Replicon-Helper Systems from Attenuated Venezuelan Equine Encephalitis Virus: Expression of Heterologous Genesin Vitroand Immunization against Heterologous Pathogensin Vivo

A replicon vaccine vector system was developed from an attenuated strain of Venezuelan equine encephalitis virus (VEE). The replicon RNA consists of the cis-acting 5' and 3' ends of the VEE genome, the complete nonstructural protein gene region, and the subgenomic 26S promoter. The genes encoding the VEE structural proteins were replaced with the influenza virus hemagglutinin (HA) or the Lassa virus nucleocapsid (N) gene, and upon transfection into eukaryotic cells by electroporation, these replicon RNAs directed the efficient, high-level synthesis of the HA or N proteins. For packaging of replicon RNAs into VEE replicon particles (VRP), the VEE capsid and glycoproteins were supplied in trans by expression from helper RNA(s) coelectroporated with the replicon. A number of different helper constructs, expressing the VEE structural proteins from a single or two separate helper RNAs, were derived from attenuated VEE strains Regeneration of infectious virus was not detected when replicons were packaged using a bipartite helper system encoding the VEE capsid protein and glycoproteins on two separate RNAs. Subcutaneous immunization of BALB/c mice with VRP expressing the influenza HA or Lassa virus N gene (HA-VRP or N-VRP, respectively) induced antibody responses to the expressed protein. After two inoculations of HA-VRP, complete protection against intranasal challenge with influenza was observed. Furthermore, sequential immunization of mice with two inoculations of N-VRP prior to two inoculations of HA-VRP induced an immune response to both HA and N equivalent to immunization with either VRP construct alone. Protection against influenza challenge was unaffected by previous N-VRP immunization. Therefore, the VEE replicon system was characterized by high-level expression of heterologous genes in cultured cells, little or no regeneration of plaque-forming virus particles, the capability for sequential immunization to multiple pathogens in the same host, and induction of protective immunity against a mucosal pathogen

Plasmid DNA initiates replication of yellow fever vaccine in vitro and elicits virus-specific immune response in mice

AbstractYellow fever (YF) causes an acute hemorrhagic fever disease in tropical Africa and Latin America. To develop a novel experimental YF vaccine, we applied iDNA infectious clone technology. The iDNA represents plasmid that encodes the full-length RNA genome of 17D vaccine downstream from a cytomegalovirus (CMV) promoter. The vaccine was designed to transcribe the full-length viral RNA and to launch 17D vaccine virus in vitro and in vivo. Transfection with 10ng of iDNA plasmid was sufficient to start replication of vaccine virus in vitro. Safety of the parental 17D and iDNA-derived 17D viruses was confirmed in AG129 mice deficient in receptors for IFN-α/β/γ. Finally, direct vaccination of BALB/c mice with a single 20μg dose of iDNA plasmid resulted in seroconversion and elicitation of virus-specific neutralizing antibodies in animals. We conclude that iDNA immunization approach combines characteristics of DNA and attenuated vaccines and represents a promising vaccination strategy for YF

Evaluation in Nonhuman Primates of Vaccines against Ebola Virus

Ebola virus (EBOV) causes acute hemorrhagic fever that is fatal in up to 90% of cases in both humans and nonhuman primates. No vaccines or treatments are available for human use. We evaluated the effects in nonhuman primates of vaccine strategies that had protected mice or guinea pigs from lethal EBOV infection. The following immunogens were used: RNA replicon particles derived from an attenuated strain of Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV) expressing EBOV glycoprotein and nucleoprotein; recombinant Vaccinia virus expressing EBOV glycoprotein; liposomes containing lipid A and inactivated EBOV; and a concentrated, inactivated whole-virion preparation. None of these strategies successfully protected nonhuman primates from robust challenge with EBOV. The disease observed in primates differed from that in rodents, suggesting that rodent models of EBOV may not predict the efficacy of candidate vaccines in primates and that protection of primates may require different mechanisms

Peculiarities of neurocognitive status of patients in the acute ischemic stroke phase of different hemispheric localization

The article considers the peculiarities of neurocognitive status in patients after acute ischemic stroke of different hemispheric localization. Left-sided hemispheric stroke revealed a higher frequency and higher degree of cognitive impairment (mean score for Mini Mental State Examination was 21.3±0.61, for Montreal Cognitive Assessment – 18.22±0.9) compared with right-sided hemispheric localization of ischemic focus (mean score for MMSE – 24.05±0.52, for MoCa – 21.35±0.84) with a statistically significant difference between groups of patients as a whole and by specific blocks of subtests. It was also found that right-sided hemispheric strokes were characterized by a higher frequency and higher degree of anxiety and depressive disorders (mean score for Beck Depression Inventoянишенry was 15.1±0.87, for the state anxiety scale – 37.6±1.71, for the trait anxiety scale – 36.55±1.73) compared with the left-sided hemispheric localization of acute cerebrovascular accident (mean score for BDI was 11.61±0.71, for the state anxiety scale – 29.78±0.95, for the on the Spielberger-Khanin trait anxiety scale – 30.87±1.0) with a statistically significant difference between the groups.У статті розглянуто особливості нейрокогнітивного статусу пацієнтів після перенесеного гострого ішемічного інсульту різної півкульової локалізації. При лівопівкульовому інсульті виявлено більшу частоту й вищий ступінь когнітивних порушень (середній балза Mini Mental State Examination 21,3±0,61, за Montreal Cognitive Assessment 18,22±0,9) порівняно з правопівкульовою локалізацією ішемічного вогнища (середній бал за MMSE 24,05±0,52, за MoCa 21,35±0,84) зі статистично значимою різницею між групами пацієнтів у цілому та за окремими блоками субтестів. Також виявлено, щодля правопівкульових інсультів характерна більша частота вищий ступінь тривожно-депресивних порушень (середній бал за Beck Depression Inventory 15,1±0,87, за шкалою реактивної тривожності 37,6±1,71 та 36,55±1,73 за шкалою особистісної тривожності) порівняно з лівопівкульовою локалізацією гострого порушення мозкового кровообігу (середній бал за BDI 11,61±0,71, за шкалою реактивної тривожності 29,78±0,95 та 30,87±1,0 за шкалою особистісної тривожності Спілбергера-Ханіна) зі статистично значимою різницею між групами

Modern aspects in the paradigm of acute hemispheric ischemic stroke: features of clinical presentation, screening, therapeutic and neurorehabilitation prospects

The paper presents a literature review in order to identify modern information and deepen understanding of the problem of ischemic stroke, its hemispheric features, modern screening capabilities, therapeutic and rehabilitation prospects. Cerebral stroke is a «global epidemic» that occupies a leading place in the structure of the causes of disability in the adult population in most countries of the world, and has great medical, social and economic importance. In the clinical presentation of cerebral ischemic hemispheric stroke, focal neurological deficit prevails, as well as cognitive and anxiety-depressive disorders of varying severity, post-stroke fatigue syndrome, etc. Localization of the ischemic focus plays a significant role in the development of cognitive impairment. The analysis of neurocognitive functions has long been a topical subject of study by scientists and practicing physicians. Emergency screening of acute cerebrovascular accident is an important factor in choosing the patient’s treatment strategy. Stroke is a condition requiring emergency medical care and urgent hospitalization. The effectiveness of medical care provision for acute cerebral ischemic stroke at the hospital stage should be ensured by specialists of the multidisciplinary team according to the patient’s specific clinical route, the volume of diagnostic and treatment and rehabilitation measures. These studies are relevant, and the obtained results can be used in the practical activities of the clinician in order to deepen the understanding of the problem, optimize the timely verification of this pathology and use the optimal treatment and rehabilitation tactics.В роботі представлений огляд літератури з метою виявлення сучасної інформації та поглиблення розуміння проблеми ішемічного інсульту, його півкульових особливостей, сучасних можливостей скринінгу, терапевтичних та реабілітаційних перспектив.Церебральний інсульт – «глобальна епідемія», яка займає провідне місце в структурі причин інвалідизації дорослого населення більшості країн світу, має велике медико-соціальне й економічне значен-ня. Поширеність інсультів в Україні – одна з найвищих у Європі. У клінічній картині мозкового ішемічного півкульового інсульту переважає вогнищевий неврологічний дефіцит, найпоширенішим із якого є різного ступеня вираженості пірамідний синдром за гемітипом. Також півкульові інсульти характеризуються порушеннями мови та мовлення, зокрема, при ураженні лівої гемісфери характерними є афатичні розлади, а при ураженні правої гемісфери – дизартрія, як і розлади чутливості, які теж спостерігаються, головним чином, при правопівкульових процесах. Крім вогнищевого неврологічного дефіциту при гемісферних інсультах також особливо актуальними є різного ступеня вираженості когнітивні й тривожно-депресивні порушення. Чільне місце в перебігові постінсультного періоду також посідає синдром постінсультної втоми. Значну роль у роз-витку когнітивних порушень відіграє локалізація ішемічного вогнища. Як правило, постінсультні когнітивні порушення поєднуються з іншими психоемоційними розладами й неврологічними симптомами, утворюю-чи постінсультний нейрокогнітивний дефіцит. Аналіз нейрокогнітивних функцій тривало залишається акту-альним предметом вивчення науковців та практикуючих лікарів. Невідкладний скринінг гострого порушен-ня мозкового кровообігу – важливий фактор для вибору тактики лікування пацієнта. Тому з діагностичною метою проводять нейровізуалізацію, зокрема комп’ютерну томографію або магнітно-резонансну томографію – методи, які дозволяють провести ранню диференційну діагностику та визначення типу інсульту (ішемічний чи геморагічний). На сьогодні продовжується вивчення переваг і відмінностей застосування різних методів нейровізуалізації в найгостріший та гострий період мозкового ішемічного інсульту. Інсульт – стан, що потребує надання екстреної медичної допомоги та термінової госпіталізації. Ефективність надання медичної допомоги при гострому мозковому ішемічному інсульті на госпітальному етапі має забезпечуватися фахівцями мультидисциплінарної команди згідно з визначеним клінічним маршрутом пацієнта, обсягом діагностичних і лікувально-реабілітаційних заходів. Пацієнти з інсультом потребують динамічного контролю вітальних функцій, а також ряду лабораторно-інструментального обстеження.Дані дослідження є актуальними, а отримані результати можна буде використати в практичній діяльності клініциста з метою поглиблення розуміння проблеми, оптимізації своєчасної верифікації даної патології та застосування оптимальної лікувально-реабілітаційної тактики

Досвід використання арипіпразолу у комплексному лікуванні ПТСР внаслідок війни в Україні

Background. Our country fully felt all the incomprehensibility and fragility of the modern world since the beginning of the anti-terrorist operation in the east of Ukraine, later, together with the rest of the world, experiencing the COViD-19 pandemic with all its harmful consequences, and finally experiencing a treacherous attack by a neighboring state, which until recently positioned itself as a "brother" . It is clear that all this had a significant impact on the general anxiety, fear of the future, lack of confidence in the country's population as a whole, exposing large segments of the population to an increased risk of developing post-traumatic stress disorder associated with being in a combat zone, among military personnel and war veterans. among forced migrants, among those who were subjected to violence and torture. Receiving effective treatment is critical to reducing the symptoms of the disorder and improving functioning. Current treatment options for PTSD include both psychological and pharmacological interventions. Since we are now faced with a large influx of patients with post-traumatic stress disorders, both as a result of combat stress and other massive stressful effects, we need to review the approaches to the treatment of such patients and choose the most effective and accessible to the majority of specialists. Of course, the effectiveness of trauma-focused psychotherapy methods is difficult to overestimate, and most of our specialists have completed or are undergoing training in their implementation. But one should not forget about the large arsenal of available and effective medicinal agents that can effectively prepare the patient for psychotherapeutic treatment or serve as an augmentation of psychotherapy. Objectives. The aim of our work was to study the effectiveness of the atypical antipsychotic aripiprazole in the complex therapy of PTSD and mechanisms of its influence on various clusters of PTSD, as well as comorbid disorders. Matherials and methods. An analysis of the literature on the effectiveness of various methods of PTSD therapy, including chronic complex PTSD and PTSD with comorbid mental disorders and addictions, was performed. Our own clinical studies of patients with PTSD who underwent inpatient and outpatient treatment at the checkpoint "Prykarpattia Regional Clinical Center of Mental Health of the Ivano-Frankivsk Regional Council" and the first volunteer surgical hospital of the "BRASS" clinic were conducted. The group consisted mainly of men aged 21 to 45 years with military-related PTSD verified by current diagnostic criteria. The examination was carried out by the clinical-psychopathological method and with the help of psychodiagnostic methods: the scale for the clinical diagnosis of PTSD (Clinically-administered PTSD Scale - CAPS); Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS); DES dissociative experience scale; R. Lazarus' "Psychological diagnosis of coping behavior strategy"; Quality of life assessment scale (Chaban O.S., 2008) and others. The follow-up method was also used to evaluate the results of the comprehensive treatment program. Please note that this article is a preliminary report, the statistically processed results of the study will be reported in our next publications. Results.  Aripiprazole can be considered one of the most promising antipsychotic agents for the treatment of PTSD in a complex approach along with psychotherapy, and in some cases - as monotherapy, given its wide spectrum of action and minimal side effects. The key to successful treatment is the creation of a trusting partner relationship with the patient when prescribing drug treatment. Patient psychoeducation regarding side effects, required dosages, duration of treatment, and compliance can significantly improve outcomes. Side effects should be considered and discussed, and the risks and benefits of further treatment should be weighed. It is important to discuss response to treatment and to coordinate efforts. It is important for the doctor to have a constant dialogue with the patient about the effect of the medication and the presence of side effects. It is also important for the patient to take an active part in the treatment and not to feel like a passive recipient of medication to relieve symptoms. Conclusions.  Of course, trauma-focused psychotherapy is the main method of PTSD therapy and in cases of fresh uncomplicated PTSD can be the only method of treatment.  Taking into account the fact that already now we are increasingly faced with complex PTSD with psychotic dissociative symptoms, massive disorders of the affective sphere and expecting an increase in precisely such cases in the future, we understand that in such cases psychotherapy may be ineffective or not effective at all unattainable. At the moment, PTSD psychopharmacotherapy mainly focuses on SSRI/H antidepressants, adrenoblockers and short courses of benzodiazepines.  Previous attempts at antipsychotic psychopharmacotherapy of PTSD were mainly focused on groups of "dons" and "pins", whose side effects (sedation, cardio-metabolic, dyskinetic) became an obstacle to successful treatment.  The antipsychotic of the new "doublepipe-rip" group - aripiprazole shows the effectiveness of its effect on all clusters of PTSD: intrusive, avoidant, hyperactivation, in addition, it demonstrates its effectiveness in the treatment of CPTSD and disorders comorbid with PTSD, which is proven by many studies and practical experience.  It makes sense to take a closer look at the place of antipsychotic medication in the treatment of PTSD, taking into account the features of aripiprazole and possibly other newer antipsychotics, and consider them as an effective means for augmentation, and sometimes monotherapy in the treatment of PTSD and CPTSD.Актуальність. Наша країна повною мірою відчула всю незбагненність і крихкість сучасного світу з початком антитерористичної операції на сході України, згодом разом з усім світом переживаючи пандемію COVID-19 з усіма її згубними наслідками, і врешті зазнавши віроломного нападу сусідньої держави, яка донедавна позиціонувала себе як «братня». Зрозуміло, що все це суттєво вплинуло на загальну тривожність, страх перед майбутнім, відсутність довіри населення країни в цілому, піддавши великі верстви населення підвищеному ризику розвитку посттравматичного стресового розладу, пов’язаного з перебування в зоні бойових дій, серед військовослужбовців та ветеранів війни. серед вимушених переселенців, серед тих, хто зазнав насильства та тортур. Отримання ефективного лікування має вирішальне значення для зменшення симптомів розладу та покращення функціонування. Сучасні варіанти лікування ПТСР включають як психологічні, так і фармакологічні втручання. Оскільки зараз ми маємо великий наплив пацієнтів із посттравматичними стресовими розладами, як внаслідок бойового стресу, так і інших масових стресових впливів, необхідно переглянути підходи до лікування таких пацієнтів та обрати найбільш ефективні та доступні. більшості спеціалістів. Звичайно, ефективність травма-фокусованих психотерапевтичних методів важко переоцінити, і більшість наших фахівців пройшли або проходять навчання їх застосуванню. Але не слід забувати про великий арсенал доступних і ефективних лікарських засобів, які можуть ефективно підготувати пацієнта до психотерапевтичного лікування або служити доповненням до психотерапії. Мета. Метою нашої роботи було вивчення ефективності атипового антипсихотика арипіпразолу в комплексній терапії ПТСР та механізмів його впливу на різні кластери ПТСР, а також коморбідні розлади. Матеріали та методи. Зроблено аналіз літератури з питання ефективності різних методів терапії ПТСР, включаючи хронічний комплексний ПТСР та ПТСР з коморбідними психічними розладами і аддикціями. Проводяться власні клінічні дослідження пацієнтів з ПТСР,  що проходять стаціонарне і амбулаторне лікування в КПП «Прикарпатський обласний клінічний центр психічного здоров’я Івано-Франківської обласної ради» та першому добровольчому хірургічному шпиталі клініки «БРАСС». Групу складали переважно чоловіки у віці від 21 до 45 років з ПТСР, пов’язаним із військовими діями та верифікованим за сучасними діагностичними критеріями. Обстеження здійснювалось клініко-психопатологічним методом та за допомогою психодіагностичних методик: шкала для клінічної діагностики ПТСР (Clinical-administered PTSD Scale - CAPS); госпітальна шкала тривоги та депресії (HADS); шкала дисоціативного досвіду DES; методика «Психологічна діагностика стратегії долаючої поведінки» Р. Лазаруса; шкала оцінки якості життя (Чабан О.С., 2008) та ін. Для оцінки результатів проведеної комплексної програми лікування застосовувався також катамнестичний метод. Зауважимо, що дана стаття є попереднім повідомленням, статистично оброблені результати дослідження будуть повідомлені у наступних наших публікаціях. Результати. Арипіпразол можна вважати одним із найперспективніших антипсихотичних засобів для лікування посттравматичних стресових розладів у комплексному підході поряд із психотерапією, а в окремих випадках – і як монотерапія, враховуючи його широкий спектр дії та мінімум побічних ефектів. Запорукою успішного лікування є створення довірчих партнерських відносин з пацієнтом при призначенні медикаментозного лікування. Психологічна підготовка пацієнтів щодо побічних ефектів, необхідних доз, тривалості лікування та комплаєнсу може значно покращити результати. Необхідно враховувати та обговорювати побічні ефекти, а також зважувати ризики та переваги подальшого лікування. Важливо обговорити відповідь на лікування та скоординувати зусилля. Лікарю важливо вести постійний діалог з пацієнтом про дію ліків і наявність побічних ефектів. Також важливо, щоб пацієнт брав активну участь у лікуванні, а не відчував себе пасивним одержувачем ліків для полегшення симптомів. Висновки. Звичайно, травма-фокусована психотерапія є основним методом терапії ПТСР, а у випадках свіжого неускладненого ПТСР може бути єдиним методом лікування. Враховуючи той факт, що вже зараз ми все частіше стикаємося зі складним ПТСР із психотичними диссоціативними симптомами, масивними розладами афективної сфери та очікуючи збільшення саме таких випадків у майбутньому, ми розуміємо, що в таких випадках психотерапія може бути неефективною чи ні. ефективний взагалі недосяжний. На даний момент психофармакотерапія посттравматичних стресових розладів зосереджена в основному на антидепресантах SSRI/H, адреноблокаторах і коротких курсах бензодіазепінів. Попередні спроби антипсихотичної психофармакотерапії посттравматичних стресових розладів були зосереджені переважно на групах «донів» і «пінів», чиї побічні ефекти (седативний, кардіометаболічний, дискінетичний) ставали перешкодою для успішного лікування. Антипсихотик нової групи «doublepipe-rip» – арипіпразол демонструє ефективність впливу на всі кластери ПТСР: інтрузивний, уникаючий, гіперактиваційний, крім того, демонструє ефективність у лікуванні ХПТСР та коморбідних із ПТСР розладів, які підтверджено багатьма дослідженнями та практичним досвідом. Є сенс уважніше придивитися до місця антипсихотичних препаратів в лікуванні ПТСР, враховуючи особливості  арипіпразолу та можливо інших новітніх антипсиотиків, і розглядати іх як ефективний засіб для аугментації, а іноді й монотерапії в лікуванні ПТСР і КПТСР

Recommendations for improving the hospital’s marketing policy

This article summarizes the arguments and counterarguments within the scientific discussion on improving the marketing policy of the clinic. The purpose of the study is to improve the marketing policy of the clinic. The urgency of solving the scientific problem lies in need to promote medical services, where marketing activities contribute to establishing relations between providers and consumers of medical services

Cross-Clade Protective Immune Responses to Influenza Viruses with H5N1 HA and NA Elicited by an Influenza Virus-Like Particle

Background. Vaccination is a cost-effective counter-measure to the threat of seasonal or pandemic outbreaks of influenza. To address the need for improved influenza vaccines and alternatives to egg-based manufacturing, we have engineered an influenza virus-like particle (VLP) as a new generation of non-egg or non-mammalian cell culture-based candidate vaccine. Methodology/Principal Findings. We generated from a baculovirus expression system using insect cells, a non-infectious recombinant VLP vaccine from both influenza A H5N1 clade 1 and clade 2 isolates with pandemic potential. VLPs were administered to mice in either a one-dose or two-dose regimen and the immune responses were compared to those induced by recombinant hemagglutinin (rHA). Both humoral and cellular responses were analyzed. Mice vaccinated with VLPs were protected against challenge with lethal reassortant viruses expressing the H5N1 HA and NA, regardless if the H5N1 clade was homologous or heterologous to the vaccine. However, rHA-vaccinated mice showed considerable weight loss and death following challenge with the heterovariant clade virus. Protection against death induced by VLPs was independent of the pre-challenge HAI titer or cell-mediated responses to HA or M1 since vaccinated mice, with low to undetectable cross-clacle HAI antibodies or cellular responses to influenza antigens, were still protected from a lethal viral challenge. However, an apparent association rate of antibody binding to HA correlated with protection and was enhanced using VLPs, particularly when delivered intranasally, compared to rHA vaccines. Conclusion/Significance. This is the first report describing the use of an H5N1 VLP vaccine created from a clade 2 isolate. The results show that a non-replicating virus-like particle is effective at eliciting a broadened, cross-clade protective immune response to proteins from emerging H5N1 influenza isolates giving rise to a potential pandemic influenza vaccine candidate for humans that can be stockpiled for use in the event of an outbreak of H5N1 influenza