SEMEADURA IN VITRO E FORMAÇÃO DE PROTOCORMOS de Cattleya aclandiae, ORQUÍDEA BRASILEIRA ENDÊMICA VULNERÁVEL, EM DIFERENTES MEIOS NUTRITIVOS

Objetivou-se neste trabalho avaliar duas fórmulas de meio nutritivo com a presença ou ausência de polpa de banana madura para a semeadura in vitro de Cattleya aclandiae. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e dez repetições. Os tratamentos foram constituídos de meio nutritivo ½ MS ou o fertilizante Peters NPK 10-30-20, acrescidos ou não de 60 g L-1 de polpa de banana madura. Aos 120 após a semeadura foram avaliados os percentuais de germinação, de protocormos sobreviventes e de protocormos com raízes. Os dados gerados foram submetidos a análise estatística e as médias separadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade de erro. O meio nutritivo ½ MS suplementado com polpa de banana favoreceu a germinação das sementes de Cattleya aclandiae para todas as características investigadas, e é recomendada para a propagação massal desta orquídea

PROPAGAÇÃO IN VITRO DE CYRTHOPODIUM SAINTGLERIANUM COM CARVÃO ATIVADO

Carvão ativado é um componente muito explorado na semeadura in vitro de orquídeas. Objetivou-se avaliar o crescimento in vitro de Cyrtopodium saintglerianum com diferentes concentrações de carvão ativado. Protocormos com 90 dias após a semeadura (0,5 cm de comprimento) foram recultivados em meio de cultura ½ MS entre os tratamentos constituídos diferentes doses de carvão ativado (0; 1,0 e 2,0 g L-1). As plântulas foram recultivadas mensalmente nesses tratamentos por mais 150 dias e, ao término do cultivo in vitro, as plântulas foram retiradas dos frascos e analisadas características biométricas. A maior eficiência para o crescimento in vitro foi verificada na concentração de 2,0 g L-1 de carvão ativado, com maior enraizamento e massa fresca das plãntulas. Portanto, a adição de carvão ativado no meio de cultura é recomendada para a propagação in vitro de Cyrtopodium saintglerianum

MICROPROPAGAÇÃO IN VITRO DE ORQUÍDEAS NATIVAS EM DIFERENTES MEIOS NUTRITIVOS COM ADIÇÃO DE POLPA DE FRUTAS.

Devido a beleza exuberante e ao seu valor econômico, diversas espécies de orquídeas são reproduzidas através de técnicas laboratoriais denominadas, micropropagação in vitro. A técnica é importante para suprir a demanda ornamental e principalmente a perpetuação da espécie no meio ambiente. Este trabalho trata-se de um experimento com delineamento totalmente casualizado, realizado em laboratório que objetivou-se analisar o meio nutritivo acrescido de polpa de fruta que oferece melhor desenvolvimento das orquídeas Cattleya walkeriana, Cattleya nobilor e Cattleya aclandiae. Foram utilizadas medidas biométricas nas variáveis (massa fresca, número de raízes, número de brotos, comprimento das raízes e altura da parte aérea), após a coleta dos resultados as mudas foram transferidas para coletivo e aclimatizadas.Palavras-chave: Cattleya. Propagação. Medidas biométricas. Aclimatização

Isolamento, identificação e inoculação de bactérias produtoras de auxinas associadas às raízes de orquídeas

A rizosfera favorece a colonização radicular por rizobactérias promotoras do crescimento de plantas (RPCPs), as quais podem oferecer importantes benefícios para a hospedeira. Este estudo teve o objetivo de isolar e identificar bactérias produtoras de auxinas das espécies Cattleya walkeriana, Cyrtopodium paludicolum, Ionopsis utricularioides, Oeceoclades maculata, Phalaenopsis amabilis e Vanilla planifolia e avaliar a inoculação de sementes e plântulas da orquídea brasileira Cattleya walkeriana. Ao total, foram isolados 85 bactérias, 67 delas produtoras de auxinas (quantificados por ensaios colorimétrico e detectados por CLAE) e 26 foram identificadas pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA. Seis isolados produtores de auxinas foram inoculados em bioensaios. Para a inoculação in vitro, sementes foram inoculadas com os isolados Burkholderia RzW32, Enterobacter Endw37, Curtobacterium Endw57, Bacilllus EndW60 e testemunha representada por água destilada autoclavada em meio nutritivo Knudson-C e mantidas em câmara de incubação com luminosidade e temperatura controladas. Após 120 dias, a germinação do tratamento controle apresentou-se bem desenvolvida, ao contrário de sementes dos tratamentos inoculados. No experimento de bacterização ex vitro, plântulas germinadas em cultivo assimbiótico in vitro foram inoculadas com os isolados Burkholderia RzW32, Curtobacterium RzW35, Enterobacter EndW37, Bacillus EndW48 e testemunha. Após 90 dias de cultivo em condições de casa de vegetação, foram avaliados porcentagem de sobrevivência, área foliar, número de raízes, comprimento das raízes, massa de matéria seca da parte radicular e da parte aérea, índice de aumento da área foliar e índice de aumento da massa seca total. Curtobacterium sp. e Burkholderia sp. proporcionaram a menor eficiência para o crescimento enquanto...The rhizosphere promotes root colonization by Plant growthpromoting rizobacteria (PGPR), which may offer significant benefits to the host . This study aimed to isolate and identify auxin-producing bacteria of the species Cattleya walkeriana, Cyrtopodium paludicolum, Ionopsis utricularioides, Oeceoclades maculata, Phalaenopsis amabilis and Vanilla planifolia, and evaluate seeds and seedlings innoculation of the Brazilian orchid Cattleya walkeriana. In total, 85 bacteria were isolated, 67 of them produce auxins (quantified by colorimetric assays and detected by HPLC) and 26 were identified by partial sequencing of 16S rRNA gene. Six-producing isolates were inoculated in auxin bioassays. For in vitro inoculation, seeds were inoculated with isolates Burkholderia RzW32, Enterobacter Endw37, Curtobacterium Endw57, Bacilllus EndW60 and control represented by distilled autoclaved water in nutrient medium Knudson-C and kept in an incubation chamber with controlled temperature and luminosity. After 120 days, the germination of the control treatment presented was well developed, unlike seeds of inoculated treatments. In the experiment of bacterization ex vitro, asymbiotic in vitro germinated seedlings were inoculated with isolates Burkholderia RzW32, Curtobacterium RzW35, Enterobacter EndW37, Bacillus EndW48 and control. After 90 days of cultivation in a greenhouse, were evaluated for survival percentage, leaf area, number of roots, root length, dry matter of the root and shoot, rate of increase in leaf area index and increase in total dry mass. Curtobacterium sp. RzW35 and Burkholderia sp. RzW32 provided the lowest efficiency for growth while Bacillus sp. EndW48 and Enterobacter sp. EndW37 to encourage growth in all parameters investigated and may be recommended for growth and survival during ex vitro acclimatization of seedlings of Cattleya walkeriana.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Criopreservação, indução de poliploidia e avaliação da estabilidade genética de orquídeas

A criopreservação como forma de conservação em longo prazo de recursos genéticos e a poliploidização de orquídeas são importantes estratégias para o melhoramento genético destas plantas. Os objetivos gerais deste trabalho foram criopreservar e poliploidizar explantes de orquídeas com avaliação da estabilidade genética. Métodos criopreservantes baseados na vitrificação foram desenvolvidos para explantes de Dendrobium Swartz. híbrido ‗Dong Yai‘ e Oncidium flexuosum Sims. Sementes maduras de Dendrobium Swartz. híbrido foram criopreservadas em diferentes tempos de exposição à solução vitrificante de plantas 2 (PVS2) entre 0-6h a 0 °C e mergulhado em nitrogênio líquido durante 30 min. Após este período, as sementes foram recuperadas e colocadas para germinar em meio nutritivo MS com metade da concentração de sais (½ MS), incubadas em condições in vitro e avaliadas por meio da contagem de protocormos brotados após 30 dias. Os períodos de exposição à PVS2 entre 1-3h foram mais eficientes para a germinação do híbrido avaliado. Os protocormos desenvolveram plantas completas que foram aclimatizadas com sucesso em casa de vegetação. A análise de citometria de fluxo de plantas controles (não criopreservadas) e daquelas originadas de sementes vitrificadas não apresentou alteração no conteúdo de DNA total. Sementes maduras e protocormos brotados após 30 dias foram investigados para a vitrificação e vitrificação em gotículas, respectivamente, com a utilização dos aditivos floroglucinol e Supercool X1000. Sementes vitrificadas durante 1h com adição de 1% de floroglucinol resultou em 79% de germinação. Para protocormos, o pré-tratamento com sacarose 0,3M durante 24h seguido da exposição a solução PVS2 contendo 1% de floroglucinol por 15 min retornou 14% de sobrevivência após 75 dias de cultivo em condições in vitro. As plantas produzidas...Cryopreservation as a long-term conservation form of genetic resources and polyploidization of orchids are important strategies for genetic breeding. The aims of this work were to make cryopreservation and polyploidization of orchid explants, with genetic stability evaluation. Vitrification-based methods were developed for Dendrobium Swartz. hybrid ‗Dong Yai‘ and Oncidium flexuosum Sims explants. Mature seeds of Dendrobium Swartz. hybrid were cryopreserved in different time exposures to plant vitrification solution 2 (PVS2) for 0-6h at 0 °C and plungged into liquid nitrogen for 30 min. Later, seeds were recovered and germinated in halfstrength MS medium (½ MS), incubated in vitro and, after 30 days, germinated protocorms were evaluated. PVS2 time exposures between 1-3h were more efficient for the hybrid germination. Protocorms developed whole seedlings that were successfully acclimatized in greenhouse. Flow-cytometry analysis of seedlings from control (not cryopreserved) and those originated from vitrified seeds did not present any DNA total content difference. Mature seeds and 30-day-old protocormos were investigated for vitrification and droplet-vitrification, respectively, with cryoprotection additives phloroglucinol and Supercool X1000. Seeds vitified for 1h with 1% phloroglucinol resulted 79% germination. Protocorms pretreated with sucrose 0.3M for 24h and exposed to PVS2 with 1% phloroglucinol for 15 min returned 14% survival at 75 days after cultivation in vitro. Seedlings originated presented normal growth. For cryopreservation of Oncidium flexuosum Sims., mature seeds vitrified for 2h with PVS2 and 1% phloroglucinol presented germination extended in 68%. After 6 months in culture, there were no differences on seedlings growth in vitro and ex vitro for phenotypical characteristics. Comparative analysis of seedlings from control and cryopreserved using flow-cytometry indicated ..

Utilização de substratos alternativos ao xaxim para o crescimento de um híbrido de Cattleya Lindley (ORCHIDACEAE)

Este trabalho teve como objetivo avaliar substratos alternativos ao xaxim no cultivo do híbrido obtido de Cattleya Francis ‘Florália’ e Cattleya lueddemanniana var. semi alba

Influência do carvão ativado no crescimento inicial e na aclimatização de plântulas de <i>Caularthron</i> <i>bicornutum</i> (ORCHIDACEAE) germinadas <i>in</i> <i>vitro</i>

O objetivo do presente trabalho foi o de avaliar os efeitos de diferentes doses de carvão ativado no crescimento de plântulas germinadas in vitro e posterior sobrevivência em condições ex vitro de Caularthron bicornutum, espécie de orquídea nativa do Brasil e de grande interesse para produção comercial