Competence to restart meiosis of oocytes from different follicle sizes obtained from slaughterhouse ovaries

Se evaluó la capacidad de los ovocitos de folículos según su tamaño para reiniciar la meiosis. Los folículos se midieron y clasificaron como Grupo 1 (G1 <4 mm), Grupo 2 (G2 4-8 mm) y Grupo 3 (G3 >8 mm). La aspiración se realizó por grupo con una aguja 21G conectada a una bomba de vacío, con una presión de 65 mmHg. Los complejos cúmulos de ovocitos (COC) recuperados se clasificaron como adecuados y no adecuados para la producción de embriones in vitro, de acuerdo con las características del cúmulo y del citoplasma. Los COC elegibles e inadecuados se valoraron con la prueba de azul brillante de Cresilo (BCB) y se clasificaron en BCB+ y BCB-. La maduración in vitro (IVM) se llevó a cabo en microgotas, incubadas en una cámara de CO2 al 5%, 38.5 °C y 90% de humedad durante 24 horas. La progresión meiótica se determinó por extrusión del corpúsculo polar mediante epifluorescencia bajo un microscopio invertido. La morfometría de ovocitos se estableció mediante una cámara de alta definición (Excelis AU-600-HD) y un software (AmScope v.3.7). El porcentaje de recuperación de ovocitos fue mayor de 63%. Los folículos de G2 proporcionaron un mayor porcentaje de COC elegibles (65.7%), donde el 59% de este grupo se clasificó como BCB+. Los ovocitos aptos de G1 y G2 reanudaron la meiosis en un 75%. Además, se observó que los ovocitos después de IVM redujeron su diámetro. Se concluye que los ovocitos de folículos entre 4-8 mm (G2) proporcionan un mayor porcentaje de COC maduros; sin embargo, el 50% de folículos <4 mm (G1) son una fuente prometedora de ovocitos viables, por lo que deben usarse para la producción de embriones in vitro.The competence of oocytes according to follicle size to restart meiosis was evaluated. The follicles were measured and classified as Group 1 (G1 <4 mm), Group 2 (G2 4-8 mm) and Group 3 (G3 >8 mm). The aspiration was performed by group with a 21G needle connected to a vacuum pump, with a pressure of 65 mmHg. The complex oocyte clusters (COCs) recovered were classified as suitable and unsuitable to produce embryos in vitro, according to the characteristics of the cumulus and the cytoplasm. Eligible and unsuitable COCs were assessed with the Brilliant Cresyl Blue (BCB) and were classified into BCB+ and BCB-. In vitro maturation (IVM) was carried out in microdroplets, incubated in a 5% CO2 chamber, 38.5 °C and 90% humidity for 24 hours. The meiotic progression was determined by extrusion of the polar corpuscle by epifluorescence under an inverted microscope. Oocyte morphometry was established using a high definition camera (Excelis AU-600-HD) and software (AmScope v.3.7). The recovery percentage of oocytes was greater than 63%. The G2 follicles provided a higher percentage of eligible COCs (65.7%), where 59% of this group was classified as BCB+. The fit oocytes of G1 and G2 resumed meiosis by 75%. In addition, it was observed that oocytes after IVM reduced their diameter. It is concluded that follicle oocytes between 4-8 mm (G2) provide a higher percentage of mature COCs; however, 50% of follicles <4 mm (G1) are a promising source of viable oocytes, so they should be used for in vitro embryo production