Búsqueda de marcadores de embarazo ectópico en sangre periférica

Motivación: El embarazo ectópico es una anomalía en la implantación embrionaria y complicación ginecológica grave que afecta a más de un 1% de los embarazos naturales y hasta un 8% de las embarazadas en reproducción asistida, según las fuentes. Los métodos diagnósticos de embarazo ectópico a día de hoy se basan exclusivamente en métodos ecográficos y en medidas seriadas de B-hCG métodos que, en muchas ocasiones, se prolongan por una semana o más, para llegar a un diagnóstico fiable.En el Reino Unido el diagnóstico del embarazo ectópico genera un gasto anual de 12 millones de euros², datos extrapolables al resto de Europa. La existencia de un buen marcador de embarazo ectópico sustituiría la realización del test diario de β-hCG, siendo el mercado potencial de unos 13 millones de análisis por año.Métodos: Se recogieron seis muestras de sangre procedentes de mujeres con embarazo ectópico y otras seis de mujeres con embarazo intrauterino con edades gestacionales similares (entre 7 y 10 semanas) se almacenaron a -20ºC en tubos PAXGene hasta su posterior análisis. La extracción del RNA se realizó utilizando el método del Trizol (Sigma-Aldrich). Todas las muestras fueron hibridadas utilizando el “Whole Human Genome Oligo Microarray” (Agilent Technologies) que contiene mas de 44.000 sondas para el genoma humano. El microarray hibridado se escaneo mediante el escaner Axon 4100 (Molecular Devices) y los datos se extrajeron con el software Genepix 6.0 (Molecular Devices). El análisis de datos se llevo acabo con la plataforma GEPAS. Resultados: Se utilizaron seis muestras de embarazo ectópico y seis muestras de embarazo intrauterino para el análisis de microarray. Se generó una lista de 17 potenciales marcadores de embarazo ectópico con un fold change >4 o <-4 y con un p valor <0.05. De estos 17 genes se han validados por PCR cuantitativa los siguientes: ORM1, ORM2, LAMP3 y UTS2 utilizando nuevas muestras de embarazo ectópico (n=8) y de embarazo intrauterino (n=7). Después de descartar los valores atípicos se confirmaron algunos resultados del microarray.Conclusiones: Los resultados del microarray mostraron un total de 17 genes desregulados entre embarazos ectópicos e intrauterinos, concretamente 10 se sobre expresaban y 7 de ellos disminuían su expresión. Los genes ORM1, ORM2, LAMP3 y UTS2 se comprobaron por qPCR y mostraron diferencias significativas. . Al final de este estudio se comprobaran el resto de genes y se podrá diseñar un test de embarazo ectópico

Ectopic Pregnancy as a Model to Identify Endometrial Genes and Signaling Pathways Important in Decidualization and Regulated by Local Trophoblast

The endometrium in early pregnancy undergoes decidualization and functional changes induced by local trophoblast, which are not fully understood. We hypothesized that endometrium from tubal ectopic pregnancy (EP) could be interrogated to identify novel genes and pathways involved in these processes. Gestation-matched endometrium was collected from women with EP (n = 11) and intrauterine pregnancies (IUP) (n = 13). RNA was extracted from the tissue. In addition, tissues were prepared for histological analysis for degree of decidualization. We compared a) the samples from EP that were decidualized (n = 6) with non-decidualized samples (n = 5), and b) the decidualized EP (n = 6) with decidualization-matched IUP (n = 6) samples using an Affymetrix gene array platform, with Ingenuity Pathway Analysis, combined with quantitative RT-PCR. Expression of PRL and IGFBP1 was used to confirm the degree of decidualization in each group. There were no differences in PRL or IGFBP1 expression in the decidualization-matched samples but a marked reduction (P<0.001) in the non-decidualized samples. Decidualization was associated with increased expression of 428 genes including SCARA5 (181-fold), DKK1 (71-fold) and PROK1 (32-fold), and decreased expression of 230 genes including MMP-7 (35-fold) and SFRP4 (21-fold). The top canonical pathways associated with these differentially expressed genes were Natural Killer Cell and Wnt/b-Catenin signaling. Local trophoblast was associated with much less alteration of endometrial gene expression with an increase in 56 genes, including CSH1 (8-fold), and a reduction in 29 genes including CRISP3 (8-fold). The top associated canonical pathway was Antigen Presentation. The study of endometrium from tubal EP may promote novel insights into genes involved in decidualization and those influenced by factors from neighboring trophoblast. This has afforded unique information not highlighted by previous studies and adds to our understanding of the endometrium in early pregnancy