NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN INSULIN NGƯỜI Ở E. coli

SUMMARYInsulin is a hormone that produced by beta cells in the pancreas and regulated the glucose blood levels. Briefly, our strategy for the gene construction and expresion is described as follow. pET14bInsA vector contained gene A that encoding for the A peptide chain and pET14bInsB vector contained gene B that encoding for the B peptide chain. These vectors and the expression pET-32c(+) vector were digested by NcoI and BamHI. The released insulin A/B fragment and the opened plasmid pET-32c(+) were purified and ligated by T4 DNA ligase at 22oC, overnight. The resulting recombinant plasmid pET32cInsA/B was transformed into the E. coli BL21(DE3) strain. The expression of the  fusion protein was observed by induction with 1 mM IPTG and analysed by SDS-PAGE. Two new protein bands with the size of aproximately 22 kDa (equvalent the size  equvalent the size of fusion A) and 23 kDa (the size of fusion B) were then excised and digested with trypsin overnight. The results of identifying by NanoLC-MS/MS (Nano Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry) showed that the recombinant protein was truely the fusion A(B)-Trx that contained different peptides from chain A/B and thioredoxin. This result is an evidence to confirm the successful construction and expression of chain A/B of insulin in the fusion form in E. coli with pET-32c(+) vector.Key words. Insulin; pET-32 c(+); E. coli BL21 (DE3); NanoLC-MS/MS1. ĐẶT VẤN ĐỀInsulin là một hormone quan trọng có vai trò điều hòa đường huyết do các tế bào beta trong đảo Langerhans của tuyến tụy sản xuất [9]. Hàm lượng đường (glucose) trong máu là nguồn năng lượng thiết yếu cho cơ thể, nếu không duy trì ở mức bình thường có thể gây ra những căn bệnh nguy hiểm [3]. Khi đường huyết tăng có thể gây ra sự bài tiết đường qua nước tiểu, dẫn đến mất/thiếu hụt glucose, hiện tượng này còn gọi là bệnh đái tháo đường [7, 5]. Nguyên nhân là do sự thiếu hụt insulin hoặc vì một lí do nào đó cơ thể không thể sử dụng được insulin dẫn đến đường huyết tăng cao và gây đái tháo đường [8]. Bệnh đái tháo đường được chia làm hai loại là type I và type II [10]. Đái tháo đường type I là loại bệnh phụ thuộc insulin, thường gặp ở người trẻ tuổi ( 35 tuổi), lứa tuổi hay gặp nhất là 10 - 16 tuổi. Đây là một dạng bệnh nặng trong đó các tế bào của tuyến tụy có nhiệm vụ tiết insulin bị khiếm khuyết nên cơ thể không có insulin để sử dụng. Nếu không điều trị bằng cách tiêm insulin, bệnh nhân sẽ hôn mê và tử vong [8]. Đái tháo đường type II là loại đái tháo đường không phụ thuộc insulin, bệnh thường gặp ở người               40 tuổi, người béo phì, trong đó cơ thể vẫn sản xuất insulin nhưng vì một lí do nào đó không thể sử dụng được nó [4].Về cấu trúc, ở người phân tử insulin bao gồm hai chuỗi polypeptide: chuỗi A gồm 21 axit amin và chuỗi B gồm 30 axit amin [1, 2]. Hai cầu nối disulfide (vị trí A7 - B7, và A20 - B19) đồng hóa trị như hai sợi dây buộc chặt hai chuỗi với nhau, trong chuỗi A còn có một cầu nối disulfide giữa gốc A6 và A11 đảm bảo phân tử khá ổn định trong không gian. Đặc biệt là cả 3 cầu nối này đều bất biến ở tất cả các dạng insulin của động vật.Hiện nay, tình hình phát triển bệnh đái tháo đường ở Việt Nam cũng như trên thế giới đang có xu hướng tăng nhanh. Insulin là hormon đầu tiên được tổng hợp nhân tạo, được sản xuất bằng công nghệ DNA tái tổ hợp phục vụ điều trị bệnh này [14]. Năm 2005, nhu cầu insulin dùng trong trị bệnh đái tháo đường ước tính khoảng 4 đến 5 tấn và dự kiến năm 2010 là 16 tấn [12]. Nhu cầu về insulin của thế giới vượt qua con số vài tấn/năm và vì thế nguồn cung cấp insulin cho trị bệnh tiểu đường đang ngày càng thiếu hụt [13]. Trong bài báo này, chúng tôi trình bày một số kết quả nghiên cứu biểu hiện và xác định insulin người từ vector pET 32c (+).Từ khoá: Insulin; pET-32 c(+); E. coli BL21 (DE3); NanoLC-MS/M

Nghiên cứu từ vựng tiếng Việt với hệ thống sketch engine

The Sketch Engine is a corpus query system based on grammatical relations of a language. This system has been widely used in lexicography, particularly for building dictionaries of different languages such as English, Japanese, Chinese etc. This paper presents an approach to applying the Sketch Engine to Vietnamese in which a method for building corpus and fundamental grammatical relations for Vietnamese has been proposed.Skech Engine là một hệ thống cho phép truy vấn kho ngữ liệu dựa vào tập quan hệ ngữ pháp của một ngôn ngữ nào đó, phục vụ cho việc nghiên cứu từ vựng học. Hệ thống này đã được sử dụng cho nghiên cứu từ vựng, đặc biệt là xây dựng từ điển của nhiều ngôn ngữ (Anh, Tiệp, Nhật, Trung,...). Bài báo này sẽ giới thiệu hệ thống Sketch Engine và nghiên cứu triển khai hệ thống này cho tiếng Việt. Chúng tôi cũng trình bày cách thức xây dựng kho ngữ liệu và tập các quan hệ ngữ pháp cơ bản tiếng Việt để phục vụ cho hệ thống truy vấn kho ngữ liệu trong Sketch Engine

NGHIÊN CỨU CHỦNG XẠ KHUẨN HLD 3.16 CÓ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN PHÂN LẬP TỪ VÙNG VEN BỜ BIỂN VIỆT NAM

Chủng xạ khuẩn HLD 3.16 được phân lập từ các mẫu nước, bùn và đất thu thập ở vùng ven biển Hạ Long – Quảng Ninh và được phân loại thuộc chi Streptomyces. Qua xác định các đặc điểm hình thái, sinh hóa và sinh lí của chủng HLD 3.16 cho thấy, chủng này có nhiều điểm tương đồng với  loài Streptomyces autotrophicus. Chủng HLD 3.16 có khả năng sinh một số enzyme ngoại bào như: amylase, cellulase và protease. Chủng có hoạt tính kháng khuẩn ức chế các vi khuẩn Bacillus subtilis ATCC 6633, Sarcina lutea M5, Bacillus cereus var. mycoides ATCC 11778, Escherichia coli ATCC 15224, Escherichia coli PA2, Alcaligenes faecallis, Salmonella typhy IFO14193, Pseudomonas auroginosa và hoạt tính kháng nấm Candida albicans ATCC 12031, Aspergillus niger 114. Môi trường thích hợp cho lên men sinh tổng hợp chất kháng khuẩn có thành phần (g/l): tinh bột tan 15; glucose 2,5; pepton 4; (NH4) 2SO4 2,5; CaCO3 2. Điều kiện thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng khuẩn từ chủng HLD 3,16 đã được xác định: pH 7,0 - 7,5, nhiệt độ 30 oC, giống bổ sung 4,0 % (v/v), thể tích môi trường/thể tích bình nuôi là 10 % (v/v), thời điểm thích hợp để thu hồi chất kháng sinh là sau 108 giờ lên men. Dịch sau lên men được chiết bằng n- butanol và 2-butanon cho chất kháng khuẩn có phổ hấp phụ UV lớn nhất tương ứng tại bước sóng 220, 260 và 258 nm