ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ Th1-, Th2- И Th17-СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ВИРУСНЫХ МИОКАРДИТАХ

Background: Type 17 T-helpers (Th17) were first identified more than 10 years ago. Though, there are only limited studies on the role of Th17- mediated mechanisms in the immune pathogenesis of acute myocarditis and dilative cardiomyopathy. Aim: To assess specific cytokine profile in patients with infectious immune myocarditis and post-myocarditis cardiosclerosis. Materials and methods: 35 patients with infectious immune myocarditis, 39 patients with post-myocarditis cardiosclerosis and 10 healthy volunteers (control group) were enrolled. 17 subjects with infectious immune myocarditis had manifest heart failure. Mean concentrations of Th1-, Th2- and Th17-derived cytokines were measured using solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay panel manufactured by VectorBest ZAO (Russia). For statistical analysis, PASW Statistics software was used. Results: Compared to healthy controls, patients with infectious immune myocarditis had higher serum interferon-gamma (IF-γ) concentrations and more than 3-fold increase of serum interleukin (IL)-4. They also had almost 7-fold increase of IL-17A and Th17 effector cytokines – IL-8 and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF). Patients with infectious immune myocarditis and moderate or no symptoms of heart failure had significantly lower concentrations of IF-γ compared to patients with advanced heart failure. Cytokine concentrations peaked during the first 2 week of the disease, with following decrease. On the contrary, serum IL-4 grew significantly by the end of the first month and during the second month of the disease. Raised concentrations of IL-17A, IL-8 and GM-CSF were found throughout the period from the second week to the second month of the disease. Th17-derived cytokines concentrations were significantly increased in patients with post-myocarditis cardiosclerosis. Compared to the controls, IL-17A almost doubled, IL-8 increased by 51%, and GM-CSF – by 50%. Elevated concentrations of IL-4, IL-17A, IL-8 and GM-CSF were found in patients with duration of post-myocarditis cardiosclerosis less than 6 months. Conclusion: Disorders of anti-infective immunity and deficient self-limitation mechanisms of immune response play an important role in the development and progression of inflammatory myocardial diseases.Актуальность. Хотя с  момента открытия Т-хелперов типа 17 (Тh17) прошло уже 10  лет, изучению роли Th17-опосредованных механизмов в  иммунопатогенезе острого миокардита и  дилатационной кардиомиопатии человека посвящены единичные работы. Цель  – изучить особенности цитокинового профиля у  больных инфекционно-иммунным миокардитом (ИИМ) и  миокардитическим кардиосклерозом (МК). Материал и  методы. В  исследовании приняли участие 35 больных ИИМ и  39  больных с МК. У 17 больных ИИМ отмечались выраженные симптомы сердечной недостаточности. Контрольную группу составили 10 условно здоровых лиц. Изучали средние значения концентрации цитокинов, характеризующих Th1-, Th2- и  Th17-субпопуляции хелперных лимфоцитов. Определение концентрации цитокинов в  сыворотке крови проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с  использованием наборов реагентов производства ЗАО  «Вектор-Бест» (Россия). Статистическую обработку результатов выполняли с  помощью программы PASW Statistics 18. Результаты. У  больных ИИМ выявлен рост концентрации интерферона-γ (ИФН-γ), кон-центрация интерлейкина (ИЛ)-4 была более чем в  3 раза выше по сравнению с  уровнем цитокина в  сыворотке крови здоровых доноров. Отмечено почти семикратное увеличение уровня ИЛ-17А, а  также концентраций эффекторных цитокинов Th17-субпопуляции  – ИЛ-8 и  гранулоцитарно-макрофагального колоние-стимулирующего фактора (ГМ-КСФ). Концентрация ИФН-γ оказалась достоверно ниже в группе пациентов с ИИМ с отсутствием или умеренной тяжестью симптомов сердечной недостаточности по сравнению с  пациентами с  выраженной сердечной недостаточностью. Уровень цитокина достигал максимальных значений в  первые 2  недели от начала заболевания. В последующем концентрация ИФН-γ снижалась. Напротив, сывороточная концентрация ИЛ-4 оказалась значительно повышенной к концу 1-го и на 2-м месяце от начала заболевания. Концентрации ИЛ-17А, ИЛ-8 и ГМ-КСФ в сыворотке крови были повышены во 2-ю неделю, к концу 1-го месяца и на 2-м месяце заболевания. Концентрации Th17-цитокинов оказались существенно повышенными у  больных МК. Уровень ИЛ-17А превышал показатель контрольной группы почти вдвое, ИЛ-8  – на 51%, а ГМ-КСФ – на 50%. Сывороточные уровни ИЛ-4, а также ИЛ-17А, ИЛ-8 и ГМ-КСФ оказались повышенными в  подгруппе больных МК со сроком заболевания менее 6 месяцев. Заключение. Нарушения противоинфекционного иммунитета и  механизмов самоограничения иммунных реакций играют роль в  возникновении и  прогрессировании поражений миокарда воспалительной природы

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МИОКАРДА ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ

Background: Autoantibodies to myocardial antigenic epitopes and corresponding autoreactive T cell clones play an important role in myocardial damage and in pathogenesis of infectious immune myocarditis. T lymphocytes subpopulations/regulatory T cells balance as well as T cell-derived cytokines are crucial in the mechanisms of immune regulation in myocarditis. Aim: To assess quantitative parameters and functional characteristics of basic peripheral blood lymphocytes subpopulations in patients with infectious immune myocarditis and post-myocarditis cardiosclerosis. Material and methods: 35 patients with infectious immune myocarditis and 39 patients with post-myocarditis cardiosclerosis were included. Among infectious immune myocarditis patients, 17 patients had advanced congestive heart failure (CHF) (NYHA III), and 18 patients had mild, moderate or no heart failure (NYHA 0-II). Among cardiosclerosis patients, 18 patients had no CHF, and 21 had only mild symptoms of heart failure (NYHA I). 10 healthy volunteers were enrolled in the control group. Populations and subpopulations of peripheral blood lymphocytes and markers of lymphocytes activation were studied using quadricolor laser flow cytometry (FACSCalibur) and suitable monoclonal antibodies (Becton Dickinson, USA). Results: Inflammatory myocardial diseases are characterized by alterations of innate and adaptive immunity. In our study, patients with infectious immune myocarditis and post-myocarditis cardiosclerosis had significantly reduced numbers of natural killer T cells irrespective of CHF symptoms and disease duration. T cell immunity disturbances were characterized by decreased numbers of CD3+CD4+ cells depending from the disease duration and symptoms severity. Patients with infectious immune myocarditis also had increased numbers of B cells. Immune activation was demonstrated both in infectious immune myocarditis and (less prominent) in post-myocarditis cardiosclerosis. Increased expression of early activation marker CD25 was found during the first 2 weeks from the disease onset in patients with infectious immune myocarditis. In 1 month and during the second month of the disease, increased numbers of T cells and non-T lymphocytes were demonstrated along with late activation manifested by the expression of HLA-DR antigen. Different severity of CHF symptoms was associated with different patterns of activation markers. Increased expression of apoptosis marker CD95 was found in both infectious immune myocarditis and post-myocarditis cardiosclerosis; maximal CD95 values were demonstrated in myocarditis patients in 1 month after the disease onset. Conclusion: Disturbances of anti-infection immunity and self-limitation mechanisms of immune reactions play an important role in the development and progression of inflammatory myocardial diseases.Актуальность. Ключевую роль в  патогенезе инфекционно-иммунного миокардита (ИИМ) играют аутоантитела против антигенных детерминант миокарда и  соответствующие клоны аутореактивных Т-клеток, выступающие в  роли основных факторов повреждения сердечной мышцы. Центральное место в  механизмах им-мунорегуляции при миокардите отводится балансу основных субпопуляций хелперных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-клеток, а также продуцируемых ими цитокинов. Цель  – изучить количественные параметры и  особенности функционального состояния основных субпопуляций лимфоцитов периферической крови больных ИИМ и миокардитическим кардиосклерозом (МК). Материал и  методы. В  исследовании приняли участие 35  больных ИИМ и  39  больных МК. У  17  больных ИИМ отмечались выраженные симптомы сердечной недостаточности (СН)  – III  функциональный класс (ФК) по классификации Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA), у 18 пациентов с ИИМ признаки СН отсутствовали или были умеренно выражены (0–II ФК по NYHA). У  18  больных МК симптомы СН отсутствовали, а  у  21  пациента выявлялись незначительные признаки СН (I ФК по NYHA). Контрольную группу составили 10 условно здоровых лиц. Исследование популяционного и  субпопуляционного состава и  активационных маркеров лимфоцитов периферической крови проводили методом четырехцветной лазерной проточной цитометрии c использованием прибора FACSCalibur и  соответствующих моноклонал ных антител (Becton Dickinson, США). Результаты. Воспалительные заболевания миокарда характеризуются изменениями как врожденного, так и  адаптивного иммунитета. При ИИМ и  МК выявлено значительное уменьшение числа NKT-лимфоцитов, не зависящее от выраженности симптомов СН и  продолжительности заболевания. Количественные особенности Т-клеточного иммунитета проявлялись преимущественно изменением доли CD3+CD4+-клеток и  зависели от сроков заболевания и  выраженности симптомов СН. Число В-лимфоцитов у  больных ИИМ оказалось повышенным. Признаки иммуноактивации выявлялись у больных как ИИМ, так и МК, однако у пациентов с МК их выраженность была существенно меньше. Прирост экспрессии раннего активационного маркера CD25 отмечен впервые 2 недели от начала заболевания в группе больных ИИМ. В последующем, к концу 1-го месяца и на 2-м месяце от начала заболевания, регистрировали прирост числа Т- и  не-Т-лимфоцитов с  признаками поздней активации, выявляемой по экспрессии антигена HLA-DR. Паттерн активационных маркеров различался у  пациентов с  разной степенью выраженности симптомов СН. Прирост экспрессии маркера апоптоза CD95 наблюдался во всех группах больных ИИМ и МК, при этом наибольших значений этот показатель достиг у больных ИИМ в конце 1-го месяца от начала заболевания. Заключение. Нарушения противоинфекционного иммунитета и  механизмов самоограничения иммунных реакций играют важную роль в  возникновении и  прогрессировании поражений миокарда воспалительной природы