Coleta de folhas do cafeeiro e extração de DNA genômico de alta qualidade.

Para a amplificação do DNA in vitro, é necessário que o DNA genômico seja de boa qualidade. É comum que seja realizada a coleta do tecido vegetal em local distante de onde será feita a extração e análises do DNA e muitas vezes, o armazenamento inadequado das amostras favorece as reações de oxidação, resultando na redução da qualidade deste. Realizou-se este trabalho com o objetivo de estabelecer um método simples e eficiente para coleta e armazenamento de folhas de Coffea arabica visando a obtenção de DNA de boa qualidade. O trabalho foi realizado no Laboratório de Análise de Sementes da Universidade Federal de Lavras, envolvendo doze tratamentos e duas testemunhas. Foram combinados os fatores umidade da folha (seca ou úmida) x tempo de armazenamento (24h e 48h) x condição do ambiente (TºC ambiente ou 4ºC) x utilização de sílica no recipiente de armazenamento da folha (com ou sem sílica). Foram utilizados dois controles, onde as folhas coletadas foram armazenadas no campo em gelo ou em N2 líquido e submetidas à extração do DNA logo após a sua coleta. A avaliação da qualidade do DNA foi feita pela eletroforese do DNA genômico em gel de agarose 0,7% e pela amplificação de fragmentos de DNA utilizando-se um par de primer microssatélite. Os resultados indicaram que a utilização da sílica quando as folhas estavam secas e o armazenamento das folhas a 4ºC por 24h ou 48 h são favoráveis à oxidação das amostras, resultando em um DNA de má qualidade. A extração do DNA de alta qualidade passível de ser utilizado em PCR é viável quando folhas secas ou úmidas são coletadas e armazenadas em sacos plásticos por até 48 horas antes do início do procedimento da extração

Microssatélites para a caracterização de Coffea arabica.

A caracterização de genótipos é importante tanto em bancos de germoplasma quanto para o registro de cultivares. Para a maioria das espécies, esta caracterização é realizada por meio de marcadores morfológicos que podem apresentar algumas limitações para distinção de cultivares de espécies como o cafeeiro que apresenta base genética estreita. Além disso, os marcadores morfológicos podem ser influenciados pelo ambiente, apresentar baixo grau de polimorfismo ou serem dependentes do estádio de desenvolvimento da planta. Os marcadores moleculares SSR podem ser uma alternativa para a identificação de cultivares de café por apresentarem ampla cobertura do genoma e, geralmente, elevado grau de polimorfismo. Este trabalho foi realizado com o objetivo de caracterizar 12 cultivares e três clones de café arabica utilizando marcadores SSR. Trinta e quatro locos SSR desenvolvidos a partir de etiquetas de sequências expressas (EST) disponíveis no Projeto do Genoma Café, e também outros três locos já publicados (Sat 225, Sat 229 e Sat259) foram utilizados neste estudo. Os locos LEG 11, LEG 13, LEG 29, LEG 26, LEG 32, P18 e SAT 225 foram polimórficos entre os genótipos e permitiram caracterizar as cultivares Acauã, IBC-Palma 2, Sabiá Tardio e Icatu Amarelo IAC 3282. No dendrograma gerado pelos marcadores SSR observou-se que a cultivar Acauã apresentou o menor índice de similaridade genética (0,88) em relação aos demais materiais envolvidos neste estudo, não sendo possível observar distância genética entre clone 3, Catuaí Vermelho IAC 144, Catuaí Amarelo IAC 62, Catucaí Vermelho 2015 cv.476, Catucaí Amarelo 2015 cv.479, Mundo Novo IAC 376-4, Obatã e Paraíso. Pelas características de base genética estreita do cafeeiro se faz necessária a utilização de um maior número de locos SSR para a caracterização de todas as cultivares e clones deste estudo

Capacidade de armazenamento de sementes de Coffea arabica L. em diferentes estádios de maturação e submetidas à diferentes métodos de secagem.

O momento da colheita e os métodos de secagem podem influenciar a qualidade de sementes de cafeeiro durante o armazenamento. Este trabalho foi realizado com o objetivo de estabelecer os efeitos do estádio de desenvolvimento e do método de secagem sobre a qualidade fisiológica e a capacidade de armazenamento de sementes de cafeeiro. Os ensaios foram realizados nos Laboratórios de Análise de Sementes e Eletroforese do Departamento de Agricultura da UFLA. Os frutos do cultivar Rubi foram colhidos, despolpados, desmucilados por fermentação à 30ºC por 24 horas e as sementes lavadas e deixadas sobre papel para retirada da água superficial, antes de serem submetidas à secagem convencional (à sombra) e secagem em secador estacionário à temperatura de 35ºC. Como testemunha foram analisadas sementes sem secagem. As avaliações foram feitas imediatamente após os tratamentos de secagem e após quatro e oito meses de armazenamento. As sementes foram armazenadas a 10ºC em embalagens plásticas e herméticas. Foram realizados os testes de germinação, de protrusão radicular, de matéria seca de plântulas, de índice de velocidade de emergência, de condutividade elétrica, além de análises eletroforéticas da enzima endobmananase e de proteínas resistentes ao calor. O delineamento foi inteiramente ao acaso em esquema fatorial 2 (estádios de desenvolvimento) x 3 (secagens) x 3 (tempo de armazenamento), com 4 repetições. As sementes submetidas à secagem perderam vigor e viabilidade, principalmente quando colhidas no estádio verdecana, sendo que a secagem a 35ºC se mostrou mais prejudicial à qualidade fisiológica das sementes. A presença ou intensidade de bandas de proteínas resistentes ao calor estão associadas à secagem das sementes. Há maior atividade da enzima endoßmananase em sementes colhidas no estádio cereja que em sementes do estádio verdecana. Há um aumento da atividade da enzima na medida em que se aumenta o período de armazenamento

Perfil isoenzimático em sementes de café produzidas sob manejo orgânico.

A produção orgânica visa à busca do equilíbrio de sistemas agropecuários com a natureza, não utilizando agrotóxicos, os quais desequilibram o ecosistema e eliminam os inimigos naturais. Assim no manejo orgânico são utilizadas diferentes fontes de matéria orgânica que resultam em efeitos de nutrição variados e por conseqüência podem afetar a qualidade de sementes, a qual, dentre vários fatores, está também relacionada à existência de enzimas do sistema oxidativo. Objetivou-se neste trabalho avaliar alterações no perfil de expressão de sistemas isoenzimáticos em sementes de café produzidas em lavouras conduzidas sob manejo orgânico. O delineamento experimental foi látice balanceado 4x4 com cinco repetições, em esquema fatorial 3x2x2, mais quatro tratamentos adicionais, além da testemunha produzida com adubação convencional. O fatorial corresponde a três fontes de matéria orgânica (esterco bovino, cama de aviário e farelo de mamona), com e sem resíduo vegetal (casca de café), com e sem adubação verde, com feijão guandu (Cajanus cajan L). A qualidade das sementes foi avaliada por meio de testes fisiológicos e também por eletroforese dos sistemas enzimáticos álcool desidrogenase, sorbitol desidrogenase, peroxidase, catalase, esterase, superóxido dismutase, glutamato desidrogenase. Pelos resultados obtidos não foram observadas diferenças na qualidade fisiológica das sementes de café ou nos padrões isoenzimáticos, devidas aos tratamentos de manejo orgânico e convencional de adubação

Protocolo para extração de RNA em sementes de café.

As sementes são um importante meio de propagação de culturas do gênero Coffea, sendo de fundamental importância a obtenção de sementes com alta qualidade, para a produção de mudas. Estudos moleculares têm se mostrado úteis na obtenção de classes distintas de marcadores moleculares que auxiliam na elucidação dos fatores que afetam a qualidade das sementes. Para o estudo de genes expressos em sementes, há necessidade de se obter RNA de boa qualidade e em quantidades satisfatórias. Assim, nesse estudo, objetivou-se testar e aperfeiçoar metodologia para extração de RNA em sementes de café (Coffea arabica L.) para posterior utilização em técnicas de análise de expressão gênica. Para a quantificação de RNA foram utilizadas amostras de sementes inteiras e endosperma, secos e embebidos, com e sem liofilização. A extração do RNA total foi realizada conforme o protocolo Pury Link Plant RNA Reagent (Invitrogen?) e a qualidade e integridade do RNA extraído foram verificadas por meio de eletroforese em gel de agarose 1,5%. A utilização de sementes de café secas e sem liofilização foi eficiente na obtenção de RNA de melhor qualidade

Breeding sorghum for grain, forage and bioenergy in Brazil.

ABSTRACT - Sorghum is a versatile crop used for energy production, human and animal feedings, and raw material for industry. The grain sorghum is the fifth most important cereal worldwide, and Brazil is one of the top 10 sorghum producers. In the last 40 years, the sorghum grain yield in Brazil has increased to 32.70 kg ha-1 year -1. Although this clear evolution, much remains to be done, and sorghum breeders in Brazil still face several challenges. This review discusses the main characteristics of sorghum genetics and breeding, aiming for sorghum improvement for food, fodder, feed, and fuel uses. Herein will be highlighted essential topics related to the genetic control of the main interest traits; conventional sorghum breeding; the development of sorghum lines and hybrids; the use of male-sterility in sorghum breeding; the implication of genotypes-by-environments interaction in sorghum, the use of genome-wide association studies, and genomic prediction to maximize the efficiency of the sorghum breeding programs. RESUMO - O sorgo é uma cultura bastante versátil, sendo usada para a produção de energia, alimentação humana e animal, assim como matéria-prima para a indústria. Globalmente, o sorgo granífero é o quinto cereal de maior importância, e o Brasil é um dos dez maiores produtores de sorgo. Nos últimos 40 anos, a produtividade nacional de grãos de sorgo aumentou a uma taxa de 32,70 kg ha-1 ano-1. Embora essa clara evolução, ainda se tem muito a ser feito e diversos são os desafios enfrentados pelos melhoristas de sorgo no Brasil. Esta revisão discute os principais pontos da genética e melhoramento do sorgo, visando a produção de alimentos, forragem, ração e combustível. Serão destacados tópicos relacionados ao controle genético das principais características de interesse em sorgo; melhoramento convencional de sorgo; desenvolvimento de linhagens e híbridos em sorgo; o uso da machoesterilidade no melhoramento de sorgo; implicações da interação genótipos por ambientes; aplicação da associação genômica ampla e predição genômica para maximizar a eficiência dos programas de melhoramento de sorgo

Inoculação de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens em sementes de feijão por meio da técnica de condicionamento fisiológico.

Neste estudo foi testada a técnica de condicionamento fisiológico em meio agarizado para inoculação de Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) em sementes de feijão. Na primeira etapa, avaliou-se o comportamento das sementes de feijão cultivar Pérola, durante o pré-condicionamento osmótico em substrato agarizado com restrição hídrica. Os tratamentos consistiram em expor, por diferentes períodos de tempo, sementes de feijão desinfestadas a quatro níveis de restrição hídrica do meio 523 (-0,55, -0,75, -0,95 e -1,15 MPa), com o uso de quatro substratos (meio 523, meio 523+KCl, meio 523+manitol e meio 523+sacarose). Como testemunha, utilizou-se o meio 523 sem restrição hídrica (-0,55 MPa). Decorridos os respectivos tempos, avaliou-se a percentagem de sementes com protrusão radicular e, posteriormente, o teor de água, a germinação e os padrões enzimáticos das sementes. Na segunda etapa do estudo, avaliou-se o crescimento de quatro isolados de Cff (Cff DF - Feij-2936, Cff PR - 12768, Cff SC - Feij-2928 e Cff SP - Feij-2634) em substrato agarizado com restrição hídrica. Os tratamentos da terceira etapa foram definidos com base na primeira etapa, em que o melhor tratamento foi o meio 523 com manitol no potencial hídrico de -0,95 MPa e com 48 horas de exposição das sementes no meio agarizado. Na segunda etapa, verificou-se que o isolado de Cff SC (Feij-2928), proveniente do estado de Santa Catarina, apresentou o melhor crescimento no substrato e no potencial hídrico definido na primeira etapa. Portanto, foi possível a inoculação artificial de sementes de feijão com Cff por meio da técnica de condicionamento fisiológico em substrato agarizado, sem o comprometimento de sua qualidade fisiológica