Intérêt de l'extraction en phase solide en toxicologie : exemple d'extraction de 15 substances toxiques et médicamenteuses par 7 colonnes SPE différentes par un protocole unique

Nous voyons apparaître sur le marché de nouvelles colonnes d'extraction en phase solide avec de nouvelles matrices dédiées pour l'extraction, en une seule étape, de toxiques divers et les fabricants proposent pour ce faire, des protocoles spécifiques pour le conditionnement des colonnes, le choix des tampons, les phases de lavage et d'élution des toxiques à extraire. Nous avons utilisé un protocole unique pour l'extraction en une seule étape de médicaments acides, neutres et basiques. Un protocole d'extraction en général est un compromis entre la sélectivité et le taux de rendement. Seul le taux de rendement est déterminé dans notre étude. Le protocole d'extraction utilisé est le suivant : conditionnement par methanol et tampon phosphate pH 4,4, passage de l'échantillon, lavage par la solution tampon pH 4,4 et élution par le methanol. La colonne OASIS extrait correctement les différents médicaments analysés. Aux conditions utilisées, les colonnes Certify, MN Drugs Isolute HCX et Speed Flow ABN extraient faiblement les molécules basiques et neutres. En effet, les analytes basiques ne sont pas élues et restent accrochés à la matrice ; il faudra, pour augmenter la force éluante, alcaliniser l'éluat par du NH4OH par exemple. Ceci permettra de créer un recul d'ionisation et donc de décrocher ces analytes de la phase stationnaire. Ces médicaments basiques sont donc correctement élues lorsque l'on rajoute de l'ammoniac au solvant d'élution (methanol). Par contre, les médicaments acides sont faiblement extraits car peu retenus par la phase stationnaire. Pour améliorer le rendement d'extraction par ces colonnes, il faudra modifier les conditions de l'étape de lavage selon les molécules à extraire. En effet, le mécanisme de rétention est fonction du choix des tampons et de leurs pH. La colonne MNHR-P extrait seulement les médicaments acides. La colonne Isolute HAX est intéressante par ses performances, mais donne de faibles taux de rendement pour le methotrexate et les salicylés. Les colonnes OASIS, Speed Flow ABN et MNHR-P sont indiquées pour l'extraction sur sang total, ce qui n'est pas le cas pour les autres colonnes étudiées et ceci est une donnée importante en Toxicologie médico-légale

Mise en place d’une méthode semi-quantitative en toxicologie clinique par UHPLC-PDA en utilisant une extraction SPE en micro-élution

Objectifs : Une méthode semi-quantitative en toxicologie clinique a été développée utilisant une extraction par micro-élution en phase solide suivie d’une analyse par un système de chromatographie liquide ultra-haute performance couplée à une spectrométrie UV-visible à barrettes de diodes (PDA) (UHPLC-PDA). Cette étude a été réalisée sur 122 molécules médicamenteuses en respectant les recommandations de la norme NF EN ISO 15189. Méthodes : Parmi différentes cartouches SPE (Solid-Phase Extraction) testées, la cartouche Strata®-X a été sélectionnée pour ses meilleurs rendements d’extraction. Un protocole d’extraction manuelle à partir de plasma sanguin a été mis en place pour 3 concentrations (0,1 mg/L, 1 mg/L et 10 mg/L) avec le méthanol comme solvant d’élution. La séparation sur UHPLC a été réalisée avec un gradient de phase mobile acétate d’ammonium 5 mM/acétonitrile (ACN) (85/15; V/V) à pH 3,8 ± 0,05 et d’ACN sur une colonne BEH C18 1,7 μm, 2,1 mm × 150 mm avec un débit de 0,45 mL/min. Les analytes ont été détectés par PDA (190–400 nm). Résultats : Les rendements d’extraction étaient satisfaisants de même que la précision (CV% répétabilité < 6,54 %). Les CV inter-essais étaient élevés (CV > 15 % pour certaines molécules) mais diminuaient lorsqu’ils étaient rapportés aux 2 étalons internes (flurazépam et prazépam). La semi-quantification s’est faite à l’aide de 2 facteurs de réponses et les LOD et LOQ ont été comparées aux valeurs thérapeutiques ou toxiques. Conclusion : La méthode décrite est simple et rapide. Les résultats ont montré la capacité de la cartouche Strata®-X à extraire des molécules appartenant à plusieurs classes pharmacologiques avec des propriétés physico-chimiques différentes

New extraction method of THC and its metabolites, 11-OH-THC and THC-COOH, in plasma

Objectives: A liquid/liquid extraction technique on solid support of Δ9-tetradydrocannabinol (THC), 11-hydroxy-Δ9-tetradydrocannabinol (11-OH-THC) and 11-nor-Δ9-tetradydrocannabinol-9-carboxylic acid (THC-COOH) in plasma was developed in order to be assayed by high-performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Methods: The samples were extracted by liquid/liquid extraction over solid support of an extraction cartridge. The extracts were thereafter dried down and injected into the HPLC-MS/MS system set with a positive electrospray mode using a Waters XTerra MS C18 3.5-μm 2.1 × 150 mm column. Results: The extraction recovery levels were 66%, 70% and 71% for THC, and 75%, 93% and 101% for 11-OH-THC at concentrations of 2.5, 5 and 10 ng/mL, respectively. They were 86% and 78% for THC-COOH at concentrations of 5 and 10 ng/mL. The limits of detection (LOD) were 0.09, 0.08 and 0.91 ng/mL for THC, 11-OH-THC and THC-COOH, respectively. The limits of quantification (LOQ) were 0.16, 0.15 and 3.24 ng/mL for THC, 11-OH-THC and THC-COOH, respectively. The inter-series incertitude CV determined for concentrations of 1, 2.5 and 10 ng/mL were 12.1%, 12.0% and 6.4% for THC, 14.5%, 11.1% and 7.2% for 11-OH-THC, and 14.9%, 26.2% and 11.3% for THC-COOH. Conclusion: The novel extraction method for THC, 11-OH-THC and THC-COOH developed in this work is rapid, sensitive and specific. It may be a valuable tool for predictive toxicology, high-throughput metabolism and pharmacokinetic studies of cannabinoids