Застосування тонкошарової хроматографії та кольорових реакцій в аналізі метронідазолу

Metronidazole belongs to the group of antiprotozoal medicines and is a potential object of research in various areas of analytical toxicology.Aim. To study the metronidazole behavior when developing with color reagents generally accepted and to determine Rf values of metronidazole under chromatographing conditions in the solvent systems generally accepted in forensic toxicology.Results and discussion. It has been shown that such widely used color reagents as UV-light, iodine vapor, Wagner reagent, acidified iodoplatinate solution can be used for detecting metronidazole on chromatographic plates. Metronidazole gives positive detection results with reagents used in the TLC-screening of extracts from the biological material for substances of basic, acid and neutral nature. It has been proposed to develop metronidazole with the neutral ninhydrin solution, p-dimethylaminobenzaldehyde solution and hydrochloric acid vapors, as well as acidified iodoplatinate solution after keeping the plates in formalin vapors. The chromatographic mobility of metronidazole has been studied in 17 solvents systems; the systems are used as standard mobile phases according to recommendations of the International Association of Forensic Toxicologists for TLC-screening of organic compounds of acid, neutral and basic nature, in the general TLC-screening of organic substances in the Ukrainian forensic toxicological laboratories, and some systems investigated with the purpose of choosing the optimal individual solvents systems for the metronidazole study.Experimental part. The chromatographic plates Sorbfil® PTLC-IIH-UV and Merck® TLC SILICA GEL 60 were used as thin layers. Conclusions. The behavior of metronidazole when developing on TLC-plates with two types of a substrate (plastic and glass) and with/without luminophor (or UV-indicator) with commonly used colored reagents has been studied. The Rf values of metronidazole under chromatographing conditions in the standard solvent systems used for TLC-screening of organic compounds of acid, neutral and basic nature have been determined.Метронидазол относится к группе антипротозойных лекарственных средств и является потенциальным объектом исследований в различных областях аналитической токсикологии.Цель. Исследование поведения метронидазола при проявлении общепринятыми цветными реагентами и установление значений Rf метронидазола в условиях хроматографирования в общепринятых в судебно-токсикологическом анализе системах растворителей.Результаты и их обсуждение. Показано, что для обнаружения метронидазола на хроматографических пластинах можно использовать такие широко применяемые проявители, как УФ-свет, пары йода, реактив Вагнера, подкисленный раствор йодоплатината. Метронидазол дает положительные результаты обнаружения с реактивами, использующимися в ходе ТСХ-скрининга извлечений из биологического материала на вещества основного, кислого и нейтрального характера. Предложено проявлять метронидазол нейтральным раствором нингидрина, раствором п-диметиламинобензальдегида и парами хлористоводородной кислоты, а также подкисленным раствором йодоплатината после выдерживания пластин в парах формалина. Хроматографическая подвижность метронидазола исследована в 17 системах растворителей, среди которых подвижные фазы, применяемые в качестве стандартных согласно рекомендациям Международного комитета по систематическому токсикологическому анализу Международной ассоциации судебных токсикологов для ТСХ-скрининга органических веществ кислого, нейтрального и основного характера, в общем ТСХ-скрининге органических веществ в отечественных судебно-токсикологических лабораториях, и отдельные подвижные фазы, исследованные с целью подбора оптимальных частных систем растворителей для исследования метронидазола.Экспериментальная часть. В качестве тонких слоев использовали пластины Sorbfil ПТСХ-ІІВ-УФ и Merck TLC Silica gel 60G.Выводы. Исследовано поведение метронидазола при проявлении общепринятыми хромогенными реагентами на пластинах для ТСХ с двумя типами подложки (пластик и стекло) и с УФ-индикатором и без него. Установлены значения Rf метронидазола в условиях хроматографирования в стандартных системах растворителей, используемых для ТСХ-скрининга веществ кислого, нейтрального и основного характера.Метронідазол належить до групи антипротозойних лікарських засобів і є потенційним об’єктом досліджень у різних галузях аналітичної токсикології.Мета. Дослідження поведінки метронідазолу при проявленні загальноприйнятими кольоровими реагентами та встановлення значень Rf метронідазолу за умов хроматографування в загальноприйнятих у судово-токсикологічному аналізі системах розчинників.Результати та їх обговорення. Показано, що для виявлення метронідазолу на хроматографічних пластинах можна використовувати такі широко вживані проявники, як УФ-світло, пари йоду, реактив Вагнера, підкислений розчин йодоплатинату. Метронідазол дає позитивні результати виявлення з реактивами, що використовуються в ході ТШХ-скринінгу витяжок із біологічного матеріалу на речовини лужного, кислого та нейтрального характеру. Запропоновано проявляти метронідазол нейтральним розчином нінгідрину, розчином п-диметиламінобензальдегіду та парами хлоридної кислоти, а також підкисленим розчином йодоплатинату після витримування пластин у парах формаліну. Хроматографічну рухомість метронідазолу досліджено в 17 системах розчинників, серед яких рухомі фази, що застосовуються як стандартні згідно з рекомендаціями Міжнародного комітету з систематичного токсикологічного аналізу Міжнародної асоціації судових токсикологів для ТШХ-скринінгу органічних речовин кислого, нейтрального та основного характеру, в загальному ТШХ-скринінгу органічних речовин у вітчизняних судово-токсикологічних лабораторіях, та окремі рухомі фази, досліджені з метою підбору оптимальних окремих систем розчинників для дослідження метронідазолу.Експериментальна частина. Як тонкі шари використовували пластини Sorbfil ПТСХ-ІІВ-УФ та Merck TLC Silica gel 60G. Висновки. Досліджено поведінку метронідазолу при проявленні загальноприйнятими хромогенними реагентами на пластинах для ТШХ з двома типами підложки (пластик та скло) та з УФ-індикатором і без нього. Встановлено значення Rf метронідазолу за умов хроматографування в стандартних системах розчинників, що використовуються для ТШХ-скринінгу речовин кислого, нейтрального та основного характеру

Розробка і валідація ВЕРХ/УФ-методик кількісного визначення метронідазолу в крові та сечі

Metronidazole belongs to the group of antiprotozoal medicines and widely used for the treatment of infectious diseases; the medicine has a number of side effects manifested by usual symptoms of acute intoxication, especially when interacting with other drugs and alcohol.Aim. To apply the system of MiLiChrome® A-02 HPLC-analyzer widely used in the Ukrainian laboratories of forensic toxicology for the metronidazole quantitative determination in biological fluids and carry out validation of the procedures developed.Materials and methods. The sample preparation of blood and urine was carried out by extraction with acetonitrile and 2-propanol followed by separation of the organic layer under the conditions of the aqueous phase saturation with ammonium sulfate. Previously blood and urine were treated with acids. Isolation was carried out in the strong acid, neutral and weak alkaline medium.Results and discussion. To find the optimal conditions of the sample preparation such validation parameters as specificity/selectivity and recovery were determined. The results of the blank samples analysis were acceptable for all variants of the sample preparation procedures. Recovery values were reproducible for all procedures of analysis studied, but efficacy of metronidazole isolation was variable – from 85% to 97 %. The results of verification of metronidazole stability showed the necessity to carry out all measurements within 12 hours after obtaining the solutions to be analyzed. The results of determination of linearity, accuracy and precision were the evidenceof acceptable systematic and random errors of the HPLC/UV-procedures studied in the variant of the method of calibration curve, method of standard and method of additions.Conclusions. The set of HPLC/UV-procedures for the metronidazole quantitative determination in blood and urine has been developed. Validation of the procedures developed has been carried out.Метронидазол относится к группе антипротозойных препаратов и широко применяется для лечения инфекционных заболеваний; препарат имеет ряд побочных эффектов, проявляющихся обычными симптомами острой интоксикации, особенно при взаимодействии с другими препаратами и алкоголем.Цель. Применить систему ВЭЖХ-анализатора MiLiChrome® A-02, широко используемую в украинских судебно-токсикологических лабораториях, для количественного определения метронидазола в биологических жидкостях и провести валидацию разработанных методик.Материалы и методы. Пробоподготовку крови и мочи проводили путем экстракции ацетонитрилом и изопропанолом с последующим отделением органического слоя в условиях насыщения водной фазы аммония сульфатом. Предварительно кровь и мочу обрабатывали кислотами. Изолирование проводили в сильнокислой, нейтральной и слабощелочной среде.Результаты и их обсуждение. Для подбора оптимальных условий пробоподготовки были определены такие валидационные параметры, как специфичность/селективность и степень извлечения. Результаты анализа blank-проб приемлемы для всех вариантов процедур пробоподготовки. Значения степени извлечения воспроизводимы для всех изученных процедур анализа, но эффективность выделения метронидазола различна – от 85 % до 97 %. Результаты проверки стабильности метронидазола показали необходимость проведения всех измерений в течение 12 часов после получения анализируемых растворов. Результаты определения линейности, правильности и прецизионности свидетельствуют о допустимости систематических и случайных ошибок изученных ВЭЖХ/УФ-методик в варианте метода калибровочного графика, метода стандарта и метода добавок.Выводы. Разработан комплекс ВЭЖХ-методик для количественного определения метронидазола в крови и моче. Проведена валидация разработанных методик.Метронідазол належить до групи антипротозойних засобів і широко застосовується для лікування інфекційних захворювань; препарат має ряд побічних ефектів, що виявляються звичайними симптомами гострої інтоксикації, особливо при взаємодії з іншими препаратами і алкоголем.Мета. Застосувати систему ВЕРХ-аналізатора MiLiChrome® A-02, що широко використовується в українських судово-токсикологічних лабораторіях, для кількісного визначення метронідазолу в біологічних рідинах і провести валідацію розроблених методик.Матеріали та методи. Пробопідготовку крові і сечі проводили шляхом екстракції ацетонітрилом і ізопропанолом з подальшим відділенням органічного шару в умовах насичення водної фази амонію сульфатом. Попередньо кров і сечу обробляли кислотами. Ізолювання проводили в сильнокислому, нейтральному і слабколужному середовищі.Результати та їх обговорення. Для підбору оптимальних умов пробопідготовки були визначені такі валідаційні параметри як специфічність/селективність і ступінь ізолювання. Результати аналізу blank-проб прийнятні для всіх варіантів процедур пробопідготовки. Значення ступеня ізолювання відтворювані длявсіх вивчених процедур аналізу, але ефективність виділення метронідазолу різна – від 85 % до 97 %. Результати перевірки стабільності метронідазолу показали необхідність проведення всіх вимірювань впродовж 12 годин після отримання аналізованих розчинів. Результати визначення лінійності, правильності тапрецизійності свідчать про допустимість систематичних і випадкових помилок досліджених ВЕРХ/УФ-методик у варіанті методу калібрувального графіка, методу стандарту та методу добавок.Висновки. Розроблено комплекс ВЕРХ-методик для кількісного визначення метронідазолу в крові і сечі. Проведено валідацію розроблених методик