A strategy for constructing aneuploid yeast strains by transient nondisjunction of a target chromosome

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Most methods for constructing aneuploid yeast strains that have gained a specific chromosome rely on spontaneous failures of cell division fidelity. In <it>Saccharomyces cerevisiae</it>, extra chromosomes can be obtained when errors in meiosis or mitosis lead to nondisjunction, or when nuclear breakdown occurs in heterokaryons. We describe a strategy for constructing N+1 disomes that does not require such spontaneous failures. The method combines two well-characterized genetic tools: a conditional centromere that transiently blocks disjunction of one specific chromosome, and a duplication marker assay that identifies disomes among daughter cells. To test the strategy, we targeted chromosomes III, IV, and VI for duplication.</p> <p>Results</p> <p>The centromere of each chromosome was replaced by a centromere that can be blocked by growth in galactose, and <it>ura3::HIS3</it>, a duplication marker. Transient exposure to galactose induced the appearance of colonies carrying duplicated markers for chromosomes III or IV, but not VI. Microarray-based comparative genomic hybridization (CGH) confirmed that disomic strains carrying extra chromosome III or IV were generated. Chromosome VI contains several genes that are known to be deleterious when overexpressed, including the beta-tubulin gene <it>TUB2</it>. To test whether a tubulin stoichiometry imbalance is necessary for the apparent lethality caused by an extra chromosome VI, we supplied the parent strain with extra copies of the alpha-tubulin gene <it>TUB1</it>, then induced nondisjunction. Galactose-dependent chromosome VI disomes were produced, as revealed by CGH. Some chromosome VI disomes also carried extra, unselected copies of additional chromosomes.</p> <p>Conclusion</p> <p>This method causes efficient nondisjunction of a targeted chromosome and allows resulting disomic cells to be identified and maintained. We used the method to test the role of tubulin imbalance in the apparent lethality of disomic chromosome VI. Our results indicate that a tubulin imbalance is necessary for disomic VI lethality, but it may not be the only dosage-dependent effect.</p

Kunskapsbaserat tobaksförebyggande arbete i skolan - A Non Smoking Generations (NSG) flerkomponentsprogram

 Den idéburna organisationen A Non Smoking Generation utvecklade under 2010–2017 ett kunskaps- och teoribaserat tobaksförebyggande flerkomponentsprogram för grund- och gymnasieskola tillsammans med en tvärvetenskaplig rådgivande forskargrupp. Här beskrivs programutvecklingsarbetet och genomförandet i fyra svenska kommuner, graden av engagemang och stöd för genomförandet samt elevernas syn på policy och lagar rörande tobak. Programmets teoretiska ramverk utgick från teorier och kunskap om förändringsberedskap, risk- och skyddsfaktorer, implementering, samt den processmodell som utvecklades och tillämpades i projektet. Alla skolor i kommunerna gick under projekttiden från att ha en lägre förändringsberedskap att arbeta tobaksförebyggande till en högre. I slutet av projektet var de tobaksspecifika skyddsfaktorerna inkluderade i tobakspolicys som tillämpades och andelen elever som kände till tobakspolicyn hade ökat. Resultaten visade också att kommunernas skolor hade kunnat tillämpa och kommit långt i arbetet med processmodellen. Av intervjuerna framkom att de var mycket nöjda med modellen och ansåg att den var lätt att arbeta utifrån och hålla fast vid i framtida arbete