Розробка та валідація ВЕРХ/УФ-методики визначення секнідазолу

Secnidazole is one of antiprotozoal medicines from the group of 5-nitroimidazoles, the method of HPLC with different types of detection is widely used for secnidazole determination.Aim. To develop the HPLC/UV-procedure of secnidazole quantification with application of the system of a “MiLiChrome® A-02” HPLC-analyzer and carry out the step-by-step validation of the procedure developed. Results and discussion. The specificity of the chromatographic conditions proposed was confirmed in relation to other medicines of the group of 5-nitroimidazoles (metronidazole, tinidazole, ornidazole and nimorazole). The retention time for secnidazole was 8.16 min. 0.01 M solution of hydrochloric acid was proposed for preparation of the reference and model solutions in developing the HPLC/UV-procedure of secnidazole quantification. To prove the possibility of application of the procedure proposed in further analysis its validation was carried out in the variants of the method of the calibration curve and the method of standard. Such validation parameters as in-process stability, linearity/calibration model, accuracy and precision (repeatability) were estimated using model solutions.      Experimental part. The HPLC/UV analyses were performed using a MiLiChrome® A-02 high pressure liquid chromatograph (EcoNova, Russia). Eluent A (0.2 M LiClO4 – 0.005 M HClO4) and Eluent B (acetonitrile) were used as the mobile phase components. The HPLC microcolumn with the size of Ø2 × 75 mm and the ProntoSIL 120-5-C18 AQ reversed phase, 5 μm (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Germany) was used as an analytical column. The analysis was performed at 40 °С and the flow rate of 100 μl/min. The mobile phase was run in the gradient elution mode, namely from 5 % to 100 % of Eluent B for 40 min, then 100 % of Eluent B for 3 min. Detection was performed at 277 nm.                                                                      Conclusions. A new procedure of the secnidazole quantitative determination by the method of HPLC/UV has been developed. Its validation has been carried out, and acceptability for its application has been shown.Секнидазол является одним из антипротозойных препаратов из группы 5-нитроимидазолов, для определения которого широко используется метод ВЭЖХ с различными типами детекции.Цель. Разработать ВЭЖХ/УФ-методику количественного определения секнидазола с использованием системы ВЭЖХ-анализатора «MiLiChrome® A-02» и провести поэтапную валидацию разработанной методики.        Результаты и их обсуждение. Специфичность предлагаемых хроматографических условий подтверждена в отношении других препаратов из группы 5-нитроимидазолов (метронидазола, тинидазола, орнидазола и ниморазола). Время удерживания для секнидазола составляет 8,16 мин; 0,01 М раствор хлористоводородной кислоты был предложен для приготовления раствора сравнения и модельных растворов при разработке ВЭЖХ/УФ-методики количественного определения секнидазола. Для доказательства возможности применения предлагаемой методики в дальнейшем анализе валидация была проведена в вариантах метода калибровочного графика и метода стандарта. Такие валидационные параметры, как стабильность, линейность/калибровочная модель, правильность и прецизионность были оценены с помощью модельных растворов.                              Экспериментальная часть. ВЭЖХ/УФ-анализ проводили с использованием жидкостного хроматографа высокого давления MiLiChrome® A-02 (EcoNova, Россия). В качестве компонентов подвижной фазы использовали элюент А (0,2 М LiClO4 – 0,005 М HClO4) и элюент В (ацетонитрил). В качестве аналитической колонки использовали ВЭЖХ-микроколонку размером Ø2 × 75 мм с обращенной фазой ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 5 мкм (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Германия). Анализ проводили при 40 °С и скорости потока 100 мкл/мин. Мобильная фаза подавалась в режиме градиентного элюирования – от 5 % до 100 % элюента В в течение 40 мин, затем 100 % элюента В в течение 3 мин. Детектирование проводили при 277 нм.                                                                                                  Выводы. Разработана новая методика количественного определения секнидазола методом ВЭЖХ/УФ. Проведена ее валидация и показана приемлемость для применения.Секнідазол є одним з антипротозойних препаратів з групи 5-нітроімідазолів, для визначення якого широко використовується метод ВЕРХ з різними типами детекції.Мета. Розробити ВЕРХ/УФ-методику кількісного визначення секнідазолу з використанням системи ВЕРХ-аналізатора «MiLiChrome® A-02» і провести поетапну валідацію розробленої методики.Результати та їх обговорення. Специфічність запропонованих хроматографічних умов підтверджено відносно інших препаратів з групи 5-нітроімідазолів (метронідазолу, тінідазолу, орнідазолу і німоразолу). Час утримування для секнідазолу становить 8,16 хв; 0,01 М розчин хлористоводневої кислоти було запропоновано для приготування розчину порівняння і модельних розчинів при розробці ВЕРХ/УФ-методики кількісного визначення секнідазолу. Для доказу можливості застосування пропонованої методики в подальшому аналізі була проведена її валідація у варіантах методу калібрувального графіка і методу стандарту. Такі валідаційні параметри, як стабільність, лінійність/калібрувальна модель, правильність і прецизійність були оцінені за допомогою модельних розчинів.Експериментальна частина. ВЕРХ/УФ-аналіз проводили з використанням рідинного хроматографа високого тиску MiLiChrome® A-02 (EcoNova, Росія). Як компоненти рухомої фази використовували елюент А (0,2 М LiClO4 – 0,005 М HClO4) і елюент В (ацетонітрил). Як аналітичну колонку використовували ВЕРХ-мікроколонку розміром Ø2 × 75 мм з оберненою фазою ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 5 мкм (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Німеччина). Аналіз проводили при 40 °С і швидкості потоку 100 мкл/хв. Мобільна фаза подавалася в режимі градієнтного елюювання – від 5 % до 100 % елюенту В впродовж 40 хв, потім 100 % елюенту В впродовж 3 хв. Детектування проводили при 277 нм.Висновки. Розроблено нову методику кількісного визначення секнідазолу методом ВЕРХ/УФ. Проведена її валідація і показана прийнятність для застосування

Розробка та валідація ГРХ/ПІД- та ГРХ/МС-методик визначення секнідазолу методом добавок

Gas-liquid chromatography is widely used in the process of forensic toxicological examinations, but data about application of GLC with flame-ionization and mass-spectrometry detection for secnidazole determination in analytical toxicology are absent.Aim. To develop GLC/FID- and GLC/MS-procedures for the quantitative determination of secnidazole and carry out step-by-step validation of the procedures developed in the variant of the method of additions.Results and discussion. The chromatographic conditions has been chosen for secnidazole determination by the method of GLC in two variants of performance with flame-ionization and mass-spectrometry detection with the temperature program changing during the analysis from 70 °C to 250 °C or 320 °C. Retention times for secnidazole are 8.97 min and 11.74 min. To prove the possibility of application of the procedures proposed in further analysis their validation has been carried out in the variant of the method of additions. Such validation parameters as in-process stability, linearity, accuracy and precision have been estimated by model solutions.Experimental part. The GLC/FID-analysis: HP 6890 Hewlett Packard; НР-1 ø0.32 mm × 30 m, 0.25 μm; thermostat – 70 ºС (3 min), 40 ºС/min to 180 ºС (2 min), 40 ºС/min to 250 ºС (3 min); injector – 280 ºС; detector – 280 ºС; volume rate of a carrier gas (helium) – 1.5 ml/min; split mode – 1 : 2. The GLC/MS-analysis: Agilent 6890N/5973N/7683; НР-5MS ø0.25 mm × 30 m, 0.25 μm; DB-17MS ø0.25 mm × 30 m, 0.15 μm; columns are connected sequentially through Deans switch; thermostat – 70 ºС (2 min), 45 ºС/min. to 210 ºС, 6 ºС/min to 320 ºС (12.56 min); transfer line – 280 ºС; ion source – 230 ºС; quadrupole – 150 ºС; electron impact – 70eV; 40-750 m/z; injector – 250 ºС; splitless mode; inlet carrier gas (helium) pressure: 1st column – 26.06 psi, 2nd column – 19.30 psi.Conclusions. New procedures for the quantitative determination of secnidazole by the method of GLC/FID and GLC/MS have been developed. Their validation has been carried out, and acceptability for application has been shown.Газо-жидкостная хроматография широко используется в судебно-токсикологических исследованиях, но данные о её применении с пламенно-ионизационной и масс-спектрометрической детекцией для определения секнидазола в аналитической токсикологии отсутствуют.Цель. Разработать ГЖХ/ПИД- и ГЖХ/МС-методики количественного определения секнидазола и провести поэтапную валидацию разработанных методик в варианте метода добавок.Результаты. Хроматографические условия были подобраны для определения сенидазола методом ГЖХ в двух вариантах исполнения с использованием пламенно-ионизационной и масс-спектрометрической детекции с программируемым изменением температуры при анализе от 70 °С до 250 °С или 320 °С. Время удерживания для секнидазола составляет 8,97 мин и 11,74 мин. Для доказательства возможности применения предлагаемых методик в дальнейшем анализе была проведена их валидация в варианте метода добавок. Такие валидационные параметры, как стабильность, линейность, правильность и прецизионность были оценены с помощью модельных растворов.Экспериментальная часть. ГЖХ/ПИД-анализ: HP 6890 Hewlett Packard; НР-1 ø0,32 мм × 30 м, 0,25 мкм; термостат – 70 ºС (3 мин), 40 ºС/мин до 180 ºС (2 мин), 40 ºС/мин до 250 ºС (3 мин); инжектор – 280 ºС; детектор – 280 ºС; объемная скорость газа-носителя (гелия) – 1,5 мл/мин; разделение потока – 1 : 2. ГЖХ/МС-анализ: Agilent 6890N/5973N/7683; НР-5МС ø0,25 мм × 30 м, 0,25 мкм; DB-17MS ø0,25 мм × 30 м, 0,15 мкм; колонки подключены последовательно через переключатель Дина; термостат – 70 ºС (2 мин), 45 ºС/мин до 210 ºС, 6 ºС/мин до 320 ºС (12,56 мин); интерфейс масс-спектрометра – 280 ºС; источник ионов – 230 ºС; квадруполь – 150 ºС; электронный удар – 70 эВ; 40-750 m/z; инжектор – 250 ºС; без разделения потока; давление газа-носителя (гелия) на входе: 1-я колонка – 26,06 psi, 2-я колонка – 19,30 psi.Выводы. Разработаны новые методики количественного определения секнидазола методами ГЖХ/ПИД и ГЖХ/МС. Проведена их валидация и показана приемлемость для применения.Газо-рідинна хроматографія широко використовується в судово-токсикологічних дослідженнях, але дані про застосування ГРХ з полум’яно-іонізаційним і мас-спектрометричним детектуванням для визначення секнідазолу в аналітичній токсикології відсутні.Мета. Розробити ГРХ/ПІД- і ГРХ/МС-методики кількісного визначення секнідазолу та провести поетапну валідацію розроблених методик у варіанті методу добавок.Результати та їх обговорення. Хроматографічні умови були підібрані для визначення секнідазолу методом ГРХ у двох варіантах виконання з використанням полум’яно-іонізаційного і мас-спектрометричного детектування з програмованою зміною температури при аналізі від 70 °С до 250 °С або 320 °С. Час утримування для секнідазолу становить 8,97 хв і 11,74 хв. Для доказу можливості застосування пропонованих методик у подальшому аналізі було проведено їх валідацію у варіанті методу добавок. Такі валідаційні параметри, як стабільність, лінійність, правильність і прецизійність були оцінені за допомогою модельних розчинів.Експериментальна частина. ГРХ/ПІД-аналіз: HP 6890 Hewlett Packard; НР-1 ø0,32 мм × 30 м, 0,25 мкм; термостат – 70 ºС (3 хв), 40 ºС/хв до 180 ºС (2 хв), 40ºС/хв до 250 ºС (3 хв); інжектор – 280 ºС; детектор – 280 ºС; об’ємна швидкість газу-носія (гелію) – 1,5 мл/хв; розділення потоку – 1 : 2. ГРХ/МС-аналіз: Agilent 6890N/5973N/7683; НР-5МС ø0,25 мм ×30 м, 0,25 мкм; DB-17MS ø0,25 мм ×30 м, 0,15 мкм; колонки підключені послідовно через перемикач Діна; термостат – 70 ºС (2 хв), 45 ºС/хв до 210 ºС, 6 ºС/хв до 320 ºС (12,56 хв); інтерфейс мас-спектрометра – 280 ºС; джерело іонів – 230 ºС; квадруполь – 150 ºС; електронний удар – 70 еВ; 40-750 m/z; інжектор – 250 ºС; без розділення потоку; тиск газу-носія (гелію) на вході: 1-а колонка – 26,06 psi, 2-а колонка – 19,30 psi.Висновки. Розроблені нові методики кількісного визначення секнідазолу методами ГРХ/ПІД і ГРХ/МС. Проведено їх валідацію і показано прийнятність для застосування

Визначення констант іонізації секнідазолу у водних розчинах і сумішах води з ізопропанолом, ацетонітрилом та етанолом

Seknidazole is a drug from the 5-nitroimidazole group with a number of side-effects. This drug is virtually unexplored from the point of view of chemico-toxicological analysis (CTA). Therefore, the development of a set of methods for the detection and quantification of secnidazole in biological fluids for use in CTA is an urgent task. Aim. To study the acid-base equilibrium of secnidazole in aqueous solutions and mixtures of water with amphiphilic solvents and determine the corresponding ionization constants. Materials and methods. Spectrophotometric measurements were performed using a SPEKOL®1500 single-beam spectrophotometer. An EV-74 ionomer was used to control the pH of the solutions. Seknidazole solutions in the concentrationof 1000 μg/ml were used in the experiment. Results and discussion.  Absorption spectra of secnidazole in water and mixtures of water and amphiphilic solvents in the pH range studied showed four isobestic points characterizing two protolytic equilibria (equilibrium 1 – 240 and 295 nm, equilibrium 2 – 261 and 297 nm). The position of the isobestic points of equilibrium 2 fluctuated in the range ± 3 nm; it was due to the presence of tautomeric transformations for the molecular form of secnidazole. Conclusions. The acid-base equilibria of secnidazole in aqueous solutions and mixtures of water with amphiphilic solvents have been studied. It has been shown that in a strongly alkaline medium there is an anionic form of secnidazole R–, with further decrease in the pH value the molecular form HR appears, in a strongly acidic medium the final product – a protonated form H2R+ – is formed. The ionization constant 1 has been determined for aqueous solutions of secnidazole, mixtures of water with isopropanol, acetonitrile and ethanol. It is impossible to determine the equilibrium constant 2 by the method specified.Секнидазол – лекарственный препарат из группы 5-нитроимидазолов, обладающий целым рядом побочных эффектов. Указанное лекарственное средство является практически не исследованным с точки зрения химико-токсикологического анализа (ХТА). Поэтому разработка комплекса методик выявления и количественного определения секнидазола в биологических жидкостях для применения в ХТА является актуальной задачей. Цель работы – исследование кислотно-основного равновесия секнидазола в водных растворах и смесях воды с амфифильными растворителями и определение соответствующих констант ионизации. Материалы и методы. Спектрофотометрические измерения проводили с использованием однолучевого спектрофотометра SPEKOL®1500. Для контроля рН растворов использовали иономер ЭВ-74. В эксперименте использовали растворы секнидазола в концентрации 1000 мкг/мл. Результаты и их обсуждение. На спектрах поглощения секнидазола в воде и смесях воды и амфифильных растворителей в изученном интервале кислотности наблюдались четыре изобестические точки, характеризующие два протолитических равновесия (равновесие 1 – 240 и 295 нм, равновесие 2 – 261 и 297 нм). Положение изобестических точек равновесия 2 колебалось в диапазоне ± 3 нм, что связано с наличием таутомерных превращений для молекулярной формы секнидазола. Выводы. Результаты исследования кислотно-основных равновесий секнидазола в водных растворах и смесях воды с амфифильными растворителями показали, что в сильно щелочной среде существует анионная фор-ма секнидазола R–, при дальнейшем уменьшении значения рН появляется молекулярная форма HR, в сильно кислой среде образовывается конечный продукт – протонированная форма H2R+. Определена константа ионизации 1 для водных растворов секнидазола, смесей воды с изопропанолом, ацетонитрилом и этанолом.Определить константу равновесия 2 указанным методом было невозможно.Секнідазол – лікарський препарат з групи 5-нітроімідазолів, що має цілу низку побічних ефектів. Зазначений лікарський засіб є майже не дослідженою речовиною з погляду хіміко-токсикологічного аналізу (ХТА). Тому розробка комплексу методик виявлення та кількісного визначення секнідазолу в біологічних рідинах длязастосування в ХТА є актуальним завданням. Метою роботи є дослідження кислотно-основної рівноваги секнідазолу у водних розчинах та сумішах води з амфіфільними розчинниками і визначення відповідних констант іонізації. Матеріали та методи. Спектрофотометричні вимірювання проводили з використанням однопроменевого спектрофотометра SPEKOL®1500. Для контролю рН розчинів використовували іономер ЕВ-74. В експерименті використовували розчини секнідазолу в концентрації 1000 мкг/мл. Результати та їх обговорення. На спектрах поглинання секнідазолу у воді та сумішах води і амфіфільних розчинників у вивченому інтервалі кислотності спостерігали чотири ізобестичні точки, що характеризують дві протолітичні рівноваги (рівновага 1 – 240 і 295 нм, рівновага 2 – 261 і 297 нм). Положення ізобестичних точокрівноваги 2 коливалось у діапазоні ± 3 нм, що пов’язано з наявністю таутомерних перетворень для молекулярної форми секнідазолу. Висновки. Результати дослідження кислотно-основної рівноваги секнідазолу у водних розчинах та сумішах води з амфіфільними розчинниками засвідчили, що у сильно лужному середовищі існує аніонна форма секнідазолу R–, зі зменшенням значення рН з’являється молекулярна форма HR, у сильно кислому середовищі утворюється кінцевий продукт перетворень – протонована форма H2R+. Визначено константу іонізації 1 для водних розчинів секнідазолу, сумішей води з ізопропанолом, ацетонітрилом та етанолом. Визначити константу рівноваги 2 зазначеним методом було неможливо

Валідація алкаліметричної методики кількісного визначення вільних органічних кислот у листі малини

 Organic acids are a large group of biologically active compounds that perform important functions in the plant organism. Moreover, all plants, regardless of the species and family, contain organic acids to a small or large extent as organic acids belong to intermediate metabolites arising from the oxidation of proteins and amino acids, fats and carbohydrates.Aim. To validate the method of alkalimetry proposed with potentiometric detection of the end-point for the quantitative determination of free organic acids in raspberry leaves.Results and discussion. The method proposed was validated according to the International Conference on Harmonization (ICH) guidelines. The linearity was in the concentration range of 40 – 200 % (r2 = 0.9991). The percentage of recovery was found to be in the range of 98.77 – 102.48 %. The repeatability and intermediate precision were 1.58 % and 1.74 %, respectively. The method is accurate and reliable, with the relative standard deviation of less than 2 %.Experimental part. Leaves of raspberry were collected in the Kharkiv region during the period of full ripening. A Hanna 2550 pH-meter with a HI 1131P potentiometric electrode was used for alkalimetric titration of free organic acids. The titration was carried out using a microburette with Class A accuracy.Conclusions. The alkalimetry method for the quantitative determination of free organic acids in raspberry leaves has been proposed and validated according to the following parameters: specifcity, linearity, accuracy, repeatability, intermediate precision, robustness. It has been confrmed that the method is simple, reliable, accurate and cost-effective.Key words: raspberry; leaves; free organic acids; alkalimetry; validationОрганічні кислоти – велика група біологічно активних сполук, які виконують важливі функції в обміні речовин рослин. Усі рослини, незалежно від виду та родини, містять органічні кислоти в невеликій або значній кількості, бо ці речовини належать до проміжних метаболітів, що утворюються в результаті окиснення білків, амінокислот, жирів та вуглеводів.Мета. Валідувати запропоновану алкаліметричну методику з потенціометричним виявленням кінцевої точки титрування для кількісного визначення вільних органічних кислот у листі малини.Результати та їх обговорення. Запропонований метод валідовано згідно з директивою International Conference on Harmonization. Лінійність зберігалася в діапазоні концентрацій 40 – 200 % (r2= 0,9991). Визначено, що відсоток відновлення становить 98,77 – 102,48 %, повторюваність та проміжна точність – 1,58 % та 1,74 % відповідно. Метод характеризується як точний і надійний, має відносне стандартне відхилення менше 2 %.Експериментальна частина. Листя малини в період повного дозрівання збирали в Харківській області. Для алкаліметричного титрування вільних органічних кислот використовували рН-метр Hanna 2550 з потенціометричним електродом HI 1131P. Титрування проводили мікробюреткою з класом точності А.Висновки. Розроблену титриметричну методику кількісного визначення вільних органічних кислоту листі малини валідовано за такими параметрами: специфічність, лінійність, точність, збіжність, внутрішня прецизійність, робасність. Підтверджено, що метод є простим, надійним, точним та економічно вигідним.Ключові слова: малина; листя; вільні органічні кислоти; алкаліметрія; валідаці

Актуальність викладання аналітичної токсикології в Національному фармацевтичному університеті: uk.

Aim. To analyze the methods of teaching analytical toxicology in the National University of Pharmacy (NUPh). Materials and methods. Analytical, systematic, logical methods of teaching the discipline, as well as scientific publications of domestic and foreign scientists were used. Results. The topicality of teaching the discipline “Analytical toxicology” at the Department of Analytical Chemistry and Analytical Toxicology of the NUPh (Kharkiv) has been discussed in the article. The features of teaching the discipline in current conditions have been analyzed. The possibility of conducting the chemico-toxicological analysis, which results are necessary for solving many legal and other important issues, has been described. The main tasks facing analytical toxicology, its difference from analytical chemistry and other pharmaceutical disciplines, as well as the significance of the knowledge gained by applicants for higher education that they need in their further practical activities have been considered. The structure of the educational process when studying the discipline “Analytical toxicology”, including theoretical and practical sections, is presented. Modern chemical and physicochemical methods of analysis widely used in analytical toxicology have been described. Conclusions. To train applicants for higher education in the specialty 226 “Pharmacy, Industrial pharmacy”, the study of the discipline “Analytical toxicology”, which is closely related to chemical, biological and medical disciplines, is important. The knowledge gained by applicants for higher education makes it possible to correctly understand the fundamentals of analytical toxicology, apply the theoretical and practical skills obtained in their further practical activities and become fully qualified specialists in the field of chemico-toxicological analysis. Key words: analytical toxicology; analytical chemistry; chemico-toxicological analysis; intoxication; toxicant.Цель работы: освещение актуальности преподавания аналитической токсикологии в Национальном фармацевтическом университете. Материалы и методы: аналитический, систематический, логический методы преподавания дисциплины, а также научные публикации отечественных и зарубежных авторов. Результаты исследований. В статье рассмотрена актуальность преподавания дисциплины «Аналитическая токсикология»на кафедре аналитической химии и аналитической токсикологии НФаУ (г. Харьков). Проанализированы особенности преподавания дисциплины в современных условиях сегодняшнего дня, рассмотрена возможность проведения химико-токсикологического анализа, результаты которого необходимы при решении многих правовых и других важных вопросов. Рассмотрены основные задания, которые стоят перед аналитической токсикологией, что отличает ее от аналитической химии и других фармацевтических дисциплин, а также значение полученных знаний соискателями высшего образования, необходимые им в дальнейшей практической деятельности. В статье приведена структура учебного процесса при изучении дисциплины «Аналитическая токсикология», которая включает теоретический и практический разделы. Описаны современные химические и физико-химические методы анализа, которые широко применяются в аналитической токсикологии. Выводы. Для подготовки соискателей высшего образования специальности 226 «Фармация, промышленная фармация» важное место занимает изучение дисциплины «Аналитическая токсикология», которая тесно связана с химическими, биологическими и медицинскими дисциплинами. Полученные соискателями высшего образования знания дают возможность правильно понять особенности изучения аналитической токсикологии и в будущем применить полученные теоретические и практические навыки в своей дальнейшей практической деятельности, стать всесторонне грамотными специалистами в области химико-токсикологического анализа. Ключевые слова: аналитическая токсикология; методика преподавания; химико-токсикологический анализ; интоксикация; токсикант.Мета: висвітлення актуальності викладання аналітичної токсикології в Національному фармацевтичному університеті. Матеріали та методи: аналітичний, систематичний, логічний методи викладання дисципліни, а також наукові публікації вітчизняних та іноземних авторів. Результати дослідження. У статті розглянута актуальність викладання дисципліни «Аналітична токсикологія» на кафедрі аналітичної хімії та аналітичної токсикології НФаУ (м. Харків). Проаналізовані особливості викладання дисципліни в сучасних умовах, розглянута важливість проведення хіміко-токсикологічного аналізу, результати якого необхідні для вирішення багатьох правових та інших важливих питань. Розглянуті основні завдання, які ставляться перед аналітичною токсикологією, що відрізняє її від аналітичної хімії та інших фармацевтичних дисциплін, а також значення отриманих знань здобувачами вищої освіти, необхідних їм у подальшій практичній діяльності. У статті наведена структура навчального процесу під час вивчення дисципліни «Аналітична токсикологія», яка включає теоретичний і практичний розділи. Описані сучасні хімічні та фізико-хімічні методи аналізу, які знаходять широке застосування в аналітичній токсикології. Висновки. У підготовці здобувачів вищої освіти спеціальності 226 «Фармація, промислова фармація» важливе місце посідає вивчення дисципліни «Аналітична токсикологія», яка має тісний зв’язок з хімічними, біологічними та медичними дисциплінами. Отримані здобувачами вищої освіти знання дають можливість правильно зрозуміти особливості аналітичної токсикології і в майбутньому використати отримані теоретичні та практичні навички у своїй подальшій практичній діяльності і стати всебічно грамотними фахівцями у сфері хіміко-токсикологічного аналізу. Ключові слова: аналітична токсикологія; методика викладання; хіміко-токсикологічний аналіз; інтоксикація; токсикант

Застосування тонкошарової хроматографії та кольорових реакцій в аналізі метронідазолу

Metronidazole belongs to the group of antiprotozoal medicines and is a potential object of research in various areas of analytical toxicology.Aim. To study the metronidazole behavior when developing with color reagents generally accepted and to determine Rf values of metronidazole under chromatographing conditions in the solvent systems generally accepted in forensic toxicology.Results and discussion. It has been shown that such widely used color reagents as UV-light, iodine vapor, Wagner reagent, acidified iodoplatinate solution can be used for detecting metronidazole on chromatographic plates. Metronidazole gives positive detection results with reagents used in the TLC-screening of extracts from the biological material for substances of basic, acid and neutral nature. It has been proposed to develop metronidazole with the neutral ninhydrin solution, p-dimethylaminobenzaldehyde solution and hydrochloric acid vapors, as well as acidified iodoplatinate solution after keeping the plates in formalin vapors. The chromatographic mobility of metronidazole has been studied in 17 solvents systems; the systems are used as standard mobile phases according to recommendations of the International Association of Forensic Toxicologists for TLC-screening of organic compounds of acid, neutral and basic nature, in the general TLC-screening of organic substances in the Ukrainian forensic toxicological laboratories, and some systems investigated with the purpose of choosing the optimal individual solvents systems for the metronidazole study.Experimental part. The chromatographic plates Sorbfil® PTLC-IIH-UV and Merck® TLC SILICA GEL 60 were used as thin layers. Conclusions. The behavior of metronidazole when developing on TLC-plates with two types of a substrate (plastic and glass) and with/without luminophor (or UV-indicator) with commonly used colored reagents has been studied. The Rf values of metronidazole under chromatographing conditions in the standard solvent systems used for TLC-screening of organic compounds of acid, neutral and basic nature have been determined.Метронидазол относится к группе антипротозойных лекарственных средств и является потенциальным объектом исследований в различных областях аналитической токсикологии.Цель. Исследование поведения метронидазола при проявлении общепринятыми цветными реагентами и установление значений Rf метронидазола в условиях хроматографирования в общепринятых в судебно-токсикологическом анализе системах растворителей.Результаты и их обсуждение. Показано, что для обнаружения метронидазола на хроматографических пластинах можно использовать такие широко применяемые проявители, как УФ-свет, пары йода, реактив Вагнера, подкисленный раствор йодоплатината. Метронидазол дает положительные результаты обнаружения с реактивами, использующимися в ходе ТСХ-скрининга извлечений из биологического материала на вещества основного, кислого и нейтрального характера. Предложено проявлять метронидазол нейтральным раствором нингидрина, раствором п-диметиламинобензальдегида и парами хлористоводородной кислоты, а также подкисленным раствором йодоплатината после выдерживания пластин в парах формалина. Хроматографическая подвижность метронидазола исследована в 17 системах растворителей, среди которых подвижные фазы, применяемые в качестве стандартных согласно рекомендациям Международного комитета по систематическому токсикологическому анализу Международной ассоциации судебных токсикологов для ТСХ-скрининга органических веществ кислого, нейтрального и основного характера, в общем ТСХ-скрининге органических веществ в отечественных судебно-токсикологических лабораториях, и отдельные подвижные фазы, исследованные с целью подбора оптимальных частных систем растворителей для исследования метронидазола.Экспериментальная часть. В качестве тонких слоев использовали пластины Sorbfil ПТСХ-ІІВ-УФ и Merck TLC Silica gel 60G.Выводы. Исследовано поведение метронидазола при проявлении общепринятыми хромогенными реагентами на пластинах для ТСХ с двумя типами подложки (пластик и стекло) и с УФ-индикатором и без него. Установлены значения Rf метронидазола в условиях хроматографирования в стандартных системах растворителей, используемых для ТСХ-скрининга веществ кислого, нейтрального и основного характера.Метронідазол належить до групи антипротозойних лікарських засобів і є потенційним об’єктом досліджень у різних галузях аналітичної токсикології.Мета. Дослідження поведінки метронідазолу при проявленні загальноприйнятими кольоровими реагентами та встановлення значень Rf метронідазолу за умов хроматографування в загальноприйнятих у судово-токсикологічному аналізі системах розчинників.Результати та їх обговорення. Показано, що для виявлення метронідазолу на хроматографічних пластинах можна використовувати такі широко вживані проявники, як УФ-світло, пари йоду, реактив Вагнера, підкислений розчин йодоплатинату. Метронідазол дає позитивні результати виявлення з реактивами, що використовуються в ході ТШХ-скринінгу витяжок із біологічного матеріалу на речовини лужного, кислого та нейтрального характеру. Запропоновано проявляти метронідазол нейтральним розчином нінгідрину, розчином п-диметиламінобензальдегіду та парами хлоридної кислоти, а також підкисленим розчином йодоплатинату після витримування пластин у парах формаліну. Хроматографічну рухомість метронідазолу досліджено в 17 системах розчинників, серед яких рухомі фази, що застосовуються як стандартні згідно з рекомендаціями Міжнародного комітету з систематичного токсикологічного аналізу Міжнародної асоціації судових токсикологів для ТШХ-скринінгу органічних речовин кислого, нейтрального та основного характеру, в загальному ТШХ-скринінгу органічних речовин у вітчизняних судово-токсикологічних лабораторіях, та окремі рухомі фази, досліджені з метою підбору оптимальних окремих систем розчинників для дослідження метронідазолу.Експериментальна частина. Як тонкі шари використовували пластини Sorbfil ПТСХ-ІІВ-УФ та Merck TLC Silica gel 60G. Висновки. Досліджено поведінку метронідазолу при проявленні загальноприйнятими хромогенними реагентами на пластинах для ТШХ з двома типами підложки (пластик та скло) та з УФ-індикатором і без нього. Встановлено значення Rf метронідазолу за умов хроматографування в стандартних системах розчинників, що використовуються для ТШХ-скринінгу речовин кислого, нейтрального та основного характеру

Розробка та валідація ВЕРХ/УФ-методики визначення секнідазолу

Secnidazole is one of antiprotozoal medicines from the group of 5-nitroimidazoles, the method of HPLC with different types of detection is widely used for secnidazole determination.Aim. To develop the HPLC/UV-procedure of secnidazole quantification with application of the system of a “MiLiChrome® A-02” HPLC-analyzer and carry out the step-by-step validation of the procedure developed. Results and discussion. The specificity of the chromatographic conditions proposed was confirmed in relation to other medicines of the group of 5-nitroimidazoles (metronidazole, tinidazole, ornidazole and nimorazole). The retention time for secnidazole was 8.16 min. 0.01 M solution of hydrochloric acid was proposed for preparation of the reference and model solutions in developing the HPLC/UV-procedure of secnidazole quantification. To prove the possibility of application of the procedure proposed in further analysis its validation was carried out in the variants of the method of the calibration curve and the method of standard. Such validation parameters as in-process stability, linearity/calibration model, accuracy and precision (repeatability) were estimated using model solutions.      Experimental part. The HPLC/UV analyses were performed using a MiLiChrome® A-02 high pressure liquid chromatograph (EcoNova, Russia). Eluent A (0.2 M LiClO4 – 0.005 M HClO4) and Eluent B (acetonitrile) were used as the mobile phase components. The HPLC microcolumn with the size of Ø2 × 75 mm and the ProntoSIL 120-5-C18 AQ reversed phase, 5 μm (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Germany) was used as an analytical column. The analysis was performed at 40 °С and the flow rate of 100 μl/min. The mobile phase was run in the gradient elution mode, namely from 5 % to 100 % of Eluent B for 40 min, then 100 % of Eluent B for 3 min. Detection was performed at 277 nm.                                                                      Conclusions. A new procedure of the secnidazole quantitative determination by the method of HPLC/UV has been developed. Its validation has been carried out, and acceptability for its application has been shown.Секнидазол является одним из антипротозойных препаратов из группы 5-нитроимидазолов, для определения которого широко используется метод ВЭЖХ с различными типами детекции.Цель. Разработать ВЭЖХ/УФ-методику количественного определения секнидазола с использованием системы ВЭЖХ-анализатора «MiLiChrome® A-02» и провести поэтапную валидацию разработанной методики.        Результаты и их обсуждение. Специфичность предлагаемых хроматографических условий подтверждена в отношении других препаратов из группы 5-нитроимидазолов (метронидазола, тинидазола, орнидазола и ниморазола). Время удерживания для секнидазола составляет 8,16 мин; 0,01 М раствор хлористоводородной кислоты был предложен для приготовления раствора сравнения и модельных растворов при разработке ВЭЖХ/УФ-методики количественного определения секнидазола. Для доказательства возможности применения предлагаемой методики в дальнейшем анализе валидация была проведена в вариантах метода калибровочного графика и метода стандарта. Такие валидационные параметры, как стабильность, линейность/калибровочная модель, правильность и прецизионность были оценены с помощью модельных растворов.                              Экспериментальная часть. ВЭЖХ/УФ-анализ проводили с использованием жидкостного хроматографа высокого давления MiLiChrome® A-02 (EcoNova, Россия). В качестве компонентов подвижной фазы использовали элюент А (0,2 М LiClO4 – 0,005 М HClO4) и элюент В (ацетонитрил). В качестве аналитической колонки использовали ВЭЖХ-микроколонку размером Ø2 × 75 мм с обращенной фазой ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 5 мкм (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Германия). Анализ проводили при 40 °С и скорости потока 100 мкл/мин. Мобильная фаза подавалась в режиме градиентного элюирования – от 5 % до 100 % элюента В в течение 40 мин, затем 100 % элюента В в течение 3 мин. Детектирование проводили при 277 нм.                                                                                                  Выводы. Разработана новая методика количественного определения секнидазола методом ВЭЖХ/УФ. Проведена ее валидация и показана приемлемость для применения.Секнідазол є одним з антипротозойних препаратів з групи 5-нітроімідазолів, для визначення якого широко використовується метод ВЕРХ з різними типами детекції.Мета. Розробити ВЕРХ/УФ-методику кількісного визначення секнідазолу з використанням системи ВЕРХ-аналізатора «MiLiChrome® A-02» і провести поетапну валідацію розробленої методики.Результати та їх обговорення. Специфічність запропонованих хроматографічних умов підтверджено відносно інших препаратів з групи 5-нітроімідазолів (метронідазолу, тінідазолу, орнідазолу і німоразолу). Час утримування для секнідазолу становить 8,16 хв; 0,01 М розчин хлористоводневої кислоти було запропоновано для приготування розчину порівняння і модельних розчинів при розробці ВЕРХ/УФ-методики кількісного визначення секнідазолу. Для доказу можливості застосування пропонованої методики в подальшому аналізі була проведена її валідація у варіантах методу калібрувального графіка і методу стандарту. Такі валідаційні параметри, як стабільність, лінійність/калібрувальна модель, правильність і прецизійність були оцінені за допомогою модельних розчинів.Експериментальна частина. ВЕРХ/УФ-аналіз проводили з використанням рідинного хроматографа високого тиску MiLiChrome® A-02 (EcoNova, Росія). Як компоненти рухомої фази використовували елюент А (0,2 М LiClO4 – 0,005 М HClO4) і елюент В (ацетонітрил). Як аналітичну колонку використовували ВЕРХ-мікроколонку розміром Ø2 × 75 мм з оберненою фазою ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 5 мкм (BISCHOFF Analysentechnik und -geräte GmbH, Німеччина). Аналіз проводили при 40 °С і швидкості потоку 100 мкл/хв. Мобільна фаза подавалася в режимі градієнтного елюювання – від 5 % до 100 % елюенту В впродовж 40 хв, потім 100 % елюенту В впродовж 3 хв. Детектування проводили при 277 нм.Висновки. Розроблено нову методику кількісного визначення секнідазолу методом ВЕРХ/УФ. Проведена її валідація і показана прийнятність для застосування

Розробка і валідація ВЕРХ/УФ-методик кількісного визначення метронідазолу в крові та сечі

Metronidazole belongs to the group of antiprotozoal medicines and widely used for the treatment of infectious diseases; the medicine has a number of side effects manifested by usual symptoms of acute intoxication, especially when interacting with other drugs and alcohol.Aim. To apply the system of MiLiChrome® A-02 HPLC-analyzer widely used in the Ukrainian laboratories of forensic toxicology for the metronidazole quantitative determination in biological fluids and carry out validation of the procedures developed.Materials and methods. The sample preparation of blood and urine was carried out by extraction with acetonitrile and 2-propanol followed by separation of the organic layer under the conditions of the aqueous phase saturation with ammonium sulfate. Previously blood and urine were treated with acids. Isolation was carried out in the strong acid, neutral and weak alkaline medium.Results and discussion. To find the optimal conditions of the sample preparation such validation parameters as specificity/selectivity and recovery were determined. The results of the blank samples analysis were acceptable for all variants of the sample preparation procedures. Recovery values were reproducible for all procedures of analysis studied, but efficacy of metronidazole isolation was variable – from 85% to 97 %. The results of verification of metronidazole stability showed the necessity to carry out all measurements within 12 hours after obtaining the solutions to be analyzed. The results of determination of linearity, accuracy and precision were the evidenceof acceptable systematic and random errors of the HPLC/UV-procedures studied in the variant of the method of calibration curve, method of standard and method of additions.Conclusions. The set of HPLC/UV-procedures for the metronidazole quantitative determination in blood and urine has been developed. Validation of the procedures developed has been carried out.Метронидазол относится к группе антипротозойных препаратов и широко применяется для лечения инфекционных заболеваний; препарат имеет ряд побочных эффектов, проявляющихся обычными симптомами острой интоксикации, особенно при взаимодействии с другими препаратами и алкоголем.Цель. Применить систему ВЭЖХ-анализатора MiLiChrome® A-02, широко используемую в украинских судебно-токсикологических лабораториях, для количественного определения метронидазола в биологических жидкостях и провести валидацию разработанных методик.Материалы и методы. Пробоподготовку крови и мочи проводили путем экстракции ацетонитрилом и изопропанолом с последующим отделением органического слоя в условиях насыщения водной фазы аммония сульфатом. Предварительно кровь и мочу обрабатывали кислотами. Изолирование проводили в сильнокислой, нейтральной и слабощелочной среде.Результаты и их обсуждение. Для подбора оптимальных условий пробоподготовки были определены такие валидационные параметры, как специфичность/селективность и степень извлечения. Результаты анализа blank-проб приемлемы для всех вариантов процедур пробоподготовки. Значения степени извлечения воспроизводимы для всех изученных процедур анализа, но эффективность выделения метронидазола различна – от 85 % до 97 %. Результаты проверки стабильности метронидазола показали необходимость проведения всех измерений в течение 12 часов после получения анализируемых растворов. Результаты определения линейности, правильности и прецизионности свидетельствуют о допустимости систематических и случайных ошибок изученных ВЭЖХ/УФ-методик в варианте метода калибровочного графика, метода стандарта и метода добавок.Выводы. Разработан комплекс ВЭЖХ-методик для количественного определения метронидазола в крови и моче. Проведена валидация разработанных методик.Метронідазол належить до групи антипротозойних засобів і широко застосовується для лікування інфекційних захворювань; препарат має ряд побічних ефектів, що виявляються звичайними симптомами гострої інтоксикації, особливо при взаємодії з іншими препаратами і алкоголем.Мета. Застосувати систему ВЕРХ-аналізатора MiLiChrome® A-02, що широко використовується в українських судово-токсикологічних лабораторіях, для кількісного визначення метронідазолу в біологічних рідинах і провести валідацію розроблених методик.Матеріали та методи. Пробопідготовку крові і сечі проводили шляхом екстракції ацетонітрилом і ізопропанолом з подальшим відділенням органічного шару в умовах насичення водної фази амонію сульфатом. Попередньо кров і сечу обробляли кислотами. Ізолювання проводили в сильнокислому, нейтральному і слабколужному середовищі.Результати та їх обговорення. Для підбору оптимальних умов пробопідготовки були визначені такі валідаційні параметри як специфічність/селективність і ступінь ізолювання. Результати аналізу blank-проб прийнятні для всіх варіантів процедур пробопідготовки. Значення ступеня ізолювання відтворювані длявсіх вивчених процедур аналізу, але ефективність виділення метронідазолу різна – від 85 % до 97 %. Результати перевірки стабільності метронідазолу показали необхідність проведення всіх вимірювань впродовж 12 годин після отримання аналізованих розчинів. Результати визначення лінійності, правильності тапрецизійності свідчать про допустимість систематичних і випадкових помилок досліджених ВЕРХ/УФ-методик у варіанті методу калібрувального графіка, методу стандарту та методу добавок.Висновки. Розроблено комплекс ВЕРХ-методик для кількісного визначення метронідазолу в крові і сечі. Проведено валідацію розроблених методик