (6-day LC50 values of 58.6 and 5.0 µg l(-1), respectively). Evidence of delayed hatching, decreased body length and increased muscle width in the tail was seen in fish exposed to Ag ENMs. Oedema (swollen yolk sacs) was also seen in fish from both Ag treatments with, for example, mean yolk sac volumes of 17, 35 and 39 µm(3) for the control, 100 µg l(-1) Ag ENMs and 5 µg l(-1) AgNO3 treatments, respectively. Among the problems with the standard test guidelines was the inability to maintain the test solutions within ±20 % of nominal concentrations. Pronounced settling of the ENMs in some beakers also made it clear the fish were not being exposed to nominal concentrations. To overcome this, the exposure apparatus was modified with the addition of an exposure chamber that ensured mixing without damaging the delicate embryos/larvae. This allowed more homogeneous ENM exposures, signified by improved measured concentrations in the beakers (up to 85.7 and 88.1 % of the nominal concentrations from 10 mg l(-1) TiO2 and 50 µg l(-1) Ag ENM exposures, respectively) and reduced variance between measurements compared to the original method. The recommendations include: that the test is conducted using exposure chambers, the use of quantitative measurements for assessing hatching and morphometrics, and where there is increased sensitivity of larvae over embryos to conduct a shorter, larvae-only toxicity test with the ENMs

Dietary α‐Linolenic Acid, Marine ω‐3 Fatty Acids, and Mortality in a Population With High Fish Consumption: Findings From the PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED) Study

Background: Epidemiological evidence suggests a cardioprotective role of α‐linolenic acid (ALA), a plant‐derived ω‐3 fatty acid. It is unclear whether ALA is beneficial in a background of high marine ω‐3 fatty acids (long‐chain n‐3 polyunsaturated fatty acids) intake. In persons at high cardiovascular risk from Spain, a country in which fish consumption is customarily high, we investigated whether meeting the International Society for the Study of Fatty Acids and Lipids recommendation for dietary ALA (0.7% of total energy) at baseline was related to all‐cause and cardiovascular disease mortality. We also examined the effect of meeting the society's recommendation for long‐chain n‐3 polyunsaturated fatty acids (≥500 mg/day). Methods and Results: We longitudinally evaluated 7202 participants in the PREvención con DIeta MEDiterránea (PREDIMED) trial. Multivariable‐adjusted Cox regression models were fitted to estimate hazard ratios. ALA intake correlated to walnut consumption (r=0.94). During a 5.9‐y follow‐up, 431 deaths occurred (104 cardiovascular disease, 55 coronary heart disease, 32 sudden cardiac death, 25 stroke). The hazard ratios for meeting ALA recommendation (n=1615, 22.4%) were 0.72 (95% CI 0.56–0.92) for all‐cause mortality and 0.95 (95% CI 0.58–1.57) for fatal cardiovascular disease. The hazard ratios for meeting the recommendation for long‐chain n‐3 polyunsaturated fatty acids (n=5452, 75.7%) were 0.84 (95% CI 0.67–1.05) for all‐cause mortality, 0.61 (95% CI 0.39–0.96) for fatal cardiovascular disease, 0.54 (95% CI 0.29–0.99) for fatal coronary heart disease, and 0.49 (95% CI 0.22–1.01) for sudden cardiac death. The highest reduction in all‐cause mortality occurred in participants meeting both recommendations (hazard ratio 0.63 [95% CI 0.45–0.87]). Conclusions: In participants without prior cardiovascular disease and high fish consumption, dietary ALA, supplied mainly by walnuts and olive oil, relates inversely to all‐cause mortality, whereas protection from cardiac mortality is limited to fish‐derived long‐chain n‐3 polyunsaturated fatty acids. Clinical Trial Registration URL: http://www.Controlled-trials.com/. Unique identifier: ISRCTN35739639

Acute effects on hepatic biomarkers in the freshwater native fish Aequidens metae exposed to polycyclic aromatic hydrocarbons

14 Pág.BACKGROUND AND OBJECTIVES: Polycyclic aromatic hydrocarbons are present in all environmental matrices. Polycyclic aromatic hydrocarbons-rich wastewater from the oil industry is discharged into natural water bodies. Detritivorous fish shown the effects of pollutants in water. Biomarkers of effect make it possible to demonstrate exposure to xenobiotics such as polycyclic aromatic hydrocarbons. The aim of the present study was to evaluate the hepatic and erythrocyte response in Aequidens metae, a detritivorous fish, exposed to polycyclic aromatic hydrocarbons in terms of morphological, biochemical, and genotoxic changes. METHODS: Juveniles of Aequidens metae were exposed to 50 microgram per gram body weight of beta-naphthoflavone, 100 microgram per gram of naphthalene, 50 microgram per gram of phenanthrene and 10 microgram per gram of benzo[a]pyrene, for 72 hours. Water quality variables, total protein content, 7-ethoxyresorufin-O-deethylase activity, liver histopathological changes and genotoxic alterations in peripheral blood were measured during the assay. FINDINGS: In polycyclic aromatic hydrocarbons-exposed fish, analysis of liver tissue revealed parenchymal lesions and changes in the number and shape of hepatocyte nuclei. On the other hand, only fish exposed to benzo[a]pyrene shown significant increase in the 7-ethoxyresorufin-O-deethylase activity compared to solvent control. In peripheral blood erythrocytes, increased presence of nuclear abnormalities was higher in fish exposed to phenanthrene, followed by benzo[a]pyrene, beta-naphthoflavone, and naphthalene. CONCLUSION: It is concluded that Aequidens metae is a suitable bioindicator for polycyclic aromatic hydrocarbons monitoring in aquatic ecosystems. Phenanthrene reveals for the first time a greater genotoxic effect than benzo[a]pyrene at sublethal concentrations. Juveniles of Aequidens metae exposed to concentrations of polycyclic aromatic hydrocarbons close to those found in the environment showed health-compromising damageThis study was funded by Colciencias, Agencia Nacional de Hidrocarburos (ANH) and Universidad de los Llanos with the project number [112272151869, contract 1622016, grant 721–2015] “Convocatoria para la formación de recurso humano en Colombia en el área de hidrocarburos, a través de proyectos de investigación”) and by the Pontificia Universidad Javeriana, under the following research grant: Project ID 8572.Peer reviewe

Bromatological characteristics of fillet fish of Leporinus agassizi and Leporinus fasciatus (Pisces: Characidae) in its natural habitat

Se analizaron los parámetros bromatológicos de 39 filetes de Warakú verdadero (Leporinus agassizi) y 21 filetes de Warakú pinima (Leporinus fasciatus) muestreados durante un ciclo hidrológico en tres puntos diferentes del Rio Vaupés, Colombia. Los parámetros evaluados no presentaron diferencias significativas en relación al sitio y época de captura. En el punto 3 y durante la temporada de aguas descendentes Leporinus agassizi tuvo los valores más altos para materia seca (25,24%), proteína (19,82%) y cenizas (2,16%). Los mayores niveles de lípidos para esta especie fueron encontrados en aguas bajas del punto 1 (2,93%). Leporinus fasciatus presentó los niveles más altos de materia seca (25,19%) y cenizas (2,16%) en el punto 3 durante la temporada de aguas ascendentes y altas, respectivamente. Las variables bromatológicas tendieron a variar de acuerdo con la época del año. Fue posible determinar que estas especies de peces poseen un gran potencial para la acuicultura de aguas continentales constituyendo así un modelo de alimentación saludable

Características bromatológicas de filetes de Leporinus agassiz y Leporinus fasciatus(Pisces: Characidae) en su hábitat natural

Bromatological parameters in 39 Warakú verdadero (Leporinus agassizi) and 21 Warakú pinima (Leporinus fasciatus) fillets were analyzed at three different sites of the Vaupés River, Colombia sampled during a hydrobiological cycle. The bromatological parameters did not shown significant differences in relation to the sites and season of capture. At point 3 and during the descending water season Leporinus agassizi had the highest values for dry matter (25.24%), protein (19.82%) and ash (2.16%). The highest lipid value for this species was found in low waters at point 1 (2.93%). Leporinus fasciatus showed the highest levels of dry matter (25.19%) and ash (2.16%) at point 3 during ascendant and high waters, respectively. The bromatological parameters tends to vary regarding the time of year. It was possible to determined that these fish species have great potential for continental aquaculture thus constituting a healthy food model.Se analizaron los parámetros bromatológicos de 39 filetes de Warakú verdadero (Leporinus agassizi) y 21 filetes de Warakú pinima (Leporinus fasciatus) muestreados durante un ciclo hidrológico en tres puntos diferentes del Rio Vaupés, Colombia. Los parámetros evaluados no presentaron diferencias significativas en relación al sitio y época de captura. En el punto 3 y durante la temporada de aguas descendentes Leporinus agassizi tuvo los valores más altos para materia seca (25,24%), proteína (19,82%) y cenizas (2,16%). Los mayores niveles de lípidos para esta especie fueron encontrados en aguas bajas del punto 1 (2,93%). Leporinus fasciatus presentó los niveles más altos de materia seca (25,19%) y cenizas (2,16%) en el punto 3 durante la temporada de aguas ascendentes y altas, respectivamente. Las variables bromatológicas tendieron a variar de acuerdo con la época del año. Fue posible determinar que estas especies de peces poseen un gran potencial para la acuicultura de aguas continentales constituyendo así un modelo de alimentación saludable

Estudios preliminares sobre congelación de embriones de yamú (Brycon amazonicus) en diferentes estadios de desarrollo

Título en ingles: Preliminary studies on embryo freezing of yamú (Brycon amazonicus) in different stages of developmentTítulo en portugués: Estudos preliminares sobre congelamento de embriões do matrinxã (Brycon amazonicus) em diferentes estágios de desenvolvimento Resumen: La estacionalidad reproductiva de las especies de peces tropicales ha limitado su cultivo comercial, debido a que limita la disponibilidad de alevinos. Una alternativa para contribuir a solucionar este problema es la crioconservación de gametos, ya que esta tecnología facilita su reproducción en cualquier época del año. Este estudio evaluó la viabilidad de embriones de yamú (Brycon amazonicus) conservados a -14 °C, como posible estrategia para el mejoramiento de su producción. Para este propósito, reproductores sexualmente maduros fueron inducidos a la reproducción con extracto de hipófisis de carpa [hembras 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) y 5.0 (36 h) mg/kg y machos (4.0 mg/kg)]. Los embriones resultantes, en estadio de blastulación (2 horas post-fertilización-hpf), gastrulación (6 hpf) y segmentación (8 hpf), fueron almacenados en tubos Falcon a -14 °C previa refrigeración (6 °C durante 10 min), suspendidos (1:1) en una solución de 10 y 15% de dimetilsulfóxido (DMSO) o metanol (MET). Transcurrida una hora de almacenamiento, los embriones fueron sumergidos en baño de agua a 27 °C por 10 min y luego transferidos nuevamente a la incubadora, para evaluar su viabilidad y eclosión. La viabilidad y eclosión dependieron del estadio de desarrollo embrionario, así como del tipo de solución en que fueron almacenados. Los embriones del grupo control mostraron viabilidad y eclosión promedio de 96.2±0.1% y 96.3±0.7%, respectivamente. Ninguno de los tratamientos que utilizó embriones de 2 hpf presentó eclosión; en contraste, embriones de 8 hpf suspendidos en solución con 15% de MET mostraron los mayores porcentajes de eclosión (54.1±4.1%). En conclusión, embriones de yamú en estadios tardíos de desarrollo son susceptibles de conservarse a -14 °C por lo menos durante una hora.Palabras clave: congelación, crioprotectores, desarrollo embrionario, eclosión, viabilidad, yamú.Abstract: Reproductive seasonality in fish has limited its commercial farming production due to the restriction in the fingerling availability. The cryopreservation is an alternative to solve this problem since facilitates the fish reproduction throughout the year. Therefore, this study evaluated the yamú embryos (Brycon amazonicus) viability conserved at -14 °C as a possible strategy to improve its production. For this purpose, sexually mature broodstocks were induced to reproduction with carp pituitary extract [females 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) and 5 (36 h) mg/kg and males (4 mg/kg)]. The embryos in different stages of embryonic development such as blastulation (2 hours post-fertilization, hpf), gastrulation (6 hpf) and segmentation (8 hpf) were kept at 6 °C during 10 min and then storaged in falcon tubes at -14 °C and subjected (1:1) in a solution of 10 and 15% of dimethyl sulfoxide (DMSO) or methanol (MET). After one hour of storage, the embryos were immersed in a water bath at 27 °C for 10 min and then transferred again to the incubators to evaluate viability and hatching. The viability and hatching depended to the embryonic development stage as well as the storage solution type. The embryos of the control group showed an average viability and hatching of 96.2±0.1 and 96.3±0.7%, respectively. No hatching was observed in the treatments with 2 hpf embryos; in contrast, 8-hpf embryos subjected to MET 15% showed the best hatching results (54.1±4.1%). In conclusion, yamú embryos in later stages of development are susceptible to preserved at -14 °C at least for 1 hour.Key words: freezing, cryoprotectants, embryonic development, hatching, viability, yamú.Resumo: A sazonalidade reprodutiva das espécies de peixes tropicais tem limitado o seu cultivo comercial, porque limita a disponibilidade de alevinos. Uma alternativa para ajudar a resolver este problema é a criopreservação de gametas, ao facilitar a reprodução em qualquer época do ano. Este estudo avaliou a viabilidade de embriões de matrinxã (Brycon amazonicus), mantidos a -14 °C, como uma possível estratégia para melhorar a produção de alevinos ao longo do ano. Para este efeito, reprodutores sexualmente maduros foram induzidos à reprodução com extrato de pituitária de carpa [fêmeas 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) e 5.0 (36 h) mg/kg e machos (4 mg/kg)]. Embriões resultantes desta reprodução, na fase de blástula (2 horas pós-fertilização - hpf), gástrula (6 hpf) e segmentação (8 hpf), foram armazenados em tubos Falcon a -14 °C depois de resfriamento (6 °C) durante 10 min, suspensos (1:1) numa solução de 10 ou 15% de dimetil sulfóxido (DMSO) ou de metanol (MET). Após uma hora de armazenamento, os embriões foram submergidos num banho de água a 27°C durante 10 min e em seguida transferidos de novo para a incubadora, para avaliar a sua viabilidade e a eclosão. A viabilidade e a eclosão foram dependentes do estagio de desenvolvimento do embrião, bem como da solução de armazenamento utilizada. Os embriões do grupo controle mostraram viabilidade e eclosão em média de 96.2 ± 0.1% e 96.3 ± 0.7%, respectivamente. Nenhum dos tratamentos que utilizaram embriões de 2 hpf apresentaram eclosão, em contraste, embriões de 8 hpf suspensos em solução de MET 15% apresentaram os maiores percentagens de eclosão (54,1 ± 4,1%). Em conclusão, os embriões de matrinxã em estágios tardios do desenvolvimento são susceptíveis de ser armazenados a -14 °C, durante pelo menos uma hora.Palavras chave: congelamento, crioprotetores, desenvolvimento embrionário, eclosão, matrinxã, viabilidade.Título en ingles: Preliminary studies on embryo freezing of yamú (Brycon amazonicus) in different stages of developmentTítulo en portugués: Estudos preliminares sobre congelamento de embriões do matrinxã (Brycon amazonicus) em diferentes estágios de desenvolvimento Resumen: La estacionalidad reproductiva de las especies de peces tropicales ha limitado su cultivo comercial, debido a que limita la disponibilidad de alevinos. Una alternativa para contribuir a solucionar este problema es la crioconservación de gametos, ya que esta tecnología facilita su reproducción en cualquier época del año. Este estudio evaluó la viabilidad de embriones de yamú (Brycon amazonicus) conservados a -14 °C, como posible estrategia para el mejoramiento de su producción. Para este propósito, reproductores sexualmente maduros fueron inducidos a la reproducción con extracto de hipófisis de carpa [hembras 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) y 5.0 (36 h) mg/kg y machos (4.0 mg/kg)]. Los embriones resultantes, en estadio de blastulación (2 horas post-fertilización-hpf), gastrulación (6 hpf) y segmentación (8 hpf), fueron almacenados en tubos Falcon a -14 °C previa refrigeración (6 °C durante 10 min), suspendidos (1:1) en una solución de 10 y 15% de dimetilsulfóxido (DMSO) o metanol (MET). Transcurrida una hora de almacenamiento, los embriones fueron sumergidos en baño de agua a 27 °C por 10 min y luego transferidos nuevamente a la incubadora, para evaluar su viabilidad y eclosión. La viabilidad y eclosión dependieron del estadio de desarrollo embrionario, así como del tipo de solución en que fueron almacenados. Los embriones del grupo control mostraron viabilidad y eclosión promedio de 96.2±0.1% y 96.3±0.7%, respectivamente. Ninguno de los tratamientos que utilizó embriones de 2 hpf presentó eclosión; en contraste, embriones de 8 hpf suspendidos en solución con 15% de MET mostraron los mayores porcentajes de eclosión (54.1±4.1%). En conclusión, embriones de yamú en estadios tardíos de desarrollo son susceptibles de conservarse a -14 °C por lo menos durante una hora.Palabras clave: congelación, crioprotectores, desarrollo embrionario, eclosión, viabilidad, yamú.Abstract: Reproductive seasonality in fish has limited its commercial farming production due to the restriction in the fingerling availability. The cryopreservation is an alternative to solve this problem since facilitates the fish reproduction throughout the year. Therefore, this study evaluated the yamú embryos (Brycon amazonicus) viability conserved at -14 °C as a possible strategy to improve its production. For this purpose, sexually mature broodstocks were induced to reproduction with carp pituitary extract [females 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) and 5 (36 h) mg/kg and males (4 mg/kg)]. The embryos in different stages of embryonic development such as blastulation (2 hours post-fertilization, hpf), gastrulation (6 hpf) and segmentation (8 hpf) were kept at 6 °C during 10 min and then storaged in falcon tubes at -14 °C and subjected (1:1) in a solution of 10 and 15% of dimethyl sulfoxide (DMSO) or methanol (MET). After one hour of storage, the embryos were immersed in a water bath at 27 °C for 10 min and then transferred again to the incubators to evaluate viability and hatching. The viability and hatching depended to the embryonic development stage as well as the storage solution type. The embryos of the control group showed an average viability and hatching of 96.2±0.1 and 96.3±0.7%, respectively. No hatching was observed in the treatments with 2 hpf embryos; in contrast, 8-hpf embryos subjected to MET 15% showed the best hatching results (54.1±4.1%). In conclusion, yamú embryos in later stages of development are susceptible to preserved at -14 °C at least for 1 hour.Key words: freezing, cryoprotectants, embryonic development, hatching, viability, yamú.Resumo: A sazonalidade reprodutiva das espécies de peixes tropicais tem limitado o seu cultivo comercial, porque limita a disponibilidade de alevinos. Uma alternativa para ajudar a resolver este problema é a criopreservação de gametas, ao facilitar a reprodução em qualquer época do ano. Este estudo avaliou a viabilidade de embriões de matrinxã (Brycon amazonicus), mantidos a -14 °C, como uma possível estratégia para melhorar a produção de alevinos ao longo do ano. Para este efeito, reprodutores sexualmente maduros foram induzidos à reprodução com extrato de pituitária de carpa [fêmeas 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) e 5.0 (36 h) mg/kg e machos (4 mg/kg)]. Embriões resultantes desta reprodução, na fase de blástula (2 horas pós-fertilização - hpf), gástrula (6 hpf) e segmentação (8 hpf), foram armazenados em tubos Falcon a -14 °C depois de resfriamento (6 °C) durante 10 min, suspensos (1:1) numa solução de 10 ou 15% de dimetil sulfóxido (DMSO) ou de metanol (MET). Após uma hora de armazenamento, os embriões foram submergidos num banho de água a 27°C durante 10 min e em seguida transferidos de novo para a incubadora, para avaliar a sua viabilidade e a eclosão. A viabilidade e a eclosão foram dependentes do estagio de desenvolvimento do embrião, bem como da solução de armazenamento utilizada. Os embriões do grupo controle mostraram viabilidade e eclosão em média de 96.2 ± 0.1% e 96.3 ± 0.7%, respectivamente. Nenhum dos tratamentos que utilizaram embriões de 2 hpf apresentaram eclosão, em contraste, embriões de 8 hpf suspensos em solução de MET 15% apresentaram os maiores percentagens de eclosão (54,1 ± 4,1%). Em conclusão, os embriões de matrinxã em estágios tardios do desenvolvimento são susceptíveis de ser armazenados a -14 °C, durante pelo menos uma hora.Palavras chave: congelamento, crioprotetores, desenvolvimento embrionário, eclosão, matrinxã, viabilidade

Estudios preliminares sobre congelación de embriones de yamú (Brycon amazonicus) en diferentes estadios de desarrollo

Reproductive seasonality in fish has limited its commercial farming production due to the restriction in the fingerling availability. The cryopreservation is an alternative to solve this problem since facilitates the fish reproduction throughout the year. Therefore, this study evaluated the yamú embryos (Brycon amazonicus) viability conserved at -14 °C as a possible strategy to improve its production. For this purpose, sexually mature broodstocks were induced to reproduction with carp pituitary extract [females 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) and 5 (36 h) mg/kg and males (4 mg/kg)]. The embryos in different stages of embryonic development such as blastulation (2 hours post-fertilization, hpf), gastrulation (6 hpf) and segmentation (8 hpf) were kept at 6 °C during 10 min and then storaged in falcon tubes at -14 °C and subjected (1:1) in a solution of 10 and 15% of dimethyl sulfoxide (DMSO) or methanol (MET). After one hour of storage, the embryos were immersed in a water bath at 27 °C for 10 min and then transferred again to the incubators to evaluate viability and hatching. The viability and hatching depended to the embryonic development stage as well as the storage solution type. The embryos of the control group showed an average viability and hatching of 96.2±0.1 and 96.3±0.7%, respectively. No hatching was observed in the treatments with 2 hpf embryos; in contrast, 8-hpf embryos subjected to MET 15% showed the best hatching results (54.1±4.1%). In conclusion, yamú embryos in later stages of development are susceptible to preserved at -14 °C at least for 1 hour.A sazonalidade reprodutiva das espécies de peixes tropicais tem limitado o seu cultivo comercial, porque limita a disponibilidade de alevinos. Uma alternativa para ajudar a resolver este problema é a criopreservação de gametas, ao facilitar a reprodução em qualquer época do ano. Este estudo avaliou a viabilidade de embriões de matrinxã (Brycon amazonicus), mantidos a -14 °C, como uma possível estratégia para melhorar a produção de alevinos ao longo do ano. Para este efeito, reprodutores sexualmente maduros foram induzidos à reprodução com extrato de pituitária de carpa [fêmeas 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) e 5.0 (36 h) mg/kg e machos (4 mg/kg)]. Embriões resultantes desta reprodução, na fase de blástula (2 horas pós-fertilização - hpf), gástrula (6 hpf) e segmentação (8 hpf), foram armazenados em tubos Falcon a -14 °C depois de resfriamento (6 °C) durante 10 min, suspensos (1:1) numa solução de 10 ou 15% de dimetil sulfóxido (DMSO) ou de metanol (MET). Após uma hora de armazenamento, os embriões foram submergidos num banho de água a 27°C durante 10 min e em seguida transferidos de novo para a incubadora, para avaliar a sua viabilidade e a eclosão. A viabilidade e a eclosão foram dependentes do estagio de desenvolvimento do embrião, bem como da solução de armazenamento utilizada. Os embriões do grupo controle mostraram viabilidade e eclosão em média de 96.2 ± 0.1% e 96.3 ± 0.7%, respectivamente. Nenhum dos tratamentos que utilizaram embriões de 2 hpf apresentaram eclosão, em contraste, embriões de 8 hpf suspensos em solução de MET 15% apresentaram os maiores percentagens de eclosão (54,1 ± 4,1%). Em conclusão, os embriões de matrinxã em estágios tardios do desenvolvimento são susceptíveis de ser armazenados a -14 °C, durante pelo menos uma hora.La estacionalidad reproductiva de las especies de peces tropicales ha limitado su cultivo comercial, debido a que limita la disponibilidad de alevinos. Una alternativa para contribuir a solucionar este problema es la crioconservación de gametos, ya que esta tecnología facilita su reproducción en cualquier época del año. Este estudio evaluó la viabilidad de embriones de yamú (Brycon amazonicus) conservados a -14 °C, como posible estrategia para el mejoramiento de su producción. Para este propósito, reproductores sexualmente maduros fueron inducidos a la reproducción con extracto de hipófisis de carpa [hembras 0.25 (0 h), 0.5 (24 h) y 5.0 (36 h) mg/kg y machos (4.0 mg/kg)]. Los embriones resultantes, en estadio de blastulación (2 horas post-fertilización-hpf), gastrulación (6 hpf) y segmentación (8 hpf), fueron almacenados en tubos Falcon a -14 °C previa refrigeración (6 °C durante 10 min), suspendidos (1:1) en una solución de 10 y 15% de dimetilsulfóxido (DMSO) o metanol (MET). Transcurrida una hora de almacenamiento, los embriones fueron sumergidos en baño de agua a 27 °C por 10 min y luego transferidos nuevamente a la incubadora, para evaluar su viabilidad y eclosión. La viabilidad y eclosión dependieron del estadio de desarrollo embrionario, así como del tipo de solución en que fueron almacenados. Los embriones del grupo control mostraron viabilidad y eclosión promedio de 96.2±0.1% y 96.3±0.7%, respectivamente. Ninguno de los tratamientos que utilizó embriones de 2 hpf presentó eclosión; en contraste, embriones de 8 hpf suspendidos en solución con 15% de MET mostraron los mayores porcentajes de eclosión (54.1±4.1%). En conclusión, embriones de yamú en estadios tardíos de desarrollo son susceptibles de conservarse a -14 °C por lo menos durante una hora

Sexing Frogs by Real-Time PCR: Using Aromatase <b><i>(cyp19) </i></b>as an Early Ovarian Differentiation Marker

Most anurans have no identified sex-markers; therefore, alternative methods for identification of early changes in sex ratios are required. In this study, Lithobates sylvaticus and Silurana tropicalis tadpoles were sampled at different developmental stages covering the entire process of sex differentiation. Three candidate genes known to be involved in sex differentiation in other vertebrate species were selected to develop a method to identify phenotypic sex in frogs: cytochrome p450 aromatase (cyp19), forkhead box L2 (foxl2) and the cytochrome 17-alpha-hydroxylase/17,20 lyase (cyp17). Cloning of these genes revealed nucleotide identity values ranging between 75–97% when compared to other amphibian species. Gene expression of cyp17,cyp19 and foxl2 in L. sylvaticus adult gonads and gonad-mesonephros complex (GMC) of tadpoles was analyzed by real-time RT-PCR. Results showed clear sexually dimorphic patterns in the expression of the 3 genes. Our analysis reveals that GMC gene expression levels of cyp19 alone can be used as a robust predictor of phenotypic sex in L. sylvaticus tadpoles. In addition, we validated this method measuring cyp19 mRNA levels in S. tropicalis GMCs. We propose measuring cyp19 as a tool to study the effects of chemical contaminants (including endocrine disrupting compounds) on amphibian gonadal development and sex ratios in the future.No Full Tex