Efecto de los glucocorticoides in utero sobre las proteínas apoptóticas y de ciclo celular en el testículo de ovinos. Immunoexpresión de las proteínas Caspasa-3, Bax, Bcl-2 y PCNA durante el desarrollo testicular pre y postnatal tras la administración de betametasona durante la gestación

El concepto de “programación fetal” propone que un estímulo o insulto que actúe durante un periodo crítico del desarrollo intrauterino puede alterar permanentemente la estructura y función de un determinado órgano o sistema. Los efectos de la programación están dados por el momento de la exposición y del desarrollo de órganos. El término “programación fetal” surge para explicar las asociaciones entre el bajo peso al nacimiento y los trastornos posteriores por ejemplo enfermedades cardiovasculares, neuroendocrinas y metabólicas posteriores en la vida. En este sentido el estrés prenatal o un exceso de glucocorticoides tanto endógenos como exógenos durante la vida fetal han sido estudiados como factores de programación incrementando la predisposición a enfermedades cardiovasculares y metabólicas postnatales. Sin embargo, el tratamiento prenatal con glucocorticoides se utiliza en mujeres gestantes con riesgo de parto prematuro para inducir la maduración fetal. A pesar de los efectos positivos, los glucocorticoides administrados en ese momento pueden producir efectos deletéreos en el testículo en la vida adulta. Nuestra hipótesis sugiere que los glucocorticoides in utero producen cambios estructurales a nivel del testículo. Por lo tanto, en el presente trabajo se estudió la acción de los glucocorticoides prenatales sobre el desarrollo del testículo pre y postnatal en ovinos. Ovejas preñadas de raza Merino Australiano (n = 42) con un solo feto macho, fueron asignadas al azar para recibir inyecciones intramusculares de solución salina o betametasona (0,5 mg / kg) a los 104, 111 y 118 días de gestación (DG). Las crías macho fueron pesadas y luego sacrificadas a los 121 y 132 DG, y a los 45 y 90 días postnatales (PD) y sus testículos de fueron disecados, pesados y fijados en solución fijadora de Bouin y procesados para estudios morfológicos e inmunohistoquímicos. Se capturaron imágenes digitales a partir de las cuales se realizó el análisis morfométrico cuantitativo (volumen de cordones sexuales e intersticio testicular, diámetro de los cordones sexuales) y análisis inmunohistoquímico (% de inmunomarcación) para activa caspasa-3 activa, Bax, Bcl-2 y proteínas del ciclo celular (PCNA). El diámetro de los cordones sexuales a los 121 DG, 45 y 90 PD, disminuyó en los animales tratados con betametasona comparados con sus respectivos controles y disminuyó el volumen de los cordones sexuales y el volumen absoluto del intersticio a los 90 PD. La expresión de la proteína caspasa-3 activa disminuyó en los tratados con betametasona a los 121 DG y 90 PD. La expresión de la proteína Bax aumento en todos animales tratados con betametasona pre y posnatales. La expresión de las proteínas Bcl-2 y PCNA fue menor en los animales tratados con betametasona a los 121 DG y 45 PD, pero aumentó a los 132 DG y 90 PD, comparando con los controles. En conclusión, los resultados obtenidos indican que la administración prenatal de altos niveles de glucocorticoides reduce el desarrollo testicular, a través de cambios morfológicos y en el balance entre proteínas pro- y anti-apoptóticas y de ciclo celular. Estos resultados podrían sugerir un compromiso en el potencial espermatogénico futuro de la progenie

Granuloma micótico nasal bovino

A case of mycotic bovine nasal granuloma in a 10 year-old Jersey cow, produced by Drechslera halodes is presented. Histopathological sections showed abundant hyaline and pigmented extra and intracellular fungal structures together with a polymorphic cellular granuloma formed by neutrophils, lymphocytes, plasmocytes, histiocytes and giant cells of the Langhans type. It is the first case of mycotic bovine nasal granuloma recognized in Uruguay although this disease seems to be frequent according to the opinion of veterinarian specialists. Another similar clinical case also in a Jersey cow from the same dairy house with an intense cellular infiltrate rich in eosinophils without granulomatous image, together with extracellular hyaline and fuliginous fungal forms, is also referred for comparative purposes. Geotrichum sp. was isolated. The need of an early diagnosis and treatment of the disease is stressed.É apresentado caso de granuloma micótico nasal bovino, em vaca Jersey, com 10 anos de idade, produzido por Drechslera halodes. Cortes histopatológicos mostraram abundantes estruturas fúngicas hialinas e pigmentadas extra e intracelulares junto com granuloma polimorfo celular formado por neutrófilos, linfócitos, plasmócitos, histiócitos e células gigantes de Langhans. É o primeiro caso de granuloma micótico nasal bovino diagnosticado no Uruguai embora esta doença pareça ser freqüente de acordo com a opinião de veterinários especializados. Outro caso clínico semelhante, também em vaca Jersey da mesma fazenda de criação de gado leiteiro, com intenso infiltrado celular rico em eosinófilos, sem imagem granulomatosa, junto com formas fúngicas fuliginosas hialinas extra celulares é também relatado para fins de comparação. Geotrichum sp. foi isolado. A necessidade de diagnóstico precoce e tratamento da doença é enfatizada

Increased caspase-3 immunoexpression and morphology alterations in oenocytes and trophocytes of Apis mellifera larvae induced by toxic secretion of Epormenis cestri

Toxic honeydew produced by Flatidae Epormenis cestri in Uruguay has been shown to cause among honeybees (Apis mellifera) colonies a massive larva death called “River disease”, but the intrinsic mechanisms are still unknown. Because fat body cells, oenocytes and trophocytes, are known to regulated larvae metabolism, and to be affected by xenobiotics, we tested whether apoptosis of these cells can be an underlying cause of larvae death. Ten colonies were divided into two groups and fed with common honey or toxic honeydew obtained from colonies affected by “River disease”. Five-day-old larvae were collected and processed for histology and immunohistochemistry for caspase-3. The area, diameter, and immunostaining area in oenocytes and trophocytes were measured. The oenocyte and trophocyte cellular area decreased in the treated group (p=0.002; p<0.001 respectively) compared to the control group. The diameter of oenocytes (p=0.0002) and trophocytes (p<0.0001) decreased in the treated group. Caspase-3 was detected in cytoplasm in the control group but in the cytoplasm and nucleus in the treated group. The caspase-3 immunostaining area increased in oenocytes (p<0.002) and trophocytes (p<0.0001) of the treated group. The ingestion of toxic honeydew altered the morphology, localization and immunoexpression of caspase-3 in fat body cells, which suggests that the deregulation of the apoptotic mechanism affected the normal development in A. mellifera larvae

Impacto de la subnutrición materna durante la preñez y la lactancia en los testículos de ratas adultas: mecanismos reguladores hipofisarios e intra-testiculares, factores de transcripción y de crecimiento, proteínas de shock térmico y apoptóticas

La subnutrición materna disminuye la producción de espermatozoides de las crías cuando sean adultas. Sin embargo, los mecanismos intrínsecos que median dichas alteraciones no han sido aún dilucidados. Entre los posibles candidatos a mediar los efectos de la programación fetal se encuentran los factores de transcripción y factores de crecimiento producidos por las células de Sertoli. Por lo tanto, testeamos la hipótesis que la subnutrición materna afecta los factores de transcripción GDNF y ETV5 y de crecimiento IGF-I producidos por las células de Sertoli involucrados en la programación a largo plazo del testículo de las crías adultas. Para ello se analizaron los testículos de ratas adultas cuyas madres fueron subnutridas durante la preñez y/o lactancia. Se determinó la concentración de hormona FSH e inhibina en el suero. A nivel testicular se cuantificó la expresión de los transcriptos de receptores de IGFR1 y la inmunoexpresión de la proteína IGF-I. Se realizaron análisis morfométricos, diámetro de túbulos seminíferos, número de células de Sertoli y la frecuencia de estadios del ciclo espermatogénico en los túbulos seminíferos. Se analizó la inmunoexpresión de IGF-I y de GDNF y ETV5 en los testículos. Además, se analizaron la inmunoexpresión de proteínas de shock térmico HSP90, HSP70 y el factor de transcripción HSF1, proteínas de proliferación celular Ki-67, las proteínas apoptóticas Bcl-2, caspasa-3 y Bax y su expresión de ARN y la enzima esteroidogénica 3 β-HSD. La subnutrición materna afectó las hormonas séricas FSH, inhibina, así como la expresión ARN de receptores a IGF-I y de caspasa 3 en los testículos. Además, la subnutrición materna disminuyó la frecuencia del estadio VII del ciclo espermatogénico, por ende, la espermatogénesis. Además, la subnutrición materna durante la preñez y la lactancia aumentó inmunoexpresión de IGF-I, GDNF y ETV5que regulan la auto-renovación de células madre espermatogenia, sugiriendo un mecanismo compensatorio contra el daño por subnutrición. Por lo tanto, la subnutrición materna afectó a largo plazo los factores de transcripción y de crecimiento producidos por las células de Sertoli, asó como las proteínas protectoras y apoptóticas, con consecuencias en los estadios del ciclo del epitelio seminífero, por ende, en la espermatogénesis y la fertilidad de la descendencia adulta

An immunohistochemical study on the regulation of estrogen receptor α\alpha by estradiol in the endometrium of the immature ewe

The effects of estradiol-17$\beta$ (E2) on the expression of estrogen receptor $\alpha$ (ER$\alpha$) in stromal and epithelial cells of endometrium in prepubertal lambs were investigated. Twenty three-month-old lambs were treated or not treated with one, two or three i.m. injections of E2 (1 $\mu$g$\cdot$kg$^{-1}$) in corn oil at intervals of 24 h. Lambs were slaughtered 12 or 24 h after the last injection. An immunohistochemical technique was used to visualize ER$\alpha$ immunostaining which was then analyzed quantitatively by a computer imaging analysis system. Seven endometrial compartments defined by cell type and location were analyzed separately. Positive staining of ER$\alpha$ was seen in the nuclei of stromal and epithelial cells. Glandular epithelium located next to the myometrium was stained more intensely than that next to the luminal epithelium and this phenomenon was maintained during treatment. Significantly less immunostaining was found in stromal cells 12 and 24 h after the first injection compared to the control group. A similar pattern was found in the glandular epithelium, although the decrease was more pronounced and the restoration of ER$\alpha$ was faster. This study shows that E2 treatment down regulates ER$\alpha$ in the endometrium temporarily in both stromal and epithelial cells, but the characteristics of this effect seems to be cell type specific.Étude immuno-cytologique de la régulation du récepteur aux œstrogènes ER$\alpha$ par l'œstradiol dans l'endomètre de la brebis impubère. Les effets de l'œstradiol-17$\beta$ (E2) ont été étudiés sur l'expression du récepteur aux œstrogènes ERa dans les cellules du stroma et de l'épithélium de l'endomètre chez la brebis impubère. Vingt agnelles âgées de 3 mois ont reçu ou non une, deux ou trois administrations intramusculaires de E2 (1 $\mu$g$\cdot$kg$^{-1}$ en solution huileuse) à intervalle de 24 h. Elles ont été sacrifiées 12 ou 24 h après la dernière injection. ER$\alpha$ a été mis en évidence par immuno-cytologie et sa quantification a été faite à l'aide d'un système d'analyse d'images. Sept compartiments de l'endomètre, définis par leur type cellulaire et leur localisation, ont été analysés séparément. Un marquage positif a été constaté dans les noyaux des cellules du stroma et de l'épithélium. L'épithélium glandulaire situé prés du myomètre est marqué plus intensément que celui qui borde la lumière utérine et ce phénomène est encore observé à la suite des traitements. Un marquage significativement plus faible est constaté dans les cellules du stroma 12 et 24 h après la première injection par comparaison aux témoins. Une réponse identique est vue dans l'épithélium glandulaire bien que la diminution de marquage ait été plus prononcée et la restauration de ER$\alpha$ plus rapide. Cette étude montre que E2 régule négativement les récepteurs ER$\alpha$ de l'endomètre dans les cellules du stroma et de l'épithélium et cet effet semble être spécifique du type cellulaire