Učinak faktora rasta i antioksidanta na in vitro dozrijevanje i diobu oocita in vitro proizvedenih embrija indijskog bivola (Bubalus bubalis).

The present study was carried out to evaluate the effect of growth factor in combination with antioxidant on the in vitro maturation (IVM) rate of oocytes and cleavage rates of in vitro fertilized (IVF) Indian Bubalus bubalis embryos. The cumulus oocyte complexes (COCs) were collected from slaughterhouse ovaries by aspirating follicles, and kept in maturation media (MM) for 24 h. The MM consisted of Group-1 (Control MM) - TCM 199 + 10% FBS + PMSG (20 IU/mL) + hCG (10 IU/mL) + Sodium pyruvate (0.80 mM) + L-glutamine (2 mM) + Gentamicin (50 μg/mL), Group-2 - Control MM + Epidermal growth factor (EGF) (10 ng/mL) + β-mercaptoethanol (β-ME) (25 μM), Group -3 - Control MM + EGF (20 ng/mL) + β-ME (100 μM), Group-4 - Control MM + EGF (100 ng/mL) + β-ME (500 μM). After maturation in diverse maturation media, the media used for IVF and the subsequent development of embryos was the same in all groups. The present results revealed that 20 ng/mL EGF + 100 μM β-ME concentrations were optimum and showed a significant effect on oocyte maturation and further development. Also high concentrations of EGF + β-ME (100 ng/mL + 500 μM), showed a decrease in the cumulus expansion rate, polar body formation rate and cleavage rates. A significant improvement in cleavage rate was observed when oocytes were matured in maturation medium with 20 ng/mL EGF + 100 μM β-ME and capacitation and fertilization was carried out in BO medium compared with TALP medium (64.8 ± 3.8 vs 44.1 ± 2.9). No significant difference in cleavage rate was observed for oocytes matured in the control group, control group + 10 ng/mL EGF + 25 μM β-ME and control group + 100 ng/mL EGF + 500 μM β-ME, between BO and TALP medium, indicating the beneficial effect of the addition of 20 ng/mL EGF + 100 μM β-ME to the maturation media for improved Bubalus bubalis embryo production under in vitro culture.Istraživanje je poduzeto s ciljem da se procijeni učinak kombinacije čimbenika rasta i antioksidanta na in vitro dozrijevanje oocita i diobu in vitro proizvedenih zametaka indijskog bivola (Bubalus bubalis). Kompleksi kumulus oocita bili su prikupljeni s jajnika na klaonici aspiracijom folikula i držani u mediju za dozrijevanje tijekom 24 sata. Medij za dozrijevanje 1. skupine (kontrolne) sadržavao je TCM 199, 10% FBS, PMSG (20 IJ/mL), hCG (10 IJ/mL), natrijev piruvat (0,80 mM), L-glutamin (2 mM) i gentamicin (50 μg/mL). Mediji za dozrijevanje pokusnih skupina bili su sljedećeg sastava: 2. skupina, isto kao kontrolna uz dodatak epidermalnog faktora rasta EGF (10 ng/mL) i β-merkaptoetanola (β-ME) (25 μM); 3. skupina, kao i medij u kontrolnoj skupini s dodatkom EGF (20 ng/mL) i β-ME (100 μM) i 4. skupina, kao i kontrolna uz dodatak EGF (100 ng/mL) i β-ME (500 μM). Nakon dozrijevanja u različitim medijima, za in vitro oplodnju i razvoj embrija u svim skupinama korišten je isti medij. Rezultati pokazuju da su koncntracije od 20 ng/mL EGF i 100 μM β-ME bile optimalne i pokazivale značajan učinak na dozrijevanje oocita i budući razvoj. Također, visoke koncentracije EGF i β-ME (100 ng/mL + 500 μM) pokazale su smanjenje stupnja ekspanzije kumulusa, stupnja formiranja polarnog tijela i stupnja diobe. Signifikantno poboljšanje stupnja diobe opaženo je kod dozrijevanja oocita u mediju kojem je dodano 20 ng/mL EGF i 100 μM β-ME, a kapacitacija i oplodnja provedena je u BO mediju u usporedbi s TALP medijem (64,8 ± 3,8 prema 44,1 ± 2,9). Signifikantna razlika nije utvrđena za stupanj diobe kod oocita koje su dozrijevale u kontrolnoj skupini, u skupini s dodatkom 10 ng/mL EGF i 25 μM β-ME, skupini s dodatkom 100 ng/mL EGF i 500 μM β-ME, kao i između BO and TALP medija. Navedeno ukazuje na povoljan učinak dodavanja 20 ng/mL EGF i 100 μM β-ME u medij za dozrijevanje embrija indijskog bivola (Bubalus bubalis) koji su proizvedeni uz pomoć in vitro kulture