Variação sazonal das proteínas do plama seminal de caprinos (Capra hircus) da raça Moxotó.

Resumo: Fatores climáticos, como as altas temperaturas ambientais no semiárido do Nordeste, podem influenciar a atividade reprodutiva do macho caprino. Sabe-se que nessa espécie, a sazonalidade reprodutiva é uma característica importante na limitação da produtividade. Dentre as raças caprinas, a Moxotó representa valioso material genético, pois se caracteriza como animais altamente adaptados ao clima tropical. O estudo de componentes do plasma seminal representa uma alternativa para avaliar o desempenho reprodutivo, através do conhecimento de fatores que interferem diretamente no processo de fertilização, podendo vir a ser considerados como biomarcadores. Estudos têm demonstrado que as proteínas do plasma seminal participam da regulação de diversos processos associados à fisiologia reprodutiva. Este trabalho teve como objetivo identificar as variações do perfil protéico em diferentes períodos do ano, e sua relação com as características espermáticas em caprinos da raça Moxotó, criados no semiárido Nordestino, através da eletroforese bidimensional e espectrometria de massa. Verificou-se que a variação sazonal do clima nesta região mostrou não interferir nos parâmetros espermáticos dos caprinos, apresentando prevalência de proteínas ácidas e de baixo peso molecular em ambos os períodos. No entanto, o período seco apresentou menor diversidade de proteínas diferencialmente expressas em relação ao período chuvoso. Foram detectados dois spots protéicos, exclusivamente no período chuvoso, sugerindo pertencerem à família das GSPs. Na espectrometria de massa foram identificadas oito proteínas, sendo as de função conhecida e presentes no período seco, a histone H100-like, que protege a cromatina, e a RNA polymerase, envolvida na transcrição durante a espermatogênese. Já no período chuvoso identificou-se a immunoglobulin heavy chain, que protege os espermatozoides de efeitos danosos do ambiente. Os resultados obtidos mostram pela primeira vez o fingerprinting do plasma seminal de caprinos nativos Moxotó ao longo do ano na região Nordeste. Esta pesquisa poderá subsidiar futuros estudos de caracterização protéica do plasma seminal visando identificar biomarcadores para a raça Moxotó. Abstract: Climatic factors such as the high ambient temperatures in the semiarid Northeast, can influence the reproductive activity of the male goat. It is known that in this species, the seasonality is an important feature reproductive limiting productivity. .Among the goat breeds, the Moxotó presents a valuable genetic material once the animals are knowing as highly adapted to the tropical climate. The study of seminal plasma components represents an alternative to evaluate the reproductive performance through knowledge of factors that directly interfere with the fertilization process and may come to be regarded as biomarkers. Studies have shown that the seminal plasma proteins are involved in the regulation of various processes associated with reproductive physiology. This work aimed to identify changes in protein profiles in different periods of the year, and its relationship with sperm characteristics in Moxotó goats, by two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry. It was found that the seasonal variation in this region showed not interfere with sperm parameters goats, showing prevalence of acidic proteins and low molecular weight in both periods. However, the dry period showed lower diversity of proteins differentially expressed in relation to rainy season. Two protein spots were detected exclusively in the rainy season, suggesting they belong to the GSP family. In mass spectrometry have been identified eight proteins, from which two of them, the histone-like H100 and the RNA polymerase are present in the dry season and protects the chromatin and it is involved in the transcription during the spermatogenesis, respectively. The other one, the immunoglobulin heavy chain, present in the rainy season, protects the spermatozoids to deleterious environment. This results showed for the first time the fingerprinting of Moxotó goat seminal plasma throughout the year in the Northeast. This research can facilitate future studies of seminal plasma protein characterization in order to identify biomarkers for Moxotó.Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Universidade Estadual Vale do Acaraú, Sobral. Orientadora: Ângela Maria Xavier Eloy (Embrapa Caprinos e Ovinos); Co-orientador: Raymundo Rizaldo Pinheiro (Embrapa Caprinos e Ovinos)

Comparação de três métodos de extração de DNA genômico para análises moleculares em Stylosanthes guianensis.

O objetivo deste trabalho foi comparar a quantidade e qualidade do DNA isolado de folhas de S. guianensis pelos métodos de Bonato et al. (2002), de Faleiro et al. (2003) e um método baseado no de Bonato et al. (2002), mas com modificações que resultem um DNA mais puro e em quantidade suficiente para execução de diversas análises moleculares, incluindo amplificação, clonagem e sequenciamento.bitstream/CNPGC-2010/13216/1/CT36.pd

Variabilidade genética de acessos de Brachiaria humidicola utilizando a técnica de RAPD.

Com o objetivo de avaliar a variabilidade genética em Brachiaria humidicola, 58 acessos que constituem o banco de germoplasma da Embrapa Gado de Corte tiveram seus DNAs extraídos e amplificados utilizando 10 primers de RAPD. Após a análise dos perfis eletroforéticos em gel de agarose 1,5%, uma matriz de similaridade foi gerada utilizando-se o coeficiente de Jaccard e os acessos foram agrupados pelos métodos UPGMA e de Tocher

Análise da intensidade de volume diferencialmente expressa de proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Moxotó nos períodos seco e chuvoso do semiárido Nordestino.

O objetivo desse trabalho foi identificar proteínas com intensidade de porcentagem de volume (%Vol) diferencialmente expressas no plasma seminal de caprinos da raça Moxotó nos períodos seco e chuvoso, com identificação do ponto isoelétrico e massa molecular, através da técnica de eletroforese bidimensional

Seleção de caprinos Moxotó para Núcleo de Conservação a partir de marcadores microssatélites.

Resumo: Foram testados 14 marcadores microssatélites em um estudo piloto para inferir a diversidade genética em 25 amostras de DNA genômico de caprinos da raça Moxotó provenientes de um rebanho particular e selecionar quais deveriam ser incorporados em um Núcleo de Conservação da mesma raça Moxotó. Os resultados comparados indicaram elevada heterozigosidade (He e Ho médios = 0,572), presença de alelos diagnósticos e relação genética entre as duas populações (FIS médio = 0,417). Esses são parâmetros desejáveis para candidatos a serem introduzidos em Núcleos com baixa diversidade, contudo, a alta variabilidade também pode indicar eventos de introgressão. Dessa forma, após uma análise de coordenadas principais, foi observado um agrupamento dos indivíduos em três diferentes grupos. Recalculou-se o coeficiente de co-ancestralidade e os alelos diagnósticos. Os resultados indicaram relação genética e presença de alelos diagnósticos exclusivos em dois desses grupos. Ao selecionar animais para Núcleos de Conservação é preciso levar em consideração as necessidades do Núcleo: aumento de variabilidade, manutenção do padrão da raça, evitar introdução de alelos não pertencentes à raça. Verificou-se, assim, que os marcadores microssatélites constituem ferramenta adequada para auxiliar essa seleção. [Selection of Moxotó goats for Conservation Nucleus from microsatellite markers]. Abstract: We tested 14 microsatellite markers in a pilot study to infer the genetic diversity in 25 samples of genomic DNA of Moxotó goats from a particular herd and to select which should be incorporated into a conservation nucleus of Moxotó goats. The results showed high heterozygosity (He and Ho mean = 0.572), presence of diagnostic alleles and genetic relationship between the two populations (FIS mean = 0.417). These parameters are interesting for candidates to be introduced in Nuclei with low diversity, however, the high variability may also indicate introgression events. Thus, after a principal coordinates analyses, were observed that individuals formed three different groups. The coefficients of co-ancestry and diagnostic alleles were recalculated. The results showed presence of genetic relationship and exclusive diagnostic alleles in two groups. When selecting animals we must take into account the needs of the Conservation Nucleus: increase the variability, maintenance of breed standard, avoidance the introduction of other races alleles. It was found thus that microsatellite markers are suitable tool to help this selectio

Avaliação de diferentes métodos para extração de RNA total de folhas e raízes de braquiária.

A extração de RNA a partir de tecidos específicos consiste no primeiro passo para estudos de expressão gênica e caracterização de transcritos. Plantas, em geral, contêm grande quantidade de compostos fenólicos e/ou polissacarídeos em seus tecidos, o que pode comprometer a extração e purificação de moléculas de RNA. O objetivo principal deste trabalho foi testar diferentes protocolos para extrair RNA total de folhas e raízes de braquiária. Sementes de Brachiaria decumbens cv. Basilisk foram germinadas e plântulas com12 dias foram utilizadas. As extrações de RNA foram feitas em duplicatas de 200 mg de amostras de folhas ou raízes pulverizadas com nitrogênio líquido. Para as extrações de RNA de folhas foram testados os reagentes Trizol® e Brazol® e para as extrações de RNA de raízes foram testados estes reagentes mais dois kits comerciais: SV Wizard Isolation RNA system (Promega®) e Invisorb Spin Plant RNA Mini Kit (Invitek®). ANOVA e teste Tukey (1% de significância) foram utilizados para comparar as médias das concentrações e de qualidade das amostras de RNA extraídas. Os resultados mostraram diferenças não-significativas entre as concentrações e a qualidade do RNA extraído de folhas pelos reagentes Trizol® e Brazol®. Entretanto, para as amostras de raízes as concentrações e qualidade do RNA isolado foram significativamente diferentes, sendo o reagente Trizol® mais eficiente. Os dois kits isolaram menores concentrações de RNA com qualidade inferir a obtida com os dois reagentes testados. Para síntese de DNA complementar (cDNA) foram testadas duas enzimas: SuperScript RTII (Invitrogen®) e M-MLV-RT (Sigma®), sendo esta última mais eficiente, pois foi possível obter maior quantidade e qualidade de cDNA, com relação a presença de contaminantes. Esses resultados podem ser considerados como ponto de partida para a execução de trabalhos sobre expressão gênica em espécies de Brachiaria.bitstream/item/56268/1/BP29.pd

Análise da diversidade genética em Stylosanthes guianensis utilizando marcadores RAPD.

O conhecimento da variabilidade genética e da relação entre diferentes acessos de Stylosanthes guianensis é importante para maximizar o uso dos recursos genéticos disponíveis. Este trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade genética em 20 acessos dessa espécie, pertencentes ao banco de germoplasma da Embrapa Gado de Corte, usando marcadores RAPD (DNA Polimórfico Amplificado ao Acaso). Foram selecionados 40 primers randômicos, que produziram um total de 210 bandas; destas, 82 polimórficas (39,05%). Os dados obtidos foram utilizados para gerar uma matriz de similaridade genética usando o coeficiente de Jaccard. A similaridade genética variou de 0,747 a 0,945, o que indicou uma variabilidade genética pouco acentuada entre os acessos estudados. Os acessos com menor similaridade genética foram SG01 e SG14. Os resultados das análises de agrupamento com os métodos UPGMA (Agrupamento com Média Aritmética Não Ponderada) e Tocher foram similares. Apesar da baixa variabilidade genética detectada entre os 20 acessos, estes foram separados em nove grupos distintos pelo método UPGMA e seis grupos pelo método de Tocher.bitstream/CNPGC-2009-09/12415/1/BP20.pd

A exploração de algumas características agronômicas e morfológicas na seleção de Panicum maximum para condições silvipastoris.

Sistemas silvipastoris são uma alternativa sustentável de produção animal e vegetal e sua utilização tem crescido nos últimos anos. Seu sucesso depende da identificação de gramíneas tolerantes ao sombreamento. Com o objetivo de avaliar parâmetros genéticos que possam determinar a seleção e o melhoramento de Panicum maximum, foi realizado um experimento na Embrapa Gado de Corte, em Campo Grande, MS, em vasos, com 25 genótipos promissores sob três níveis de sombreamento artificial (0, 50 e 70%). Foram realizados quatro cortes e avaliados as produções das matérias secas total e foliar e de raízes no último corte, porcentagem de folhas, altura das plantas, número de perfilhos e valores SPAD. Altas herdabilidades foram encontradas para numero de perfilhos, porcentagem de folhas e altura das plantas, indicando uma elevada acurácia na seleção para estas características. Com exceção da variável matéria seca de raízes, as outras características apresentaram uma alta correlação entre os ambientes, portanto, a seleção pode ser realizada independente dos níveis de sombreamento. O número de perfilhos apresentou a maior variação genética disponível para a realização do melhoramento, devido ao seu alto coeficiente de variação genética. A variável produção de raízes, é importante na seleção de genótipos em condições de sombreamento, por ter sido a variável que mais foi afetada pelos níveis de sombreamento.CNPGC