СРАВНЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ МОЛЕКУЛЯРНО- ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА СОМАТИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В ГЕНЕ K-RAS ПРИ КОЛОРЕКТАЛЬНОМ РАКЕ

Two approaches to somatic point mutations in 12 and 13 codones of K-ras gene were analyzed: PCR/SSCP/AСRS/sequencing and allele-specific PCR in the real-life regimen (Russian set «KRAS-7M»). The comparison was carried out on 62 examples of genomic DNA extracted from frozen colon carcinomas, which underwent manual dissection. The results obtained in two attempts were consistent in 95,2% (N=59). Specificity and sensitivity of K-ras mutations detection using «KRAS-7M» set were 100 and 96,4% respectively, and 94,1 and 100% respectievly using PCR/SSCP/AСRS/ automatic sequencing. False positive results were absent when detecting with «KRAS-7M» and accounted for 2 cases (5,9%) when using PCR/SSCP/ AСRS/automatic sequencing. The only false negative response (3,6%) was obtained analyzing mutations using «KRAS-7M».Проведено сравнение двух подходов для анализа соматических точечных мутаций в кодонах 12 и 13 гена K-ras: методов ПЦР/SSCP/AСRS/секвенирования и аллель-специфической ПЦР в режиме реального времени (отечественный коммерческий набор «KRAS-7M»). Сравнение проводили на 62 образцах геномной ДНК, выделенной из замороженных карцином толстой кишки, подвергшихся ручной микродиссекции. Результаты, полученные с помощью двух подходов, совпали для 59 карцином (95,2% случаев). Специфичность и чувствительность детекции K-ras мутаций с помощью набора «KRAS-7M» составили 100 и 96,4%, соответственно, а с использованием методов ПЦР/AСRS/SSCP/ автоматического секвенирования — 94,1 и 100%, соответственно. Ложноположительные данные отсутствовали при детекции мутаций с помощью набора «KRAS-7M» и составили 2 случая (5,9%) при исследовании методами ПЦР/AСRS/SSCP/автоматического секвенирования. Единственный ложноотрицательный результат (3,6%) был получен при анализе мутаций набором «KRAS-7M»