Biosensor enzimático quimiluminiscente para la determinación de aminas biógenas basado en la reacción luminol-peróxido de hidrógeno

Las aminas biógenas son compuestos nitrogenados de bajo peso molecular que presentan funciones biológicas importantes en el organismo de seres vivos. Se producen mediante descarboxilación selectiva de determinados aminoácidos, proceso llevado a cabo por microorganismos, generalmente bacterias. Sin embargo, en concentraciones elevadas pueden suponer riesgos en la salud de estos. Por este motivo, es necesario elaborar métodos rápidos de determinación de dichas aminas biógenas, que sean fiables y sencillos.En este trabajo de fin de grado se ha elaborado un método rápido para la determinación de aminas biógenas mediante señales quimiluminiscentes, que son la base de un biosensor enzimático. Estas señales son obtenidas al reaccionar el H2O2 con luminol, el cual se oxida generando luz. Esta reacción luminol/H2O2 necesita de la presencia de un catalizador el cual, en la mayoría de los casos, se acopla con la reacción enzimática entre el peróxido y la peroxidasa de rábano picante (HRP), siendo el Fe(II) presente en el grupo hemo de la enzima el que actúa como catalizador. El método propuesto para la determinación de putrescina se basa en la reacción enzimática con Diamino Oxidasa (DAO), en la que se genera H2O2 y en la utilización de las propiedades catalíticas del centro metálico (Cu(II)) de la enzima en sustitución HRP. Sin embargo en la concentración en la que se encuentra el Cu(II) en la enzima, no presenta poder catalítico notable. Por ello, se consiguió eliminar el Cu(II) e insertar Co(II), obteniéndose una actividad catalítica suficiente, con un rango lineal de 2,43·10-6 M hasta a 10-4 M de putrescina y una DSR(%) de 3,43%. También se comprobó que la cadaverina podía ser determinada con este método quimiluminiscente, si bien para esta amina se tiene menor sensibilidad.Con Tiramina oxidasa TAO-Co(II) resultó imposible dado que las aminas biógenas con las que reacciona (tiramina, tirosina y feniletilamina) presentan anillos aromáticos, los cuales desactivan la quimiluminiscencia (quencher). <br /