Prevalence of bla TEM-220 gene in Penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae strains carrying Toronto/Rio plasmid in Argentina, 2002 – 2011

BACKGROUND: Penicillinase-producing Neisseria gonorroheae (PPNG) was first isolated in 1976. PPNG strains carrying bla(TEM-1) and bla(TEM-135) gene have been described in different countries. Recently, a novel bla(TEM-220) allele was detected in PPNG isolates carrying Toronto/Rio plasmid. The prevalence and characteristics of TEM-220 strains worldwide are unknown, and therefore, it needs to be studied. The purpose of this study was to detect bla(TEM-220) gene in PPNG strains possessing Toronto/Rio plasmid over a period of ten years in Argentina, and to evaluate the proportion of isolates producing non-TEM-220 containing the T539C substitution in the bla(TEM) allele. METHODS: One hundred and fifty one PPNG isolates carrying Toronto/Rio plasmid were studied between 2002 and 2011. A mismatch amplification mutation assay (MAMA) PCR was used to identify the T539C substitution in the bla(TEM) allele and a MAMA-PCR protocol was developed to detect the G547A substitution in the bla(TEM-220). The reference agar dilution method of the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) was used for susceptibility testing to five β-lactams antibiotics, ciprofloxacin, tetracycline and azithromycin. In all TEM-220-producing isolates, the whole bla(TEM) gene was sequenced and the isolates were typed using N. gonorroheae multiantigen sequence typing (NG-MAST). RESULTS: MAMA PCR successfully identified the G547A substitution in the bla(TEM-220) allele. The proportion of isolates that possessed the bla(TEM-220) allele was 2.6 %, and 93.2 % MAMA TEM-220 PCR-negative isolates showed the T539C substitution in the bla(TEM) gene. No differences in the susceptibility to five beta-lactam antibiotics tested were observed in PPNG isolates TEM-220-producing and PPNG isolates carrying the T539C substitution in the bla(TEM) gene. All TEM-220 isolates were indistinguishable by NG-MAST. CONCLUSION: This is the first study which shows the prevalence of bla(TEM-220) in N. gonorrhoeae isolates carrying Toronto/Rio plasmid in Argentina. Although the bla(TEM-220) allele does not appear to be associated with an extended spectrum beta-lactamase (ESBL) phenotype of resistance, a single nucleotide polymorphism added to the bla(TEM-220) or bla(TEM) containing the T539C substitution could lead to the emergence of ESBL. Thus, it is imperative to investigate in surveillance programs, not only the plasmid type in PPNG isolates and the bla(TEM) allele associated, but phenotypical characteristics and geographical distribution of isolates

Emergence and spread of Neisseria gonorrhoeae isolates with decreased susceptibility to extended-spectrum Cephalosporins in Argentina, 2009 to 2013

Fil: Gianecini, Ricardo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Romero, Maria de Las Mercedes. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Oviedo, Claudia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Vacchino, Martin. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Galarza, Patricia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Background: The emergence of Neisseria gonorrhoeae strains with decreased susceptibility to cephalosporins represents a major concern globally. The aim of this study was to examine the phenotypic and molecular characteristics of N. gonorrhoeae isolates with decreased susceptibility to ceftriaxone and cefixime in Argentina. Methods: A total of 1987 isolates were collected during 2009 and 2013. The susceptibility to penicillin G, tetracycline, ciprofloxacin, cefixime, ceftriaxone, and azithromycin was determined using the agar dilution method. The major extended-spectrum cephalosporin resistance determinants (penA, mtrR, and porB1b) were sequenced in 42 N. gonorrhoeae isolates that showed decreased susceptibility to ceftriaxone (minimum inhibitory concentration [MIC], 0.06-0.125 mg/L) and cefixime (MIC, 0.125-0.25 mg/L). Genotyping by N. gonorrhoeae multiantigen sequence typing (NG-MAST) was performed. Results: Between 2009 and 2013, there was a shift in the modal MICs for ceftriaxone. Among the 42 isolates exhibiting decreased susceptibility to ceftriaxone and cefixime, 95.2% were resistant to penicillin G, 95.2% to tetracycline, 97.6% to ciprofloxacin, and 33.3% to azithromycin. Thirty-five (83.3%) of the 42 isolates had a mosaic penA allele XXXIV, which has been previously associated with resistance to ceftriaxone and cefixime as well as treatment failures. The isolates that contained the mosaic penicillin-binding protein 2 (PBP2) XXXIV were associated with NG-MAST ST1407 or closely related genotypes. Conclusions: In Argentina, N. gonorrhoeae isolates with decreased susceptibility to cefixime and ceftriaxone have now emerged, mostly due to the introduction of the internationally spread multidrug-resistant NG-MAST ST1407

Infecção por Neisseria gonorrhoeae e fenótipos de resistência antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010

Fil: Zotta, Claudio Marcelo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Departamento laboratorio de diagnóstico, investigación y referencia epidemiológica. Servicio de Bacteriología; Argentina.Fil: Lavayén, Silvina. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Departamento laboratorio de diagnóstico, investigación y referencia epidemiológica. Servicio de Bacteriología; Argentina.Fil: Galeano, Griselda. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Servicio de Enfermedades de Transmisión Sexual y SIDA; Argentina.Fil: Gianecini, Ricardo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Oviedo, Claudia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Galarza, Patricia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Se realizó un estudio epidemiológico de tipo descriptivo retrospectivo, para determinar la tasa de infección por Neisseria gonorrhoeae y sus fenotipos de resistencia a los antimicrobianos, en 666 pacientes adultos de ambos sexos que asistieron al servicio al Servicio de ITS del Instituto Nacional de Epidemiología “Dr. Juan H. Jara”- ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”, de la ciudad de Mar del Plata, entre los años 2005–2010. Para el diagnóstico de infección por N. gonorrhoeae, las muestras fueron obtenidas por hisopados endocervicales e hisopados uretrales a varones y luego cultivadas. Los aislamientos fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia en ITS para completar el estudio de sensibilidad antimicrobiana. Se obtuvo una tasa de infección por N. gonorrhoeae del 12,2% [IC 95%: 9,83-14,95]. Los fenotipos de resistencia más prevalentes resultaron QRNG/CMRNG (resistencia a quinolonas conjuntamente con resistencia cromosómica a penicilina y tetraciclina), QRNG (resistencia a quinolonas), PPNG (cepa productora de penicilinasa) y CMTR (resistencia cromosómica a tetraciclina). En el marco de la vigilancia epidemiológica de las infecciones producidas por N. gonorrhoeae, el rol del laboratorio consiste no sólo en monitorear la incidencia de casos en la población sino también el perfil de resistencia a los antibióticos de uso terapéutico, a fin de controlar la enfermedad

Infecção por Neisseria gonorrhoeae e fenótipos de resistência antimicrobiana, Mar del Plata, 2005-2010

Fil: Zotta, Claudio Marcelo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Departamento laboratorio de diagnóstico, investigación y referencia epidemiológica. Servicio de Bacteriología; Argentina.Fil: Lavayén, Silvina. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Departamento laboratorio de diagnóstico, investigación y referencia epidemiológica. Servicio de Bacteriología; Argentina.Fil: Galeano, Griselda. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Epidemiología. Servicio de Enfermedades de Transmisión Sexual y SIDA; Argentina.Fil: Gianecini, Ricardo. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Oviedo, Claudia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Galarza, Patricia. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Se realizó un estudio epidemiológico de tipo descriptivo retrospectivo, para determinar la tasa de infección por Neisseria gonorrhoeae y sus fenotipos de resistencia a los antimicrobianos, en 666 pacientes adultos de ambos sexos que asistieron al servicio al Servicio de ITS del Instituto Nacional de Epidemiología “Dr. Juan H. Jara”- ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”, de la ciudad de Mar del Plata, entre los años 2005–2010. Para el diagnóstico de infección por N. gonorrhoeae, las muestras fueron obtenidas por hisopados endocervicales e hisopados uretrales a varones y luego cultivadas. Los aislamientos fueron remitidos al Laboratorio Nacional de Referencia en ITS para completar el estudio de sensibilidad antimicrobiana. Se obtuvo una tasa de infección por N. gonorrhoeae del 12,2% [IC 95%: 9,83-14,95]. Los fenotipos de resistencia más prevalentes resultaron QRNG/CMRNG (resistencia a quinolonas conjuntamente con resistencia cromosómica a penicilina y tetraciclina), QRNG (resistencia a quinolonas), PPNG (cepa productora de penicilinasa) y CMTR (resistencia cromosómica a tetraciclina). En el marco de la vigilancia epidemiológica de las infecciones producidas por N. gonorrhoeae, el rol del laboratorio consiste no sólo en monitorear la incidencia de casos en la población sino también el perfil de resistencia a los antibióticos de uso terapéutico, a fin de controlar la enfermedad

Use of whole genome sequencing for the molecular comparison of Neisseria gonorrhoeae isolates with decreased susceptibility to extended spectrum cephalosporins from two geographically different regions in America

Fil: Gianecini, Ricardo A. Public Health Ontario Laboratories, Toronto; Canada.Fil: Zittermann, Sandra. Public Health Ontario Laboratories, Toronto; Canada.Fil: Oviedo, Claudia . ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Departamento de Bacteriología; Argentina.Fil: Galas, Marcelo F. ANLIS Dr.C.G.Malbrán. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas; Argentina.Fil: Ramon Pardo, Pilar. Pan American Health Organization/World Health Organization (PAHO/ WHO), Washington, DC; Estados Unidos.Fil: Allen, Vanessa G. Public Health Ontario Laboratories, Toronto; Canada.Fil: Galarza, Patricia G. Public Health Ontario Laboratories, Toronto; Canada.Fil: Melano, Roberto. Public Health Ontario Laboratories, Toronto; Canada.Neisseria gonorrhoeae isolates with reduced susceptibility or resistance to the recommended first-line antimicrobial therapy have been described in several countries. The purpose of this study was to use genome analyses to compare the molecular characteristics of N. gonorrhoeae isolates with decreased susceptibility to extended-spectrum cephalosporin (ESC) from Ontario, Canada, and Argentina

Comparación de las características moleculares de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae con alta y baja resistencia a la azitromicina en Argentina

Introducción y Objetivos: Actualmente, la azitromicina (AZM) en combinación con una cefalosporina de espectro extendido (CEE) se recomienda como terapia empírica de primera línea para el tratamiento de la gonorrea. Sin embargo, la emergencia de aislamientos con baja (CIM: 2-8 μg/ml) y alta (CIM: >=256 μg/ml) resistencia a AZM, sumado a la presencia de aislamientos con resistencia acompañante a CEE, pone en riesgo la efectividad de esta estrategia de tratamiento. En Argentina, un aislamiento con elevada resistencia a azitromicina fue observado en el año 2001. Sin embargo, hasta el año 2018, aislamientos con elevada resistencia a azitromicina no han sido reportados en nuestro medio. El objetivo de este estudio es comparar las características moleculares de aislamientos de N. gonorrhoeae con baja y elevada resistencia a AZM. Materiales y Métodos: Se estudiaron 21 aislamientos de N. gonorrhoeae colectados por el PROVSAG en el periodo 2005–2016 (n=19, CIM: 2-16 μg/ml), y 2001 y 2018 (n=2, CIM: >=256 μg/ml). El estudio molecular se realizó a través de la secuenciación de genoma completo de todos los aislamientos con la plataforma Miseq (Illumina) usando la química V2. Se realizó el análisis bioinformático donde se estudiaron los principales determinantes de resistencia a AZM (mtrR, ARNr 23S), y genotipificación con NG-MAST y MLST de la secuencia. Resultados: Aislamientos con baja resistencia a AZM fueron localizados en las provincias de Córdoba (42,1%; n=8), Buenos Aires (52,6%; n=10) y Santa Fe (5,3%; n=1). Sin embargo, ambos aislamientos con alta resistencia a azitromicina se localizaron en la provincia de Buenos Aires. El análisis molecular del ARNr 23S mostró la presencia de la mutación C2611T y A2059G en el 73,7% (14/19) y 100% (2/2) de los aislamientos con baja y alta resistencia a AZM, respectivamente. El gen mtrR reveló un cambio de aminoácido en la posición 45 (G—D) en el 42.8% (9/21) de los aislamientos, deleción de una adenina (A-) en la secuencia invertida del promotor en el 33,3% (7/21), G45G/A- en el 4,8% (1/21) y 9.5% (n=2) mostraron un alelo mosaico (N. meningitidis-like). El análisis de genotipificación mostró relaciones clonales entre aislamientos con baja y elevada resistencia a AZM. El NG-MAST ST696 y MLST ST1580 estuvo presente en el 28,6% (n=5, CIM 4 μg/ml; n=1, >=256 μg/ml) de los aislamientos. Además, dos aislamientos (n=1, CIM 2 μg/ml; n=1, CIM >=256 μg/ml) mostraron el MLST ST9363, y NG-MAST STs (8241 y 3935, respectivamente) con >=99% de identidad en las secuencias porB y tbpB. Conclusiones: En Argentina, un aislamiento con alta resistencia a AZM es evidenciado después de 15 años. Los aislamientos reportados con baja y alta resistencia a AZM estuvieron circunscriptos a una acotada región geográfica de nuestro país. El estudio de epidemiología molecular mostró aislamientos con una alta relación clonal. Actualmente, en nuestro país se recomienda la utilización de AZM para el tratamiento de C. trachomatis y M. genitalium, aun ante la sospecha y sin confirmación en todos los casos. Los hallazgos obtenidos en este estudio sostienen la necesidad de fortalecer la vigilancia para la detección temprana de aislamientos resistentes y en consecuencia la elaboración de estrategias de salud pública para el control de la diseminación de estos aislamientos

Sensibilidad a la azitromicina de aislamientos de Neisseria gonorrhoeae: primera fase de comparación de las pruebas de difusión por discos y dilución en agar

Introducción y Objetivos: Actualmente la terapia antimicrobiana dual (ceftriaxona + azitromicina) se recomienda como terapia de primera línea para el tratamiento de la gonorrea no complicada en muchos países. Sin embargo, la emergencia de aislamientos resistentes a la azitromicina y/o ceftriaxona pone en riesgo la efectividad de esta estrategia de tratamiento. El conocimiento de la sensibilidad de aislamientos de N. gonorrhoeae a la azitromicina y ceftriaxona resulta imperativo. Recientemente, el CLSI estableció para azitromicina criterios de interpretación para CIM (Sensible: <=1 μg/ml). Sin embargo, criterios de interpretación para difusión por discos no han sido establecidos. El objetivo de este estudio fue comparar la actividad in vitro de aislamientos de N. gonorrhoeae mediante el método de difusión por discos y dilución en agar. Materiales y Métodos: Se estudiaron 2138 aislamientos de N. gonorrhoeae colectados entre 2015 y 2018 por el PROVSAG. Las técnicas de difusión por discos y dilución en agar se realizaron de acuerdo con lo establecido por los documentos M07-11th ed. y M02-13th ed. del CLSI. La cepa de referencia ATCC 49226 y el panel OMS 2008 se utilizaron como control de calidad de las determinaciones. Discos de azitromicina con una carga de 15 μg se utilizaron para la realización de la prueba de difusión por discos. El porcentaje de discrepancias se determinó de acuerdo con las recomendaciones establecidas en la guía CLSI M23-ED5. Resultados: En el periodo de estudio, las CIMs para azitromicina estuvieron comprendidas entre 0,016 y >=256 μg/ml, y la CIM50 / 90 fue 0,25 y 0,5 μg/ml, respectivamente. Un total de 49 aislamientos fueron categorizados como no-sensibles (n=48, CIM 2 – 8 μg/ml; n=1, CIM >=256 μg/ml). El análisis de comparación mostró que todos los aislamientos sensibles por dilución en agar tuvieron un diámetro de inhibición >=27 mm, mientras que los aislamientos no-sensibles tuvieron un diámetro de inhibición <=26 mm. Errores mayores (EM) o muy mayores (EVM) no fueron detectados. El estudio de regresión lineal evidencio una buena correlación con un r=-.39 (p<.001). Conclusiones: La prueba de difusión por discos mostró buena correlación en comparación a la dilución en agar. Utilizando el punto de corte tentativo para azitromicina de >=27 mm (sensible) y <=26 mm (no-sensible), no se observaron EM o EVM. El método de difusión por discos y el criterio de interpretación descripto en este estudio provee un método accesible principalmente en sitios de recursos limitados para el estudio de la sensibilidad a azitromicina en N. gonorrhoeae. Un estudio que involucre un mayor número de aislamientos no-sensibles seria de utilidad para confirmar estos resultados