2,558 research outputs found

    R&D spending and patents: levers of national development

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    Purpose – The level of R&D spending of a country tends to increase the national patent rate and, inconsequence, can collaborate with its economic development. However, there are a few empirical studiesinvestigating this phenomenon by comparing countries from all over the globe. The purpose of this paper is todisassemble the sources of R&D spending and identify the role of national patent applications as a mediatorin the relationship between R&D spending and national development.Design/methodology/approach – Panel data on patent applications in 35 countries of all continents(except Africa) over 15 years (from 1999 to 2013) regarding four levels of national R&D intensity (i.e. byenterprises, governments, higher education institutions and private non-profit organisations), gross domesticproduct (GDP) per capita, gross national income (GNI) and human development index (HDI) were collectedfrom the OCDE. Then, two-stage panel regressions were conducted to test the hypotheses.Findings – The empirical findings indicated that R&D spending from firms and higher educationinstitutions (public and private) help to directly improve national patent applications, thus contributing to thenational development (measured by GDP per capita, GNI per capita and HDI).Originality/value – The importance of this study was to show that the investments in R&D made byuniversities and firms are more effective in leading to patent applications, which contributes to promotingnational development. With these findings, governments can focus their efforts on stimulating these types ofinvestments if they want to foster the growth of national patent rates

    A “Deficiência” como problema filosófico

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    The renowned “History of Philosophy” is characterized as a set of reflections of a philosophical nature. It is carried out in different periods and territories. In each of these periods and territories, there is a profusion of concepts and categories whose fundamental premise is to address a specific theme or problem. This functions as the starting point of every act of philosophizing, an admiring astonishment thaumadizem (θαυμαδιζέμ) in the face of everything that is how it is. Is “disability”, the person with a disability, and their existence intended as a philosophical theme or problem? Would it be capable of awakening an admiring astonishment? thaumadizem. Would it be capable of initiating an act of philosophizing? Within the history of philosophy, very few pages are dedicated to dealing with “disabilities” and often intend to explain that disability constitutes a disarticulation of the standards of nature and culture. This article proposes to think about disability as a philosophical object, turning to the control machinery that constitutes the bodies of people with disabilities in a restrictive way. Determining what a person's body can or cannot do and where that body may or may not be. Thus, these machines build a preconceived, ableist understanding of what “disability” is.O que comumente se denomina de “História da Filosofia” caracteriza-se como um conjunto de reflexões de cunho filosófico, levadas a cabo em períodos e territorialidades distintas. Em cada um desses períodos e territorialidades há uma profusão das construções de conceitos e categorias que têm como premissa fundamental tencionar um tema/problema específico, que funciona como ponto inicial de todo ato de filosofar, um espanto admirativo – thaumadizem (θαυμαδιζέμ) – diante de tudo o que é como é. A “deficiência”... a pessoa com deficiência e sua existencialidade pode ser compreendida enquanto um tema/problema filosófico no interior da “História da Filosofia”? A “deficiência” é capaz de despertar um espanto admirativo iniciador um ato de filosofar? São escassas as páginas de escritos filosóficos que tratam da “deficiência” e, quando tencionada, é com o intuito de explicitar que a “deficiência” se constitui em uma desarticulação dos padrões da natureza e da cultura. Minha proposta no presente artigo é pensar o lócus da deficiência enquanto tema/problema filosófico, tendo como fio condutor algumas reflexões de Platão, Aristóteles e Lucrécio. Posteriormente, tencionarei as maquinarias de controle enquanto constituidoras restritivas dos corpos das pessoas com deficiência, as quais determinam o que um o corpo de uma pessoa com deficiência pode ou não fazer, onde esse corpo pode ou não estar. Assim, essas maquinarias edificam uma compreensão preconcebida, capacitista, sobre o que é “deficiência”

    Ultron: desmascarando os heróis

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    Faz quase uma década que os filmes de super-heróis levam milhões de pessoas ao cinema. Por óbvio que esse gênero de filme já existia, assim como as próprias HQ´s (Histórias em Quadrinhos). Contudo, seja pela evolução da tecnologia de filmagem e pós-produção, pelo marketing ou mesmo por aspectos econômicos, a realidade é que esses filmes, em especial da Marvel, transformaram a indústria do entretenimento. A grande base de seus personagens vem das criações de Stan Lee. Mas nem sempre os heróis são o que parecem. Esse artigo apresenta Ultron, personagem não criado por Stan Lee e, por isso, utilizado para iniciar a crítica de parte de seus heróis. Ultron auxiliará a compreender melhor esses personagens, sua estrutura comum e se eles são o que suas imagens dizem ser

    Avaliação da prevalência e posição de terceiros molares impactados de acordo com as classificações de Pell e Gregory e de Winter numa clínica universitária portuguesa

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    OBJETIVO: Determinar a prevalência e posição de terceiros molares impactados de acordo com as classificações de Winter e de Pell e Gregory, numa clínica universitária portuguesa. MATERIAIS E MÉTODOS: Foram analisadas as ortopantomografias realizadas pelos pacientes da FMDUL entre novembro de 2019 e maio de 2023. Os dados foram recolhidos por apenas um observador que apresentou uma taxa de concordância de 92,5%. Das ortopantomografias que respeitavam os critérios de inclusão e exclusão foram recolhidos diversos dados, entre os quais, a classificação de Winter e de Pell e Gregory. Foi considerado um nível de significância estatística de 5% (p < 0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foram analisadas 941 ortopantomografias. Destas, 23,7% apresentavam pelo menos um dente impactado e, em média, os pacientes apresentavam 2,2 dentes impactados. A prevalência de terceiros molares impactados foi de 12,4% e a presença de apenas um terceiro molar impactado foi o caso mais frequente (35%). O dente mais frequentemente impactado foi o dente 48 com 27,1%. A posição mais frequente nos terceiros molares superiores impactados, segundo a classificação de Winter, foi a posição distoangulada (48,6%) seguida pela posição vertical (29,3%), este resultado é corroborado pela literatura. Nos terceiros molares inferiores impactados, segundo a classificação de Winter, a posição mais frequente também foi a posição distoangulada (33,2%), este resultado diverge da literatura. Por fim, nos terceiros molares inferiores impactados, segundo a classificação de Pell e Gregory, a posição mais frequentemente encontrada foi a posição IIB (48%) seguida pela posição IIA (38,1%), resultado este que é corroborado pela literatura existente. CONCLUSÃO: Na população estudada, a prevalência de terceiros molares impactados foi de 12,4%. Segundo a classificação de Winter, a posição distoangulada foi a mais frequente, com 48,6% e 33,2%, no maxilar superior e inferior, respetivamente. Segundo a classificação de Pell e Gregory, 48% dos terceiros molares inferiores enquadram-se na posição IIB.OBJECTIVE: To determine the prevalence and position of impacted third molars according to Winter's and Pell and Gregory's classifications in a Portuguese university clinic. MATERIALS AND METHODS: Orthopantomographies performed by FMDUL patients between November 2019 and May 2023 were analyzed. Data were collected by only one observer, who showed a 92.5% agreement rate. From the orthopantomographies that met the inclusion and exclusion criteria, several data were collected, including Winter's classification and Pell and Gregory's classification. A 5% statistical significance level (p < 0.05) was considered. RESULTS AND DISCUSSION: A total of 941 orthopantomographs were analyzed. Of these, 23.7% had at least one impacted tooth and, on average, patients had 2.2 impacted teeth. The prevalence of impacted third molars was 12.4% and the presence of only one impacted third molar was the most frequent case (35%). The most frequently impacted tooth was tooth 48 with 27.1%. The most frequent position in impacted upper third molars, according to Winter's classification, was the distoangulated position (48.6%) followed by the vertical position (29.3%), this result is consistent with the literature. In the impacted mandibular third molars, according to Winter's classification, the most frequent position was also the distoangulated position (33.2%), this result differs from the literature. Finally, in impacted mandibular third molars, according to Pell and Gregory's classification, the most frequently found position was IIB (48%) followed by IIA (38.1%), this result is consistent with the literature. CONCLUSION: In the analyzed population, the prevalence of impacted third molars was 12.4%. According to Winter's classification, the distoangulated position was the most frequent, with 48.6% and 33.2% in the upper and lower jaws, respectively. According to Pell and Gregory's classification, 48% of the mandibular third molars were in position IIB

    Smart Recycle

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    Atualmente, a crescente procura demográfica por novos recursos tecnológicos, o seu crescimento habitacional e o crescimento económico têm trazido, à tona, uma discussão global sobre como devemos progredir como nação sem afetar a saúde das pessoas e o curso natural do planeta nos próximos anos. De acordo com os números divulgados pela Agência Portuguesa do Ambiente no seu relatório anual de resíduos, em 2020 cada habitante produziu 512 quilos de resíduos, equivalente a 1,40 por dia. A Agência alerta ainda quanto ao demasiado destino destes recursos aos aterros, aos quais vão parar mais de três em cada cinco quilos (64,2%) dos nossos resíduos urbanos. A taxa efetiva de reciclagem do país é de (18,3%), se compararmos com as metas estabelecidas pela União Europeia para o ano de 2025 (55%), ou seja, 3 vezes o valor atual, Portugal precisa de impulsos e algumas ações para estímulo à reciclagem inteligente e consciente. Um dos fatores abordados nesta dissertação é o avanço descontrolado dos resíduos gerados por cidadãos e empresas, a forma como estes são descartados na natureza, ações que o governo tem tomado e como o autor pretende ajudar o país na melhoria destes números aproximando-o das metas estabelecidas pela União Europeia. Importa destacar alguns factos importantes sobre a reciclagem de resíduos, nomeadamente, que (1) sem algum tipo de fiscalização/ incentivo/ local de descarte apropriado ou ajuda, muitos habitantes optam por descartar o lixo de forma mais simples e fácil; (2) não existem pontos de recolha seletiva suficientes na maioria dos países/ cidades, ou estes não podem ser facilmente encontrados pelos habitantes; (3) o acesso a serviços públicos para recolha em casa é muito escasso e/ ou mal gerido; (4) a identificação das características do material é ineficaz e impossibilita o descarte de forma correta; (5) é mais fácil utilizar a opção “lixo indiferenciado” se não houver incentivo ou alguma política de consciencialização aos habitantes; (6) a reciclagem correta traz inúmeros benefícios não só aos habitantes e ao meio ambiente, mas também à economia e às indústrias em geral. Nesta investigação desenvolveu-se uma aplicação completa Smart Recycle que procurou mitigar os problemas e pontos fracos encontrados durante o trabalho de pesquisa, para facilitar e tornar mais agradável e estimulante a forma com que os resíduos são caracterizados, descartados e reutilizados pelas diversas esferas organizacionais de modo a reduzir consideravelmente o descarte incorreto e mitigar este impacto no nosso planeta, tornando-o mais saudável e menos tóxico para nós e para as futuras gerações. Conclui-se que existem funcionalidades que poderão otimizar e apresentar aos envolvidos no processo de reciclagem benefícios mútuos de o fazer da forma correta permitindo, desta forma, incitar a um desenvolvimento educacional e étnico na sociedade de maneira geral.Currently, the growing population demand for new technological resources, housing growth, and economic growth has brought to the fore a global discussion about how we should progress as a nation without affecting people's health and the planet's natural course in the coming years. According to figures released by the Portuguese Environment Agency in its annual waste report, in 2020 each inhabitant produced 512 kilograms of waste, equivalent to 1.40 kilograms per day. The Agency also warns about the excessive destination of these resources to landfills, where more than three out of every five kilos (64.2%) of our municipal waste end up. The country's effective recycling rate is (18.3%), if we compare it to the targets set by the European Union for the year 2025 (55%), that is, 3 times the current value, Portugal needs impulses and some actions to encourage intelligent and conscious recycling. One of the factors addressed in this dissertation is the uncontrolled advance of waste generated by individuals and companies, ways in which they are discarded in nature, actions that the government has taken, and how the author intends to help improve these numbers, bringing the country closer to the goals established by European Union. Important facts about waste recycling are: • Without some type of inspection/ incentive/ appropriate disposal site or help, many inhabitants choose to dispose of garbage more simply and quickly; • There are not enough selective collection points in most countries/cities, or the inhabitants cannot easily find these; • Access to public services for collection at home is very scarce and/or poorly managed; • Material characteristics identification is ineffective and does not allow proper disposal; • It is easier to use the "common trash" option if there is no incentive or any policy to raise awareness among the inhabitants; • Correct recycling brings countless benefits to the inhabitants and the environment, and the economy and industries in general. In this investigation, a complete Smart Recycle application was developed that sought to mitigate the problems and flaws found during the research work, to facilitate and make more pleasant and exciting the way in which waste is characterized, discarded and reused by the various organizational spheres. in order to considerably reduce incorrect disposal and mitigate this impact on our planet, making it healthier and less toxic for us and for future generations. It is concluded that there are features that can optimize and present to those involved in the recycling process mutual benefits of doing it correctly, thus encouraging an educational and ethnic development in society in general.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

    Esclonamento de máquinas de cogeração utilzando programação inteira mista

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    As centrais termoelétricas convencionais convertem apenas parte do combustível consumido na produção de energia elétrica, sendo que outra parte resulta em perdas sob a forma de calor. Neste sentido, surgiram as unidades de cogeração, ou Combined Heat and Power (CHP), que permitem reaproveitar a energia dissipada sob a forma de energia térmica e disponibilizá-la, em conjunto com a energia elétrica gerada, para consumo doméstico ou industrial, tornando-as mais eficientes que as unidades convencionais Os custos de produção de energia elétrica e de calor das unidades CHP são representados por uma função não-linear e apresentam uma região de operação admissível que pode ser convexa ou não-convexa, dependendo das caraterísticas de cada unidade. Por estas razões, a modelação de unidades CHP no âmbito do escalonamento de geradores elétricos (na literatura inglesa Unit Commitment Problem (UCP)) tem especial relevância para as empresas que possuem, também, este tipo de unidades. Estas empresas têm como objetivo definir, entre as unidades CHP e as unidades que apenas geram energia elétrica ou calor, quais devem ser ligadas e os respetivos níveis de produção para satisfazer a procura de energia elétrica e de calor a um custo mínimo. Neste documento são propostos dois modelos de programação inteira mista para o UCP com inclusão de unidades de cogeração: um modelo não-linear que inclui a função real de custo de produção das unidades CHP e um modelo que propõe uma linearização da referida função baseada na combinação convexa de um número pré-definido de pontos extremos. Em ambos os modelos a região de operação admissível não-convexa é modelada através da divisão desta àrea em duas àreas convexas distintas. Testes computacionais efetuados com ambos os modelos para várias instâncias permitiram verificar a eficiência do modelo linear proposto. Este modelo permitiu obter as soluções ótimas do modelo não-linear com tempos computationais significativamente menores. Para além disso, ambos os modelos foram testados com e sem a inclusão de restrições de tomada e deslastre de carga, permitindo concluir que este tipo de restrições aumenta a complexidade do problema sendo que o tempo computacional exigido para a resolução do mesmo cresce significativamente.Conventional thermal power plants convert only part the of the energy resulting from fuel consumption in electric power, while a significant part is wasted as heat loss Combined Heat and Power (CHP) units allow to reuse the energy dissipated as heat and make it available for consumption either by domestic or industrial costumers. Electricity and heat production costs of CHP units are represented by a nonlinear function and a feasible operating region that is either convex or non-convex, depending on the unit’s characteristics. For these reasons, modelling CHP units in the context of the Unit Commitment Problem (UCP) has been of particular interest for generation companies that use such units in their operation. The goal of these companies is to decide, among CHP units and conventional thermal units and heat-only units, which should be turned on to meet the electricity or heat demand at minimum cost. In this work, two mixed integer programming models are proposed for solving the UCP with inclusion of CHP units: a nonlinear model that includes the real cost function of CHP units; and a model proposing a linearization of that function through a convex combination of a predefined number of extreme points. In both models, the non-convex feasible operating region of some CHP units is modelled by splitting it into two separate convex regions. Computational experiments performed with both models for multiple instances allowed to verify the effectiveness of the proposed linear model. This model allowed to obtain the optimal solutions achieved by the nonlinear model with significantly lower computational times. Moreover, both models were tested with and without the inclusion of ramp constraints, allowing to conclude tha such constraints increase the complexity of the problem in such a way that the time required solve the problem grows sharply when including these constraints

    Internet-of-Things: strategic research agenda evolution

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    Em 2007 foi constituído o European Research Cluster on the Internet of Things, com o objetivo de abordar o grande potencial de recursos baseados em Internet of Things na Europa e coordenar a convergência das atividades em curso. Esta instituição publica periodicamente Agendas Estratégicas de Investigação com previsões de tópicos de desenvolvimento e investigação tanto a curto, médio e longo prazo. É objetivo deste artigo, estudar essas Agendas e efetuar um levantamento dos tópicos, de forma a perceber a sua evolução ao longo do tempo, isto em termos de áreas que foram já investigadas (ou que a investigação já foi iniciada) bem como aquelas ainda não foram exploradas.The aim of European Research Cluster on the Internet of Things, established in 2007, is to address the large potential for Internet of Things-based capabilities in Europe and to coordinate the convergence of ongoing activities. This organization regularly publishes Strategic Research Agendas with short, medium and long term forecasts of development and research topics. The aim of this paper is to study these agendas and make an identification of topics, in order to understand its evolution over time, that in terms of areas that have already been researched (or the research has already started) as well as those not yet explored.Este trabalho foi financiado pelo projeto QVida+: Quality of Life Continuous Estimation for Effective Clinical Decision Support, Nº2015/003446 P2020 SI I&DT, (NUP, NORTE-01- 0247-FEDER-003446). Foi também suportado pela OptimizerLda, e pelo COMPETE: POCI-01-0145-FEDER-007043 e FCT – Fundação para a Ciência e Tecnologia UID/CEC/00319/2013Optimizer, Ldainfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

    contributo para a análise dos processos de decisão e de adaptação

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    Dissertação de Mestrado apresentada ao Instituto de Contabilidade e Administração do Porto para a obtenção do grau de Mestre em Tradução e Interpretação Especializadas, sob orientação do Doutor Manuel Moreira da Silva Esta versão não contém as críticas e sugestões dos elementos do júriA localização pode ser encarada como a evolução natural do processo de tradução em resposta às exigências de uma sociedade em constante evolução tecnológica. Ao localizador compete manter intacta a heterogeneidade própria de cada cultura local tentando ao mesmo tempo que as barreiras inerentes à transferência entre línguas e culturas não sejam um entrave para a troca de informação, partilha de saber e para a interacção. Desta forma, este trabalho inicia-se com uma breve abordagem ao conceito de tradução, como se manifestou e como se tornou, hoje em dia, uma tarefa essencial para a sociedade do conhecimento. De seguida, reflecte-se sobre o conceito de localização e sobre o seu surgimento e abordam-se as semelhanças que existem entre os vários tipos de localização. É neste capítulo, também, que se apresenta o foco deste trabalho: a localização de jogos. A localização de jogos engloba várias tarefas, desde a tradução de diálogos e da interface de utilizador, à localização de conteúdos multimédia como imagens ou vídeos, tarefas que são analisadas e descritas, sendo de seguida feita uma análise do mercado de jogos no nosso país e de que forma cada produtora de consolas se comporta em relação à localização de conteúdos. Através de análise de literatura e de notícias em sites de especialidade, a parte teórica do trabalho desenvolve-se e culmina com um caso prático que é a localização de um jogo. Tendo por base a observação da área e o processo de revisão da literatura, a análise da localização do jogo divide-se em duas partes: em primeiro lugar é feita uma análise funcional, isto é, todas as considerações feitas acerca de como o jogo foi localizado, desde problemas e soluções encontradas relacionadas com o software onde se procedeu à localização até problemas relacionados com o espaço limitado à tradução. Por último é feita uma análise do processo de localização onde se comentam opções linguísticas e tradutivas. Estas duas análises complementam-se e, muitas vezes também, convergem em diversas situações.Localization can be seen as the natural evolution of translation in response to the needs of a technological society that is continuously evolving. It is the localizer’s role to maintain the heterogeneity of every culture while trying to lessen the barriers intrinsic to the use of different languages and cultures so that they don’t become obstacles when sharing information and knowledge or when users interact. This thesis starts with a brief approach to the concept of translation, analysing some of the early definitions and its path to be an essential task in today’s knowledge society. The next chapter is dedicated to the definition of localization, by considering its evolution and pointing out the differences and similarities between the various types of localization. This chapter finishes by analysing the focus of the thesis: videogame localization. Game localization includes many tasks such as localizing dialogues and user interfaces or the localization of multimedia contents such as image and video. These tasks will be analysed and detailed as well as the video game market in Portugal and how each home console manufacturer positions itself in terms of localization. In order to prepare the case study implementation - the localization of a videogame -, we develop a literature and state-of-the-art analysis, as well as on the analysis of news on gaming websites. Based on both the space allocated to translation and the literature review, the analysis of the localization of the videogame is divided into two parts: first of all, a functional analysis is made so that it depicts every consideration about how the game was localized, considering the problems and solutions regarding the software used for localizing the game or problems regarding the space available for translation. Finally, an analysis of the localization process is developed in which translation and linguistic options are discussed. These two analysis complement themselves and converge in many situations, demonstrating the complexity of the task

    A performance analysis of distributed filtering algorithms for indoor pedestrian tracking

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    Trabalho de Conclusão de Curso (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Elétrica, 2017.A literatura recente indica que algoritmos de filtragem distribuída podem ter várias vantagens em relação a algoritmos centralizados, especialmente no que se refere a robustez, escalabilidade, uso de recursos de comunicação e flexibilidade. Neste contexto, este trabalho objetiva fornecer uma análise da performance de algoritmos de filtragem distribuída aplicados à estimação da posição de pesdestres em ambientes fechados. Particularmente, duas formas de algoritmos distribuídos serão testados: consenso por média ponderada e difusão. Um esquema de localização baseado em RFID é utilizado como teste para avaliar a performance dos algoritmos. Em especial, técnicas baseadas na diferença da fase de chegada são utilizadas para fornecer medições das distâncias e ângulos relativos entre as antenas e a etiqueta RFID. Simulações realizadas no software MATLAB indicam que algoritmos de difusão tem performance superior do que algoritmos de consenso na aplicação tratada neste trabalho. Além disso, a pequena diferença entre os erros quadráticos médios dos algoritmos centralizados e de difusão inspiram a utilização do último por seus outros benefícios.Recent literature suggests that distributed filtering algorithms may have several advantages over centralized ones, especially concerning robustness, scalability, use of communication resources and flexibility. In this context, this work aims to provide a performance analysis of distributed filtering algorithms for indoor pedestrian tracking, where a set of sensors are employed to estimate the position of a person in a room. More specifically, two forms of distributed algorithms will be investigated: weighted average consensus and diffusion. A localization scheme based on RFID is used as a testbed for the assessment of the performance of the algorithms. Particularly, phase difference of arrival techniques are applied to provide measurements of the relative distance and angle from the antennas to the RFID tag. Simulation experiments carried out in MATLAB indicate that the diffusion algorithm has superior performance than the weighted average consensus algorithm. Furthermore, the small difference in the root-mean-square error of centralized and diffusion algorithms inspires the use of the latter for its other benefits

    First molecular and biochemical characterization of the extracellular matrix of Saccharomyces cerevisiae

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    Programa Doutoral em Biologia Molecular e Ambiental (área de especialização em Biotecnologia Molecular)A levedura Saccharomyces cerevisiae, tal como todos os microrganismos, é usualmente considerada como um organismo unicelular. Contudo, os microrganismos formam mais frequentemente comunidades multicelulares macroscópicas que apresentam diferenciação celular, e são coordenadas por um complexo sistema de comunicação, e suportadas por uma matriz extracelular (MEC). A presença deste tipo de suporte das comunidades multicelulares de S. cerevisiae foi descrita no início deste século. Apesar disso, a informação relacionada com a sua composição e organização tridimensional é escassa. Assim, o principal objetivo deste trabalho foi realizar a primeira abordagem sistemática aos principais componentes da MEC de levedura. Para o efeito, foram desenvolvidas metodologias para (1) obter de forma reprodutível uma considerável e homogénea biomassa de leveduras produtora de MEC, e (2) extrair e fracionar a MEC produzida de forma a obter frações analiticamente puras de proteínas e polissacáridos, compatíveis com a aplicação de metodologias analíticas de alto-débito como o GC-MS e o DIGE. A análise detalhada da fração proteica permitiu a identificação de mais de 600 proteínas. A maioria destas tem função e localização intracelulares, e é aqui identificada extracelularmente pela primeira vez, o que pode indicar um moonlighting surpreendentemente elevado. A presença de todas as enzimas associadas à glicólise e à fermentação, assim como ao ciclo do glioxilato, levanta suspeitas sobre a possibilidade de haver metabolismo extracelular. Além disso, um grande número de proteínas associadas à síntese, remodelação e degradação de outras proteínas foi identificado, incluindo elementos da família HSP70 e várias proteases. De realçar a presença das exopeptidases Lap4, Dug1 e Ecm14, e das metaloproteinases Prd1, Ape2 e Zps1, que partilham um domínio funcional zincin com as metaloproteinases da MEC de Eucariotas superiores. A presença adicional de proteínas intervenientes em várias vias de sinalização, como as Bmh1 e Bmh2, e da homing endonuclease Vde, que partilha o domínio Hedgehog/inteína com os morfogenos de Eucariotas superiores, sugere que a MEC de levedura poderá, tal como nesses organismos, mediar sinalização intercelular. As análises cromatográfica e eletroforética da fração glicosídica revelaram claramente a presença de dois polissacáridos. A análise por espectrometria de massa identificou glucose, manose e galactose na composição destes polissacáridos. Foram ainda observados indícios da presença de ácido urónico. A indução de metacromasia sugeriu que os polissacáridos detetados apresentam substituição química. A possibilidade desta corresponder a sulfatação foi testada através de um teste de atividade anticoagulante. Das diversas amostras de MEC de diferentes estirpes de levedura usadas, o duplo mutante gup1Δgup2Δ apresentou, ao contrário da estirpe Wt, razoável atividade anticoagulante indicadora da presença de grupos sulfato. Os efeitos da deleção do gene GUP1 na composição da MEC de levedura proporcionaram uma perspectiva mais detalhada da composição molecular e mecanismos a ela associados. Observaram-se alterações nas frações protéica e glicosídica. A deleção resultou na ausência de várias proteínas, associadas principalmente com o metabolismo de fontes de carbono, defesa e resgate da célula, bem como síntese, modificação e degradação de proteínas, e organização celular. Adicionalmente, a deleção deste gene também teve um grande impacto na composição glicosídica da matriz, levando ao desaparecimento do polissacárido de maior peso molecular detetado na estirpe Wt. Globalmente, os efeitos da deleção do GUP1 na MEC mostram que a estrutura desta é muito dinâmica e que se encontra sob controlo apertado das células que compõem o agregado multicelular. As funções sugeridas para as proteínas ortólogas das Gup1 e Gup2 de levedura, respetivamente Hhatl e Hhat, nas vias de sinalização de Eucariotas superiores esteve na origem da construção de uma bateria de estirpes de levedura recombinantes transformadas com os ortólogos da via Hedgehog de ratinho, mosca e homem, para futura avaliação. Da mesma forma, foram clonados em S. cerevisiae os recetores de mamífero para o ácido hialurónico (AH), CD44 e HMMR. Estes transformantes foram submetidos ao crescimento na presença de AH de diferentes tamanhos moleculares. As estirpes exprimindo ambos os recetores foram igualmente sensíveis à presença de AH de elevado peso molecular, mas foram diferentemente sensíveis à presença de AH de tamanho molecular intermédio. As células expressando o recetor CD44 mostraram-se, tal como em Eucariotas superiores, sensíveis à presença de AH 50 kDa, apresentando uma forte redução da taxa específica de crescimento. Isto indica a expressão funcional dos recetores de AH em levedura e a provável conservação da maquinaria celular de resposta a este componente da MEC dos Eucariotas superiores. Este trabalho é o primeiro a apresentar um estudo detalhado sobre as frações protéica e glicosídica secretadas para a matriz extracelular de S. cerevisiae durante o seu crescimento em comunidades multicelulares, oferecendo a primeira abordagem proteómica e glicómica da sua composição e organização. Globalmente, este trabalho permite prever que a MEC de levedura exerça funções equivalentes às conhecidas da MEC de Eucariotas superiores.The yeast Saccharomyces cerevisiae, as all microbes, is generally regarded as a unicellular organism. However, microorganisms live more frequently in macroscopic multicellular aggregates, presenting cellular differentiation, coordinated by complex communication, and supported by an extracellular matrix (ECM). The presence of this type of structure supporting multicellular life-style of S. cerevisiae was first described early this century. However, the information available on the yeast ECM components and three-dimensional spatial organization is scarce. Hence, this work aimed to provide a first methodical insight into the molecular composition of the yeast ECM major components. A methodology was developed capable of reproducibly obtaining ECMproducing homogenous yeast mats, and extracting and fractionating the yeast ECM into analytical-grade fractions. This was developed in order to be fully compatible with the application of high-throughput analytical techniques, like GC-MS and DIGE. The in-depth analysis of the proteins in the yeast ECM identified more than 600 proteins, most of which being ascribed to intracellular functions and localization, and therefore found extracellularly for the first time. This might indicate unexpectedly extensive moonlighting. The entire sets of enzymes from glycolysis and fermentation, as well as gluconeogenesis through glyoxylate cycle were highly represented, raising considerable reason for doubt as whether extracellular metabolism might exist. Moreover, a large number of proteins associated with protein fate and remodelling were found. These included several proteins from the HSP70 family, and proteases, importantly, the exopeptidases Lap4, Dug1 and Ecm14, and the metalloproteinases Prd1, Ape2 and Zps1, sharing a functional zincin domain with higher Eukaryotes ECM metalloproteinases. The further presence of the broad signalling cross-talkers Bmh1 and Bmh2, as well as the homing endonuclease Vde that shares a Hedgehog/intein domain with the Hh morphogens from higher Eukaryotes, suggest that analogously to the tissues in these organisms, yeast ECM is mediating signalling events. The chromatographic and electrophoretic analysis of the sugar fraction revealed the clear presence of two distinct polysaccharides. Mass spectrometry identified glucose, mannose and galactose in their composition. Evidence was also obtained of the presence of uronic acids. Both polysaccharides showed chemical substitution, as indicated by metachromasia, and the existence of sulphate groups was assessed through an anticoagulant activity test. From several ECM samples from different yeasts strains surveyed, the double mutant gup1Δgup2Δ displayed a relatively high anticoagulant activity, which was not observed in Wt, likely related to the presence of sulphate groups. The effects of the deletion of GUP1 gene in the composition of yeast ECM were also assessed, providing a more in-depth perspective of the ECM components and molecular mechanisms associated. Alterations in both protein and sugar fractions were observed. The deletion of GUP1 led to the absence of several ECM proteins, mainly associated with the carbon metabolism, cell rescue and defence, protein fate and cellular organization. Additionally, the disruption of this gene impacted in the composition of the ECM sugar fraction, through the disappearance of the higher molecular weight polysaccharide that had been detected in the Wt sample. The effects of GUP1 deletion on the ECM show that its structure is very dynamic, and that it is under the tight control of the cells composing the aggregate. S. cerevisiae Gup1 and Gup2 orthologues have suggested regulatory roles in the Hedgehog signalling pathway from higher Eukaryotes, in which organisms these proteins are known as Hhatl and Hhat, respectively. This led to the engineering the yeast mutants defective on either or both GUP1 and GUP2 by expressing these genes orthologues from fly, human and mouse, yielding a collection of transformants for future assessment. Similarly, the mammalian receptors of hyaluronic acid (HA), CD44 and HMMR, were cloned into the yeast S. cerevisiae. The engineered strains were subjected to growth in the presence of different molecular sizes of HA, and were identically and differentially sensitive to, respectively, high and intermediate molecular weight HA. The strain expressing CD44 presented a high growth sensitivity to the presence of 50 kDa HA as in high Eukaryotes. The HA receptors are therefore functional in the yeast cell, and the cellular machinery to respond to HA stimuli appears to be fairly conserved. The present work is the first to present a comprehensive detailed study on the protein and polysaccharide fractions secreted during growth in S. cerevisiae multicellular aggregates. Overall, this work gives a first insight of the multicellular communities of S. cerevisiae proteomics and glycomics, ascertaining yeast ECM with putative roles derived from its components that resemble ECM from higher Eukaryotes
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