РИСК РАННЕЙ ДИСФУНКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТА ПЕЧЕНИ АССОЦИИРОВАН С ГЕНОТИПОМ ГЕНА TLR-4 В ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ RS913930 И РЕАЛИЗУЕТСЯ ЧЕРЕЗ АКТИВАЦИЮ ЯДЕРНОГО БЕЛКА HMGB1, КЛЕТОК КУПФЕРА И IL-23

Aim. To evaluate the associations of genotypes of clinically relevant nucleotides rs11536865, rs913930 and rs5030717 of the TLR-4 gene with the risk of development and severity of early allograft dysfunction after liver transplantation. Materials and methods. A case-control study enrolling 71 patients was organized. Inclusion criteria: DBD liver transplantation. Exclusion criteria: living related liver transplantation, reduced graft transplantation, recipient’s age fewer than 18. Results. Within rs5030717 there were identifi ed three genotypes: AA (81.6%) and two genotypes with the minor G-allele: AG (12.6%) and GG (5.6%). Within rs913930 there identi- fi ed three genotypes: TT (59.1%) and two genotypes with the minor C-allele: C/T (29.5%) and CC (11.2%). The rs11536865 studying revealed no polymorphism (GG genotype). The early allograft liver dysfunction (EAD) developed in 19.7% of patients, the severe EAD in 11.2% of patients, septic complications in 14%, acute cellular rejection in 23.9% of cases. The C/T genotype of the TLR-4 gene in the SNP rs913930 sequence was closely associated with the EAD development (OR 4.8 to 1; p = 0.047; 95% CI 1–23.4). Рatients with the donor’s liver C/T genotype had a reliably higher proportion (%) of the HMGB1 positive hepatocytes in the donor’s bioptate, 21 (17–29%) vs the СС+TT genotypes, 16 (10–19%) (Mann–Whitney test, p = 0.01). The CD68 expression in the liver bioptate at the donor’s stage was reliably higher in the carriers of heterozygotes in the SNP rs913930 (C/T genotype) and in the SNP rs5030717 (AG genotype), (Mann–Whitney test, p = 0.03). Signifi cant positive correlation between the CD68 expression in the donor’s liver bioptates and the IL-23 level in the hepatic vein has been determined in an hour after the portal reperfusion (ρ = 0.62; p = 0.04) as well as between the HMGB1 expression in the donor’s liver bioptates and the АSТ level in 24 hours after the reperfusion (r = 0.4; p = 0.02). The HMGB1 staining in the donor’s liver bioptates was higher in the EAD patients, 21 (20; 29) cells/mm2 in comparison with the patients without EAD, 16 (12; 18) (Mann–Whitney test, p = 0.0036). Conclusion. The early allograft liver dysfunction is associated with the genetic predisposition caused by the TLR-4 gene polymorphism and is implemented via the HMGB1, Kupffer cells and IL-23 activation. Цель исследования. Оценить ассоциации генотипов клинически значимых последовательностей нуклеотидов rs11536865, rs913930 и rs5030717 гена TLR-4 с риском возникновения и выраженностью ранней дисфункции трансплантатов печени. Материалы и методы. Для достижения поставленной цели было организованно исследование «случай–контроль», включавшее 71 пациента. Критерии включения: трансплантация печени от умершего донора. Критерии исключения: трансплантация от родственного донора, редуцированный графт, возраст реципиента менее 18 лет. Результаты. В пределах rs5030717 были выявлены три генотипа: AA (81,6%) и два генотипа с минорной аллелью G – AG (12,6%) и GG (5,6%). В пределах rs913930 были выявлены 3 генотипа: TT (59,1%) и два генотипа с минорной аллелью С – TC (29,5%), CC (11,2%). Изучение rs11536865 не выявило полиморфизма (генотип – GG). Ранняя дисфункция трансплантата печени развилась у 19,7% пациентов, тяжелая ранняя дисфункция трансплантата – 11,2%, септические осложнения – 14%, острое клеточное отторжение – 23,9%. Генотип C/T гена TLR-4 в последовательности SNP rs913930 имеет сильную связь с развитием ранней дисфункции трансплантата (Отношение шансов 4,8:1; p = 0,047; 95% ДИ 1–23,4). Пациенты с генотипом донорской печени С/T имели достоверно большую пропорцию HMGB1 (%) положительных гепатоцитов в донорском биоптате, 21 (17–29)%, по сравнению с генотипами СС+TT, 16 (10–19)% (Mann–Whitney p = 0,01). Экспрессии CD68 в биоптате печени на этапе донорского забора достоверно выше у носителей гетерозигот по SNP rs913930 (генотип C/T) и SNP rs5030717 (генотип AG), (Mann–Whitney test, p = 0,03). Получена достоверная корреляция между экспрессией CD68 в биоптатах печени доноров и уровнем IL-23 в печеночных венах трансплантата через 1 час после реперфузии (ρ = 0,62; p = 0,04) и между экспрессией HMGB1 в биоптатах печени доноров и уровнем АСТ через 24 часа после реперфузии (r = 0,4; p = 0,02). Экспрессия HMGB1 в биоптатах печени доноров была больше у пациентов с РДТ, 21 (20; 29) кл/мм2 , по сравнению с пациента- ми без РДТ 16 (12; 18) (Mann–Whitney test, p = 0,0036). Заключение. Ранняя дисфункция трансплантата имеет генетические предпосылки, обусловленные полиморфизмом гена TLR-4 и реализующиеся через активацию HMGB1, клеток Купфера и IL-23.

ПРЕДРЕПЕРФУЗИОННАЯ ПОРТАЛЬНО-АРТЕРИАЛЬНАЯ ПЕРФУЗИЯ ТРАНСПЛАНТАТА ПЕЧЕНИ РАСТВОРОМ HTK, CОДЕРЖАЩИМ ТАКРОЛИМУС, УМЕНЬШАЕТ ЧАСТОТУ ВОЗНИКНОВЕНИЯ РАННЕЙ ДИСФУНКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТА ПЕЧЕНИ

It was shown that Tacrolimus (Tac) can suppress infl ammation and immune response involved in liver ischemia-reperfusion injury (IRI) (Kristo I., Transpl Int., 2011). Aim. We hypothesize that back-table arterial and portal liver perfusion with Tac can infl uence the incidence and severity of early allograft dysfunction (EAD). A prospective randomized study was conducted (ClinicalTrials.gov Identifi er: NCT01887171).Materials and methods. Criteria of the inclusion: First liver transplantation from DBD donor with sequential portal-arterial reperfusion. At back-table portal vein and hepatic artery were perfused each by 500 ml of HTK solution containing 20 ng/ml Tac during 10–15 min followed by portal fl ushing with 200 ml 5% solution of Albumin containing 20 ng/ml Tac and by resting of liver in effl uent. No Tac was added in the control group. Primary Outcome: EAD (Olthoff KM, et al. Liver Transpl. 2010) and severe EAD (P.R.Salvalaggio, et al. Transpl. Proceedings, 2012).Results. No difference was found between groups (main vs. control) in terms of MELD (16 vs. 16), steatosis (10 vs. 10%), ballooning (45 vs. 40%) of liver grafts, recipient age (50 vs. 50 y.o.), warm ischemia time (50 vs.50 min) and total ischemia time (482.5 vs. 485.0 min). Median donor age was higher in the main group (44.5 vs. 39.0 y.o.). The overall rate of EAD was 27.9%. EAD rate was signifi cantly lower in the main group (6/43 vs. 18/43; p = 0.003). The rate of moderate-to-severe EAD was lower in the main group (1/43 vs. 10/43; p = 0.009). The median levels of AST and ALT in 24 h after reperfusion were signifi cantly lower in the intervention group (1004 vs. 1596; p = 0.03 and 449 vs. 759; p = 0.057).Conclusion. Portal and arterial back-table liver perfusion with HTK solution with Tacrolimus may contribute to lower EAD incidence and severity.В предыдущих исследованиях было показано, что такролимус может подавлять воспаление и иммунный ответ во время ишемически-реперфузионного повреждения трансплантата печени (Kristo I., Transpl Int., 2011).Цель исследования. Оценить влияние back-table портальной и артериальной перфузии раствором HTK и альбумина, содержащим такролимус, на частоту и выраженность ранней дисфункции трансплантата печени.Материалы и методы. Для достижения поставленной цели было организовано интервенционное проспективное рандомизированное исследование (ClinicalTrials.gov Identifi er: NCT01887171) в двух параллельных группах по 43 пациента. Критерии включения: первичная ортотопическая трансплантация печени от донора со смертью мозга с последовательной портально-артериальной реперфузией. В основной группе на операции back-table выполняли перфузию воротной вены под давлением 40–60 см водяного столба раствором HTK в объеме 500 мл c содержанием такролимуса 20 нг/мл, а затем перфузию печеночной артерии 500 мл такого же раствора под давлением 40–50 мм рт. ст., перед имплантацией графта в воротную вену вводили 200 мл 5% раствора альбумина c содержанием такролимуса 20 нг/мл. В контрольной группе такролимус не был добавлен.Результаты. Группы были сопоставимы (основная против контрольной соответственно) по баллу MELD, стеатозу, баллонной дистрофии трансплантатов печени, возрасту реципиента, времени тепловой ишемии и общему времени ишемии. Средний возраст донора был выше в основной группе (44,5 против 39 лет). Общая частота ранней дисфункции аллографта (РДА) была 27,9%. Частота РДА была значительно ниже в основной группе (6/43 против 18/43, р = 0,003), также частота тяжелой РДА была значимо ниже в основной группе (1/43 против 10/43; р = 0,009). Средний уровень АСТ и АЛТ через 24 ч после реперфузии были значительно ниже в основной группе (1004 против 1596; р = 0,03 и 449 против 759, р = 0,057).Заключение. Применение инфузии раствора HTK и альбумина с такролимусом в воротную вену и печеночную артерию во время подготовки донорской печени к имплантации позволяет уменьшить частоту и выраженность ранней дифункции трансплантата печени

PORTAL AND ARTERIAL FLUSHING WITH HTK AND TACROLIMUS CAN ATTENUATE THE INCIDENCE OF EARLY LIVER ALLOGRAFT DYSFUNCTION

It was shown that Tacrolimus (Tac) can suppress infl ammation and immune response involved in liver ischemia-reperfusion injury (IRI) (Kristo I., Transpl Int., 2011). Aim. We hypothesize that back-table arterial and portal liver perfusion with Tac can infl uence the incidence and severity of early allograft dysfunction (EAD). A prospective randomized study was conducted (ClinicalTrials.gov Identifi er: NCT01887171).Materials and methods. Criteria of the inclusion: First liver transplantation from DBD donor with sequential portal-arterial reperfusion. At back-table portal vein and hepatic artery were perfused each by 500 ml of HTK solution containing 20 ng/ml Tac during 10–15 min followed by portal fl ushing with 200 ml 5% solution of Albumin containing 20 ng/ml Tac and by resting of liver in effl uent. No Tac was added in the control group. Primary Outcome: EAD (Olthoff KM, et al. Liver Transpl. 2010) and severe EAD (P.R.Salvalaggio, et al. Transpl. Proceedings, 2012).Results. No difference was found between groups (main vs. control) in terms of MELD (16 vs. 16), steatosis (10 vs. 10%), ballooning (45 vs. 40%) of liver grafts, recipient age (50 vs. 50 y.o.), warm ischemia time (50 vs.50 min) and total ischemia time (482.5 vs. 485.0 min). Median donor age was higher in the main group (44.5 vs. 39.0 y.o.). The overall rate of EAD was 27.9%. EAD rate was signifi cantly lower in the main group (6/43 vs. 18/43; p = 0.003). The rate of moderate-to-severe EAD was lower in the main group (1/43 vs. 10/43; p = 0.009). The median levels of AST and ALT in 24 h after reperfusion were signifi cantly lower in the intervention group (1004 vs. 1596; p = 0.03 and 449 vs. 759; p = 0.057).Conclusion. Portal and arterial back-table liver perfusion with HTK solution with Tacrolimus may contribute to lower EAD incidence and severity