A comparison of different methods to assess the hemorrhagic activity of Bothrops venoms

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dokmetjian, Christian. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Segré, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Area lología; Argentina.The hemorrhagic activity of Bothrops (B.) alternatus, B. ammodytoides, B. jararaca, B. jararacussu, B. moojeni and B. neuwiedii venoms from specimens captured in Argentina was assayed after i.d. injection to mice. The hemorrhagic haloes produced by each venom had different color intensities, although no significant differences were observed by measurement of the average diameters or the weight of the excised hemorrhagic haloes. Conversely, important differences were found by measuring the amount of hemoglobin extracted from excised hemorrhagic haloes of similar size produced by different venoms. The relationship between the amount of hemoglobin extracted and the weight of the excised hemorrhagic haloes was linear, with a slope (hemoglobin released per gram of hemorrhagic halo) characteristic for each venom, and proportional to the potency. On this basis, the activity of B. alternatus, B. ammodytoides and B. jararaca is similar, about 1.5 times higher than that of B. jararacussu and B. moojeni venoms and threefold higher than that of B. neuwiedii venom. Thus, measurement of the of hemoglobin released provides additional information in comparative studies, and may be used to assess the antihemorrhagic potency of antivenoms

Cross neutralization of bothrops jararacussu venom by heterologous antivenoms

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Area lología; Argentina.Fil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dokmetjian, J. C. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge A. Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Area lología; Argentina.Fil: Hajos, Silvia E. Universidad de Buenos Aires. Cátedra de Inmunología; Argentina.Fil: Segré, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.En la Argentina se utilizan tres tipos de sueros antiofídicos frente a la mordedura de crotálidos, el Anticrotálico Monovalente, contra el veneno de Crotalus durissus terrificus ("víbora de cascabel"), el Botrópico Bivalente y el Botrópico Tetravalente ("Misiones") contra los venenos de las diferentes especies de Bothrops que se encuentran en la Argentina (las diferentes "yarará"). Además, existe un suero Botrópico-Crotálico (Trivalente) el cual cubriría el mismo espectro que el Bivalente más el Anticrotálico. En este trabajo estudiamos la reactividad inmunoquímica de los sueros antibotrópicos Bivalente y Tetravalente, del Botrópico Crotálico (Trivalente) y del Anticrotálico Monovalente con el veneno de Bothrops jararacussu ("yararacuzú", "tapete dourado"). Además, se estudió la capacidad neutralizante de estos antivenenos sobre la potencia letal, y las actividades hemorrágica, necrotizante, procoagulante y hemolítica indirecta del veneno de B. jararacussu. La potencia neutralizante sobre las actividades biológicas y tóxicas de este veneno por todos los antivenenos utilizados es similar a la obtenida con el suero antibotrópico tetravalente (homólogo). Estos resultados sugieren la posibilidad de emplear sueros antibotrópicos heterólogos en el tratamiento de los accidentes por B. jararacussu. (EN) We have studied the immunochemical cross-reactivity and cross-neutralization of the lethal potency, hemorrhagic, necrotizing, procoagulant and (indirect) hemolytic activities of Bothrops jararacussu venom by the standard antivenoms produced in Argentina. These antivenoms are horse immunoglobulin F (ab`)2 fragments from animals immunized with 1) Crotalus durissus terrificus venom (Monovalent Anticrotalic antivenom); 2) Bothrops alternatus and B. neuwiedii venoms (Bivalent Botropic antivenom); 3) B. alternatus, B. neuwiedii; B. jararaca and B. jararacussu venoms (Tetravalent Bothropic, or "Misiones" antivenom) and 4) B. alternatus, B. neuwiedii and C. d. terrificus venoms (Trivalent Botropic-Crotalic antivenom). In preincubation experiments, all the heterologous antivenoms neutralized the toxic and biological activities of B. jararacussu venom with a potency at least as high as the Tetravalent Botropic (i.e. the only homologous) antivenom, in which B. jararacussu venom was included as immunogen. These results suggest the possibility of using heterologous antibothropic antivenoms for the treatment of snake bites by B. jararacussu

Cross neutralization of bothrops jararacussu venom by heterologous antivenoms

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Area lología; Argentina.Fil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dokmetjian, J. C. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge A. Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Area lología; Argentina.Fil: Hajos, Silvia E. Universidad de Buenos Aires. Cátedra de Inmunología; Argentina.Fil: Segré, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.En la Argentina se utilizan tres tipos de sueros antiofídicos frente a la mordedura de crotálidos, el Anticrotálico Monovalente, contra el veneno de Crotalus durissus terrificus ("víbora de cascabel"), el Botrópico Bivalente y el Botrópico Tetravalente ("Misiones") contra los venenos de las diferentes especies de Bothrops que se encuentran en la Argentina (las diferentes "yarará"). Además, existe un suero Botrópico-Crotálico (Trivalente) el cual cubriría el mismo espectro que el Bivalente más el Anticrotálico. En este trabajo estudiamos la reactividad inmunoquímica de los sueros antibotrópicos Bivalente y Tetravalente, del Botrópico Crotálico (Trivalente) y del Anticrotálico Monovalente con el veneno de Bothrops jararacussu ("yararacuzú", "tapete dourado"). Además, se estudió la capacidad neutralizante de estos antivenenos sobre la potencia letal, y las actividades hemorrágica, necrotizante, procoagulante y hemolítica indirecta del veneno de B. jararacussu. La potencia neutralizante sobre las actividades biológicas y tóxicas de este veneno por todos los antivenenos utilizados es similar a la obtenida con el suero antibotrópico tetravalente (homólogo). Estos resultados sugieren la posibilidad de emplear sueros antibotrópicos heterólogos en el tratamiento de los accidentes por B. jararacussu. (EN) We have studied the immunochemical cross-reactivity and cross-neutralization of the lethal potency, hemorrhagic, necrotizing, procoagulant and (indirect) hemolytic activities of Bothrops jararacussu venom by the standard antivenoms produced in Argentina. These antivenoms are horse immunoglobulin F (ab`)2 fragments from animals immunized with 1) Crotalus durissus terrificus venom (Monovalent Anticrotalic antivenom); 2) Bothrops alternatus and B. neuwiedii venoms (Bivalent Botropic antivenom); 3) B. alternatus, B. neuwiedii; B. jararaca and B. jararacussu venoms (Tetravalent Bothropic, or "Misiones" antivenom) and 4) B. alternatus, B. neuwiedii and C. d. terrificus venoms (Trivalent Botropic-Crotalic antivenom). In preincubation experiments, all the heterologous antivenoms neutralized the toxic and biological activities of B. jararacussu venom with a potency at least as high as the Tetravalent Botropic (i.e. the only homologous) antivenom, in which B. jararacussu venom was included as immunogen. These results suggest the possibility of using heterologous antibothropic antivenoms for the treatment of snake bites by B. jararacussu

A study on the experimental envenomation in mice with the venom of Tityus trivitattus Kraepelin 1898 (Scorpiones, Buthidae) captured in Argentina

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Gimeno, E. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Portiansky, E. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Varni, L. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge. A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Segre, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales "Bernardino Rivadavia". Area de Iologia; Argentina.Although Tityus trivitattus is the only scorpion species reported to cause severe human envenomation in Argentina, no previous studies on its venom have been done. Telson homogenates from T. trivitattus specimens collected in Santiago del Estero, Cordoba, and Buenos Aires were employed to study their protein composition and toxicity to mice. Regardless of the site of collection, electrophoretic analysis showed bands at 205, 150, 100, 40, 32, and 13 kDa or smaller. FPLC gel filtration showed three major peaks and 6-8 minor peaks with similar elution volumes. One of the minor peaks from FPLC containing a component of approximately 8 kDa was lethal to mice. Mice injected intravenously with different doses of homogenates presented severe autonomic signs like tachypnea, tachycardia, sialorrhea, lacrimation, profuse sweating, diarrhea, dyspnea, and death. Pathology studies of lungs showed severe congestion of alveolar capillaries, pulmonary edema, and hemorrhagic areas. The kidneys showed glomerular as well as tubular lesions and exocrine glands showed areas of necrosis. The calculated LD50 was 0.38 +/- 0.08 telsons per 20 g mouse, which suggests a lethal potency similar to that of T. serrulatus venom. The lethal potency of 5.0 LD50 of T. trivitattus telson homogenate was neutralized by both an anti-T. trivitattus and a heterologous anti Tityus with ED50 values of 41 +/- 19 and 170 +/- 42 microl, respectively

A study on the experimental envenomation in mice with the venom of Tityus trivitattus Kraepelin 1898 (Scorpiones, Buthidae) captured in Argentina

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Gimeno, E. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Portiansky, E. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina.Fil: Varni, L. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge. A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Segre, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales "Bernardino Rivadavia". Area de Iologia; Argentina.Although Tityus trivitattus is the only scorpion species reported to cause severe human envenomation in Argentina, no previous studies on its venom have been done. Telson homogenates from T. trivitattus specimens collected in Santiago del Estero, Cordoba, and Buenos Aires were employed to study their protein composition and toxicity to mice. Regardless of the site of collection, electrophoretic analysis showed bands at 205, 150, 100, 40, 32, and 13 kDa or smaller. FPLC gel filtration showed three major peaks and 6-8 minor peaks with similar elution volumes. One of the minor peaks from FPLC containing a component of approximately 8 kDa was lethal to mice. Mice injected intravenously with different doses of homogenates presented severe autonomic signs like tachypnea, tachycardia, sialorrhea, lacrimation, profuse sweating, diarrhea, dyspnea, and death. Pathology studies of lungs showed severe congestion of alveolar capillaries, pulmonary edema, and hemorrhagic areas. The kidneys showed glomerular as well as tubular lesions and exocrine glands showed areas of necrosis. The calculated LD50 was 0.38 +/- 0.08 telsons per 20 g mouse, which suggests a lethal potency similar to that of T. serrulatus venom. The lethal potency of 5.0 LD50 of T. trivitattus telson homogenate was neutralized by both an anti-T. trivitattus and a heterologous anti Tityus with ED50 values of 41 +/- 19 and 170 +/- 42 microl, respectively

A study on the venom yield of venomous snake species from Argentina

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge. A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Segre, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Litwin, Silvana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales "Bernardino Rivadavia". Area de Iologia; Argentina.Fil: Galarce, Pedro P. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Gould, Eduardo. Fundación de Estudios Biológicos; Buenos Aires, Argentina.Fil: Dokmetjian, Christian. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.A study on the venom yield of snakes from Argentina over a three year period was carried out on adult specimens of Bothrops alternatus (n = 74); Bothrops neuwiedii (n = 127); Bothrops ammodytoides (n = 30); Bothrops moojeni (n = 14); Bothrops jararaca (n = 14); B. jararacussu (n = 6); Crotalus durissus terrificus (n = 120) and Micrurus spp. (n = 6) as well as with 12 specimens of newborn C. d. terrificus kept in captivity. While for each species there was a positive correlation between venom yield and number of snakes milked, the correlation with the snake's body weights after individual milkings was even better, suggesting that the size of the snakes is more important in determining the venom yield than the number of snakes milked or the specimen's sex. Individual milkings indicated that, in addition to the snake size, when the amount of venom is normalized per 100 g body weight there is a species specific difference in venom yield. It follows the order B. jararacussu > B. moojeni approximately = B. jararaca approximately = B. alternatus > B. neuwiedii> Micrurus spp approximately = B. ammodytoides> C. d. terrificus. Although the venom yield per 100 g body weight of newborn C. d. terrificus specimens is 2-fold higher than that of adults, no correlation was observed between venom yield and body weight

Some toxic and enzymatic activities of Bothrops ammodytoides (yarará ñata) venom

Fil: de Roodt, Adolfo R. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Dolab, Jorge A. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Hajos, S E. Cátedra de Inmunologı́a de la Facultad de Farmacia y Bioquı́mica de la Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires; Argentina.Fil: Gould, Eduardo G. Fundación de Estudios Biológicos, Pte. Perón, Buenos Aires; Argentina.Fil: Dinápoli, H. Museo Argentino de Ciencias Naturales ‘Bernardino Rivadavia’, CONICET, Buenos Aires; Argentina.Fil: Troiano, J C. Museo Argentino de Ciencias Naturales ‘Bernardino Rivadavia’, CONICET, Buenos Aires; Argentina.Fil: Gould, J. Cátedra de Inmunologı́a de la Facultad de Farmacia y Bioquı́mica de la Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires; Argentina.Fil: Dokmetjian, Christian ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Museo Argentino de Ciencias Naturales ‘Bernardino Rivadavia’, CONICET, Buenos Aires; Argentina.Fil: Carfagnini, Julio C. Cátedra de Patologı́a General, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires; Argentina.Fil: Fernández, Teresa. Fundación de Estudios Biológicos, Pte. Perón, Buenos Aires; Argentina.Fil: Amoroso, Marcela. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Segré, Liliana. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina.Fil: Vidal, Juan C. Museo Argentino de Ciencias Naturales ‘Bernardino Rivadavia’, CONICET, Buenos Aires; Argentina.Bothrops ammodytoides, the smallest representative of this genus, is found only in Argentina. Venom was extracted from thirty adult specimens (35-70 cm in length, 90-300 g in weight) captured in the Province of Buenos Aires and kept in captivity. Venom yield was 3-30 mg. SDS-PAGE showed strong bands at 14.0; 23-25; 45; 54 and 63 kDa and weak bands at 17.0; 30.0; 40.0 and 85.0 kDa. Toxic activities were: LD50 (intravenous, mice) 0.5+/-0.2 microg/g; minimal procoagulant dose on human plasma (MPD-P) 35+/-2 mg/l; and minimal defibrinogenating dose (MDD, mice) 6-12 microg. Hemorrhagic and/or necrotic activities appear to play a major role in lethality; minimal hemorrhagic dose (MHD, mice) is 10+/-2 microg/g and minimal necrotizing dose (MND, mice) is 38+/-5 microg. The LD50, MPD-P and MND are among the lowest in venoms from Bothrops species found in Argentina. B. ammodytoides venom exhibited high proteolytic and phospholipase A2 activities. Most of the B. ammodytoides venom components cross-react with Bivalent Bothropic antivenom (Instituto Nacional de Producción de Biológicos ANLIS Dr. G. Malbrin, against B. alternatus and B. neuwiedii venoms). One ml of antivenom neutralizes 1.2 mg of B. ammodytoides venom