Detecção de vírus entéricos como medida de qualidade em água potável: situação atual e limitações

A água potável deve ser livre de poluição fecal. Os métodos clássicos de determinação de contaminação fecal da água baseiam-se na detecção de coliformes fecais. Todavia, vírus de excreção fecal (vírus entéricos) podem estar presentes mesmo na ausência de coliformes detectáveis e constituir risco como agentes causadores de epidemias na população humana. A presente revisão traz conceitos introdutórios sobre vírus entéricos, as técnicas atualmente disponíveis para análise virológica da água e os entraves técnicos e conceituais para a implementação de tais procedimentos na rotina do monitoramento de qualidade da água.Palavras-chave: Análise Virológica da Água. Vírus Entéricos. Água Potável.AbstractDrinking water should be free of fecal pollution. Classical methods for determination of fecal contamination of water are based on the detection of fecal coliforms. However, viruses of fecal excretion (enteric viruses) may be present even on the absence of detectable coliforms being a risk as causative agents of epidemics on the human population. The present review contains introductory concepts about enteric viruses, techniques which are presently available for viral analysis of water and the possible technical and conceptual barriers regarding the implementation of such procedures on the routine monitoring of water quality.Keywords: Viral Analysis of Water. Enteric Viruses. Drinking Water

Crise hídrica, saúde e parâmetros de qualidade microbiológica da água no Brasil

Viruses and other microorganisms are responsible for waterborne diseases such as gastroenteritis and hepatitis. The microbial contamination markers currently adopted (fecal coliforms) already show how seriously Brazilian waters are contaminated by fecal matters. However, some evidences suggest that additional parameters should be adopted for monitoring the microbiological quality of water. The extent of waste collection and treatment activities in Brazil is alarming; and waste is a major source of contamination of our waters. Also, microbial contamination agents are only partially monitored, and all of these factors lead to the current situation in which we are faced with various endemic waterborne diseases. Such vulnerable situation is likely to aggravate more when water is scarce.Vírus e outros microrganismos são responsáveis por doenças de veiculação hídrica, tais como gastrenterites e hepatites. Os marcadores de contaminação microbiológica correntemente adotados (coliformes fecais) já demonstram a gravidade da situação de contaminação das águas brasileiras por dejetos. Todavia, uma série de evidências demonstra que parâmetros complementares deveriam ser adotados para o monitoramento da qualidade microbiológica da água. Os níveis de coleta e tratamento de esgoto no Brasil são alarmantes, sendo essa uma fonte importante da contaminação de nossas águas. Adicione-se a isso um monitoramento parcial dos contaminantes microbiológicos e temos a atual situação de endemicidade de várias das enfermidades de veiculação pela água. Tal situação de vulnerabilidade tende a se agravar ainda mais em situações de crise de disponibilidade de água

Respostas de anticorpos em camundongos após imunização com vírus respiratório sincicial bovino inativado utilizando diferentes adjuvantes

Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) causes pneumonia in young cattle. Modified-live-virus (MLV) and inactivated vaccines are currently used for the control of clinical effects of BRSV infections in cattle. On the present research, the stimulation of specific anti-BRSV immunoglobulin isotypes was investigated, through the use of different commercially available adjuvants (Water-in-oil emulsion, Quil A, Aluminum-hydroxide) in inbred mice (Balb/C and C57BL/6). BRSV antibodies were measured using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the results were compared to the antibody levels induced by immunization of animals using live-BRSV-virus. Water-in-oil emulsion and alum- adjuvant preparations induced higher levels of IgG1 immunoglobulins, whereas Quil A favored the production of IgG2 antibodies, this last being a more appropriate response profile for the specific case of BRSV. Not using adjuvants resulted in poor levels of specific antibodies. The isotype profile of specific antibodies obtained varied greatly depending on the adjuvants used. This information may be useful for the formulation of more effective BRSV inactivated vaccines; however, these findings have to be confirmed in cattle.O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) causa pneumonia em bovinos jovens. Vacinas de vírus vivo modificado (MLV) e vacinas inativadas são atualmente utilizadas para o controle dos efeitos clínicos de infecções pelo BRSV em bovinos. No presente trabalho, investigou-se a estimulação dos isotipos de imunoglobulinas específicas anti-BRSV, através da utilização de diferentes adjuvantes disponíveis comercialmente (água em óleo de emulsão, Quil A, hidróxido de alumínio) em camundongos isogênicos (Balb/C e C57BL/6). Anticorpos contra o BRSV foram medidos usando-se um ensaio imunoenzimático (ELISA), e os resultados foram comparados com os níveis de anticorpos induzidos pela imunização de animais utilizando-se o BRSV vivo. As preparações em que se empregou óleo mineral e alumínio como adjuvantes induziram altos níveis de imunoglobulinas IgG1, enquanto QuilA favoreceu a produção de anticorpos de classe IgG2, sendo este último um perfil de resposta mais desejável para o caso específico de BRSV. A não utilização de adjuvantes resultou em baixa produção de anticorpos específicos. O perfil de isotipos de imunoglobulinas secretados variou bastante conforme o adjuvante utilizado. Esta informação pode ser útil futuramente na formulação de vacinas inativadas mais eficazes contra o BRSV. Todavia, esses achados devem ser confirmados em bovinos.23322337Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Antibody responses in mice after immunization with inactivated bovine respiratory syncytial virus using different adjuvants

Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) causes pneumonia in young cattle. Modified-live-virus (MLV) and inactivated vaccines are currently used for the control of clinical effects of BRSV infections in cattle. On the present research, the stimulation of specific anti-BRSV immunoglobulin isotypes was investigated, through the use of different commercially available adjuvants (Water-in-oil emulsion, Quil A, Aluminum-hydroxide) in inbred mice (Balb/C and C57BL/6). BRSV antibodies were measured using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the results were compared to the antibody levels induced by immunization of animals using live-BRSV-virus. Water-in-oil emulsion and alum- adjuvant preparations induced higher levels of IgG1 immunoglobulins, whereas Quil A favored the production of IgG2 antibodies, this last being a more appropriate response profile for the specific case of BRSV. Not using adjuvants resulted in poor levels of specific antibodies. The isotype profile of specific antibodies obtained varied greatly depending on the adjuvants used. This information may be useful for the formulation of more effective BRSV inactivated vaccines; however, these findings have to be confirmed in cattle

MULTIPLEX SYBR® GREEN-REAL TIME PCR (qPCR) ASSAY FOR THE DETECTION AND DIFFERENTIATION OF Bartonella henselae AND Bartonella clarridgeiae IN CATS

A novel SYBR® green-real time polymerase chain reaction (qPCR) was developed to detect two Bartonella species, B. henselae and B. clarridgeiae, directly from blood samples. The test was used in blood samples obtained from cats living in animal shelters in Southern Brazil. Results were compared with those obtained by conventional PCR targeting Bartonella spp. Among the 47 samples analyzed, eight were positive using the conventional PCR and 12 were positive using qPCR. Importantly, the new qPCR detected the presence of both B. henselae and B. clarridgeiae in two samples. The results show that the qPCR described here may be a reliable tool for the screening and differentiation of two important Bartonella species.Um novo teste baseado na reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) com SYBR ® Green foi desenvolvido para detectar duas espécies de Bartonella, B. henselae e B. clarridgeiae, diretamente em amostras de sangue. Este teste foi utilizado em amostras de sangue obtidas de gatos que vivem em abrigos de animais do sul do Brasil. Os resultados foram comparados aos obtidos pelo PCR convencional utilizado para a detecção de Bartonella spp. Das 47 amostras analisadas, oito foram positivas no PCR convencional e 12 foram positivas para qPCR. A reação de qPCR, permitiu a detecção da presença simultânea de B. henselae e B. clarridgeiae em duas destas amostras. Os resultados mostram que a qPCR aqui descrita pode ser uma ferramenta confiável para a detecção e diferenciação de duas espécies importantes de Bartonella spp

Vírus respiratório sincicial bovino

O Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) é uma causa importante de doença respiratória, principalmente em bovinos jovens, caracterizada por pneumonia intersticial. A distribuição das infecções pelo BRSV é mundial e o vírus foi identificado em diferentes episódios no Brasil. O vírus pertence ao gênero Pneumovirus da família Paramyxoviridae e o seu genoma RNA não-segmentado de sentido negativo codifica para 10 proteínas. As proteínas de fusão (F) e de adesão (G) constituem os principais alvos para o sistema imune do hospedeiro. Esse fato deve estar relacionado com a grande variabilidade destas proteínas e de seus genes correspondentes, conforme determinado tanto por anticorpos monoclonais quanto por análise filogenética com base em seqüências de nucleotídeos. A transmissão, resposta imune e patogenia das infecções pelo BRSV, foram estudadas no hospedeiro natural sob condições naturais e experimentais; todavia, alguns aspectos da imunobiologia da infecção são ainda pouco conhecidos. O uso de modelos experimentais, especialmente roedores, pode fornecer novas informações sobre esse assunto. O estado atual do diagnóstico laboratorial das infecções e as medidas de controle para prevenir surtos de BRSV também são apresentados e discutidos

Low occurrence of Hepatitis A virus in water samples from an urban area of Southern Brazil

Hepatitis A virus (HAV), a member of Picornaviridae family, is the main causative agent of acute viral hepatitis in the world, mainly in developing countries. HAV may be present in contaminated water and food and its presence is often associated to a lesser extent with socioeconomic factors and environmental quality. The main goals in the present study were to standardize a cell culture combined to a polymerase chain reaction protocol for the detection and quantification of viral viability and analyze whether the virus could be found in water samples collected in four urban streams of Sinos River watershed. Virus recovery was assayed from known virus concentrations measured in experimentally contaminated raw and ultrapure water (MilliQ®). Recovery rates ranged from 270% in raw water to 15,000% in ultrapure water. In a second step, a qPCR coupled to a previous passage in cells, demonstrated more analytical sensitivity when compared to samples assayed without a previous passage in cell cultures. HAV genome was detected in only 1 of 84 samples analyzed, pointing to a very low occurrence of HAV in water samples in the studied region. These findings are remarkable, since no more than 5% of the domestic sewage in this area is treated pointing to a low occurrence of HAV in the population living nearby during the study period

Molecular detection and phylogenetic analysis of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in swabs and lung tissues of adult cattle

Bovine respiratory syncytial viruses virus (BRSV) is one of the etiologic agents of pneumonia in young cattle. Few studies have been made aiming detection of the virus in samples collected from adult animals, especially those asymptomatic bovines. However, it is assumed that infections in these groups may occur mostly asymptomatic and this would be an important mechanism for maintaining of BRSV in herds. In this study, the goal was to conduct an analysis of the occurrence of asymptomatic infections by BRSV in lung samples (n=68) and nasal swabs (209) taken from adult animals collected in abattoirs from Southern and Southeastern Brazil respectively, to detect via polymerase chain reaction the occurrence of infected animals in populations of adult cattle. The samples that resulted positive (6) on RT-PCR were subsequently subjected to cutting with restriction enzymes and sequencing for genetic characterization (2 samples). All samples belongs to subgroup B of BRSV, which is reported as the one circulating in Brazil. The results obtained demonstrate that BRSV may be present in samples taken from adult animals, which is in agreement the hypothesis that infections in adults run in a sub-clinical way that may be of importance as a maintenance mechanism of the virus in bovine herds.O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) é um dos agentes etiológicos de pneumonias em bovinos jovens. Poucos estudos foram realizados visando à detecção do agente em amostras coletadas de animais adultos, e em especial de bovinos assintomáticos. No entanto, presume-se que as infecções ocorridas nestes grupos possam ocorrer em sua maioria de forma assintomática e este seria um mecanismo importante para manutenção do BRSV nos rebanhos. No presente estudo, o objetivo foi realizar uma análise da prevalência de infecções assintomáticas pelo BRSV em pulmões (n=68) e swabs nasais (209) coletados de bovinos adultos coletadas em frigoríficos da região Sul e Sudeste respectivamente, no sentido de detectar por intermédio de reação da polimerase em cadeia qual a taxa de animais infectados em populações de animais adultos onde não ocorram sinais clínicos da infecção. As amostras positivas à RT-PCR (6) foram posteriormente submetidas ao corte com enzimas de restrição (REA) e sequenciamento para caracterização genética do gene F (2 das amostras). Todas as amostras se enquadram no subgrupo B de BRSV, o grupo circulante no Brasil conforme estudos anteriores. Os resultados obtidos demonstram que o BRSV pode estar presente em amostras obtidas de animais sadios, reforçando a hipótese de que infecções subclínicas fazem parte do mecanismo de manutenção do vírus nos rebanhos.961966Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Enterovírus como indicadores de qualidade da água

Enteroviruses belong to enteric virus group, which is composed by pathogens often isolated from water contaminated with fecal pollution. They receive this classification mainly due to their ability to replicate in the host’s gut and be transmitted through the fecal-oral route. This group of virus resist to high concentrations of chlorine, showing resistance to the usual protocols for treatment of water. Monitoring of fecal pollution in water is usually performed through the detection and quantification of fecal coliforms. When coliforms are present, it is recommendable to avoid the human consumption of water. However, several authors reported the presence of enteric viruses in water samples that are free of coliforms, this fact might indicate that this bacterial parameter is a non reliable indicator of fecal pollution. Besides, among the pathogens transmitted by water, the presence of enteroviruses is considered by WHO a reliable indicator of fecal contamination and related with epidemic diseases transmitted by water. This fact is exacerbated due the frequency of enterovírus causing habitual diseases, such as diarrhea and conjunctivitis, as well as more severe diseases, including meningitis and encephalitis.Os enterovírus fazem parte do grupo dos vírus entéricos, constituído de importantes patógenos, isolados com frequência de águas contaminadas por poluição fecal. Recebem essa classificação principalmente por suas características de replicação no trato intestinal do hospedeiro e transmissão pela via fecal-oral. Esse grupo de vírus resiste a altas concentrações de diferentes compostos clorados, apresentando, assim, resistência aos tratamentos habituais da água. Atualmente, o principal parâmetro utilizado para controle microbiológico da água são os coliformes fecais. Caso esses coliformes estejam presentes, deve-se evitar o consumo humano da água analisada. Porém, diversos autores têm discutido a presença de enterovírus em amostra de águas mesmo na ausência de coliformes, o que parece desmerecer essas bactérias como confiáveis marcadores de poluição fecal. Além disso, dentre os patógenos veiculados pela água, a presença de enterovírus é considerada pela OMS como sendo um indício de contaminação fecal e relacionada a epidemias de doenças de veiculação hídrica. Este fato é exacerbado por serem os enterovírus frequentes causadores de doenças habituais, tais como diarreias e conjuntivites, assim como doenças mais graves, incluindo meningoencefalites