Evaluación molecular de la presencia de Perkinsus spp en muestras de concha de abanico (Argopecten purpuratus) del norte del Perú

The aim of this study was to evaluate the presence of Perkinsus spp, a parasite that is mandatory to be report to the OIE, in samples of calico scallop (Argopecten purpuratus) from Ancash, Peru, using the PCR technique. In total, 56 samples were selected from those collected for a previous study in 2015. The selected samples were gill tissues with histological lesions suggestive of infection with the protozoan (hemocytic infiltration and necrosis). DNA was extracted from the samples and specific primers were used to detect Perkinsus spp by PCR. In addition, the detection limit of the technique was evaluated. All samples were negative. It was determined that 1.63 ng was the least detectable template DNA in one of the positive controls.El objetivo de este estudio fue evaluar la presencia de Perkinsus spp, parásito de reporte obligatorio ante la OIE, en muestras de concha de abanico (Argopecten purpuratus) de Ancash, Perú, mediante la técnica de PCR. Se seleccionaron 56 muestras de las colectadas para un estudio previo en 2015. Las muestras seleccionadas fueron tejidos de branquia con lesiones histológicas sugestivas de infección con el protozoo (infiltración hemocítica y necrosis). Se extrajo el ADN de las muestras y se utilizaron cebadores específicos para detectar Perkinsus spp por PCR. Además, se evaluó el límite de detección de la técnica. Todas las muestras resultaron negativas. Se determinó que 1.63 ng fue la menor cantidad de DNA molde detectable en uno de los controles positivos

Aislamiento bacteriológico y caracterización de lesiones histopatológicas en tetra bleeding heart (Hyphessobrycon erythrostigma) de la cuenca Amazónica Peruana

The aim of this study was to determine the presence of bacterial agents and to characterize the histopathological lesions in ornamental tetra bleeding heart (Hyphessobrycon erytrhostigma) fish from a commercial aquarium in the city of Iquitos, Peru. For the microbiological study 60 fish were used, samples were taken from spleen and kidney. Isolation was done on MacConkey agar, Trypticase Soy agar, Pseudomonas Aeromonas selective agar (GSP) and Cytophaga agar and the genus identification was done by Gram staining and biochemical tests. Another 60 fish were used for the histopathological study where the skin, eye, gills, stomach, intestine, liver, spleen, muscle, kidney and peritoneum tissues were analyzed. Seven bacterial genera were isolated: Pseudomonas, Aeromonas, Lactobacillus, Bacillus, Flavobacterium, Staphylocccus and Escherichia. Spores of Mixosporidium sp, hyperplasia and lamella fusion were observed in gills. In the liver and peritoneum, parasitic and bacterial granulomas were found. In muscle, kidney and spleen, bacterial granulomas were found, and in stomach and intestine epithelial cell hyperplasia were found, among other lesions. Results showed that 52.3% (22/42) of the bacterial granulomas were positive for Ziehl Neelsen staining, which showed acid-fast bacilli bacteria. No lesions were found in the eyes.El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia de agentes bacterianos y caracterizar las lesiones histopatológicas en tejidos del pez ornamental ‘tetra bleeding heart’ (Hyphessobrycon erytrhostigma) procedentes de un acuario comercial de la ciudad de Iquitos, Perú. Para el estudio microbiológico se utilizaron 60 peces, tomándose muestras de bazo y riñón. El aislamiento se hizo en agar MacConkey, agar Tripticasa de Soya, agar selectivo para Pseudomonas-Aeromonas (GSP) y agar Cytophaga. La identificación de los géneros bacterianos se hizo mediante la coloración Gram y pruebas bioquímicas. Para el estudio histopatológico se utilizaron otros 60 peces, evaluándose los tejidos de piel, ojo, branquias, estómago, intestino, hígado, bazo, músculo, riñón y peritoneo. Se aislaron siete géneros bacterianos: Pseudomonas, Aeromonas, Lactobacillus, Bacillus, Flavobacterium, Staphylocccus y Escherichia. En los estudios histopatológicos, se observó en las branquias la presencia de esporas de Mixosporidium sp, hiperplasia y fusión de lamelas; en hígado y peritoneo se hallaron granulomas parasitarios y bacterianos; en músculo, riñón y bazo se encontraron granulomas bacterianos; y en el estómago e intestino se observó hiperplasia de las células epiteliales, entre otras lesiones. El 52.3% (22/42) de los granulomas bacterianos fueron positivos a la tinción de Ziehl Neelsen, donde se evidenció bacterias bacilares largas acidorresistentes. No se observaron lesiones en los ojos

Detección de microorganismos y caracterización de lesiones histopatológicas en la concha de abanico cultivada y silvestre (Argopecten purpuratus) en verano e invierno

The aim of this study was to detect parasitic agents and describe histopathological lesions in scallops (Argopecten purpuratus) from Ancash, Peru, during the summer and winter periods. In total, 360 mollusks were collected, in equal parts from aquaculture farms and wildlife, and in the summer and winter seasons (90 per group). The samples were preserved in Davidson's solution and analyzed by histology. The Chi-square test was used to determine possible associations between the variables. The histopathological findings in digestive glands and gills were similar, finding intracellular microcolonies of bacteria (ICM), hemocyte infiltration and tissue necrosis in all study groups. The prevalence of MCI was associated with the season of the year. Nephridial concretions occurred in all groups. The mantle was mostly affected by the presence of trematodes and hemocyte infiltration, especially in summer. It is concluded that there are microorganisms that affect and cause tissue lesions in Peruvian scallops.El objetivo del presente estudio fue detectar agentes parasitarios y describir las lesiones histopatológicas en las conchas de abanico (Argopecten purpuratus) de Ancash, Perú, durante los periodos de verano e invierno. Se recolectaron 360 moluscos, en partes iguales de empresas acuícolas y de vida silvestre, y en las épocas de verano e invierno (90 por grupo). Las muestras se conservaron en Solución de Davidson y se analizaron por histología. Se utilizó la prueba de Chi-cuadrado para determinar posible asociación entre las variables. Los hallazgos histopatológicos en glándulas digestivas y branquias fueron semejantes, encontrando microcolonias intracelulares de bacterias (MCI), infiltración de hemocitos y necrosis de los tejidos en los cuatro grupos de estudio. La prevalencia de MCI se asoció con la estación del año. Las concreciones en nefridios se presentaron en todos los grupos. El manto estuvo mayormente afectado con la presencia de trematodos e infiltración de hemocitos, especialmente en el verano. Se concluye que existen microorganismos que afectan y causan lesiones tisulares en las conchas de abanico peruanas

Caracterización molecular del segmento 4 del virus de la tilapia de lago aislado de tilapias (Oreochromis niloticus) cultivadas en Perú

The aim of this study was the molecular characterization of segment 4 of the lake tilapia virus (TiLV) detected in farmed tilapia from the departments of Piura (Coast) and San Martín (Jungle) in an outbreak that occurred in 2017-2018. During this outbreak, 26 TiLV positive samples were obtained and five of them were selected. The diagnosis of these samples was carried out through a nested RT-PCR with primers directed to segment 3 and the PCR products were sequenced. For the amplification and analysis of segment 4 of the TiLV genome, an RT-PCR was performed where specific primers were designed. The sequencing was done by Macrogen (South Korea), by bidirectional sequencing using the automated Sanger method. The phylogenetic analysis was carried out from the aligned sequences by means of the Neighbor-Joining (NJ) method and the hypothetical protein characteristics of the gene was carried out with the Phyre2 program. Four sequences with a length of 1190 bp were obtained and compared with two sequences from Israel and one from Thailand, reference strains corresponding to segment 4 of TILV published GenBank. The phylogenetic analysis of segment 4 determined the presence of a local TiLV genogroup, in addition to indicating that the Peruvian samples have a greater genetic relationship with the clade of Israel strains. The genetic distance analysis shows that the Peruvian samples have nucleotide identity values of 99.7-100% between them, determining that the outbreaks of both locations were produced by the same viral strain, and have an identity of 97.5-97.7% with strains from Israel and 97.0-97.1% with strains from Thailand. The hypothetical protein from TiLV segment 4 was determined to have structural homology to the neuraminidase N6 protein from English duck influenza A virus with 12% coverage, 44% identity, and 24.9% confidence.El objetivo del presente estudio fue la caracterización molecular del segmento 4 del virus de la tilapia de lago (TiLV) detectado en tilapias de cultivo de los departamentos de Piura (Costa) y San Martín (Selva) en un brote ocurrido en 2017-2018. En el brote se obtuvo 26 muestras positivas a TiLV, de las cuales se seleccionaron cinco muestras positivas. El diagnóstico de estas muestras se realizó a través de un RT-PCR anidado con cebadores dirigidos al segmento 3 y los productos de PCR fueron secuenciados. Para la amplificación y análisis del segmento 4 del genoma del TiLV se realizó un RT-PCR donde se diseñaron cebadores específicos. La secuenciación se hizo con la empresa Macrogen (Corea del Sur), mediante secuenciación bidireccional por el método de Sanger automatizado. El análisis filogenético se realizó a partir de las secuencias alineadas por medio del método de Neighbor-Joining (NJ) y la característica de la proteína hipotética del gen se realizó con el programa Phyre2. Se obtuvieron cuatro secuencias completas del segmento 4 (1 de Piura y 3 de San Martín) con una longitud de 1190 pb siendo comparadas con dos secuencias de Israel y una de Tailandia, cepas referenciales correspondientes al segmento 4 de TILV publicadas GeneBank. El análisis filogenético del segmento 4 determinó la presencia de un genogrupo TiLV local, además de indicar que las muestras peruanas presentan mayor relación genética con el clado de cepas de Israel. El análisis de distancia genética muestra que las muestras peruanas mostraron valores de identidad nucleotídica de 99.7-100% entre ellas, determinando que los brotes de ambos lugares fueron producidos por la misma cepa viral, y tienen una identidad de 97.5-97.7% con cepas de Israel y 97.0-97.1% con cepas de Tailandia. Se determinó que la proteína hipotética a partir del segmento 4 del TiLV tiene una región con una homología estructural con la proteína neuraminidasa N6 del pato inglés con 12% de cobertura, 44% de identidad y 24.9% de confianza

Identificación y caracterización de Aeromonas sp patógenas aisladas de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) clínicamente enfermas cultivadas en piscigranjas del Perú

The present research aimed at the biochemical characterization and molecular identification of pathogenic strains of Aeromonas sp, isolated from juvenile rainbow trout with clinical signs compatible with aeromoniasis in six fish farms in Junín (2), Pasco (2), Cajamarca (1) and Ancash (1), Peru. In total, 60 juvenile trout of 4-5 months were selected, with suggestive signs of outbreaks of aeromoniasis between 2017 and 2018. Euthanasia and necropsy were performed and the external and internal lesions present were recorded. Bacterial isolation of spleen and anterior kidney samples was carried out on TSA and GSP agar for 24-48 hours at 25 °C, bacterial colonies were characterized by biochemical tests and identified by conventional PCR using specific primers of the 16S rRNA gene (Aeromonas spp.), fstA (A. salmonicida) and gyrB (A. hydrophila), and sequencing was performed and confirmed by BLAST analysis (NCBI). The external lesions were melanosis, necrotic and haemorrhagic fins, skin ulcers and abdominal distention. Internal lesions were hepatomegaly, splenomegaly, and petechial haemorrhage in the liver, pyloric cecum, and peritoneal fat. Twelve strains were isolated in GSP (7 from Junín and 5 from Cajamarca), characterized as Aeromonas spp, being negative in the Pasco and Ancash samples. The biochemical tests determined four strains as Aeromonas salmonicida and eight as mobile Aeromonas sp, differing by motility and indole tests. Molecular identification by PCR determined four A. salmonicida strains from Junín, one A. hydrophila strain from Cajamarca and seven Aeromonas spp mobile strains (3 from Junín and 4 from Cajamarca) that were negative to the PCR of A. salmonicida and A. hydrophila. BLAST analysis (NCBI) confirmed the strains A. salmonicida and Aeromonas spp (98-100% identity). Furthermore, the Cajamarca strain (identified as A. hydrophila by biochemistry) presented 95.65% identity with A. hydrophila subspecies dhakensis. In conclusion, Aeromonas salmonicida, A. hydrophila subspecies dhakensis and other pathogenic mobile Aeromonas produce symptoms associated with aeromoniasis in juvenile rainbow trout in the Junín and Cajamarca fish farms. It is the first time that A. hydrophila subsp. dhakensis is detected in the country.La investigación tuvo como objetivo la caracterización bioquímica e identificación molecular de cepas patógenas de Aeromonas sp aisladas de truchas arcoíris juveniles con signología compatible a aeromoniasis, cultivadas en seis piscigranjas de los departamentos de Junín (2), Pasco (2), Cajamarca (1) y Ancash (1), Perú. Se seleccionaron 60 truchas juveniles de 4-5 meses, con signología sugerente de brotes de aeromoniasis entre 2017 y 2018. Se realizó la eutanasia y necropsia y se registraron las lesiones externas e internas presentes. Se efectuó el aislamiento bacteriano de muestras de bazo y riñón anterior en agar TSA y GSP por 24-48 horas a 25 °C, se caracterizaron las colonias bacterianas mediante pruebas bioquímicas y se identificaron por PCR convencional utilizando cebadores específicos del gen ARNr 16S (Aeromonas spp.), fstA (A. salmonicida) y gyrB (A. hydrophila). Además, se realizó la secuenciación y se confirmó por análisis BLAST (NCBI). Las lesiones externas registradas fueron melanosis, aletas necróticas y hemorrágicas, úlceras en la piel y distensión abdominal. Las lesiones internas fueron hepatomegalia, esplenomegalia y hemorragia petequial en hígado, ciegos pilóricos y grasa peritoneal. Se aislaron 12 cepas en GSP (7 de Junín y 5 de Cajamarca), caracterizadas como Aeromonas spp, siendo negativas en las muestras de Pasco y Ancash. Las pruebas bioquímicas determinaron cuatro cepas como Aeromonas salmonicida y ocho como Aeromonas sp móviles, diferenciándose por pruebas de motilidad e indol. La identificación molecular por PCR determinó cuatro cepas A. salmonicida procedentes de Junín, una cepa A. hydrophila de Cajamarca y siete cepas móviles Aeromonas spp (3 de Junín y 4 de Cajamarca) que fueron negativas a la PCR de A. salmonicida y A. hydrophila. El análisis BLAST (NCBI) confirmó las cepas A. salmonicida y Aeromonas spp (identidad de 98-100%); además, la cepa de Cajamarca (identificada como A. hydrophila por bioquímica) presentó identidad de 95.65% con A. hydrophila subespecie dhakensis. En conclusión, Aeromonas salmonicida, A. hydrophila subespecie dhakensis y otras Aeromonas móviles patógenas causan signología asociada a aeromoniasis en truchas arcoiris juveniles en las piscigranjas de Junín y Cajamarca. Es la primera vez que se detecta A. hydrophila subsp. dhakensis en el país.