Kloniranje, izražajnost i pročišćavanje bjelančevine 28 iz vanjske membrane Salmonelle enterice serovar Typhimurium za razvoj podjediničnog cjepiva - kratko priopćenje

Salmonella Typhimurium, a major gastrointestinal pathogen, poses a global threat to human health. Public health problems associated with this organism have increased to the extent that it has become a major issue. The bacterium is becoming resistant to the commonly available antibiotics, and vaccines also suffer from limitations such as short lived immunity. Therefore, there is an urgent need for the development of an effective vaccine. The outer membrane proteins (Omps) of Salmonella have proven their capability to be developed as a vaccine candidate for prevention of salmonellosis. With this aim, in the present study the Omp28 gene of Salmonella Typhimurium was amplified, cloned and expressed under an IPTG induction system. The recombinant protein thus produced was purified and tested for its antigenicity. The antigenicity of the purified protein was confirmed by western blotting with antiserum raised in rabbit against Omps of S. Typhimurium. The Omp28 gene was amplified as a 330bp product. The expressed protein was found to be of approximately 28kDa and it produced a strong signal in western blot analysis. This study concluded that Omp28 may be proven to be an effective candidate for the development of r-DNA vaccine against salmonellosis.Salmonella Typhimurium glavni je gastrointestinalni patogen koji je globalna prijetnja ljudskome zdravlju. Javnozdravstveni problemi povezani s ovim organizmom povećali su se do te mjere da je postao glavno pitanje na koje se traže brojni odgovori. Bakterija postaje otporna na najčešće dostupne antibiotike, a ograničavajuća uporaba cjepiva povezana je s kratkotrajnim imunitetom. Zbog toga postoji hitna potreba za razvoj učinkovitog cjepiva. Vanjske bjelančevine membrane (engl. Outer membrane proteins, Omps) salmonele dokazale su svoju sposobnost kandidata za razvoj cjepiva koje bi se koristilo u prevenciji salmoneloze. S tim je ciljem u ovom radu, pod uvjetima IPTG indukcijskog sustava, provedeno umnažanje i kloniranje te provjerena izražajnost gena za Omp28 iz Salmonelle Typhimurium. Tako dobivena rekombinantna bjelančevina pročišćena je i testirana s obzirom na antigenu sposobnost. Antigena sposobnost pročišćene bjelančevine potvrđena je uporabom Western blot metode s antiserumom protiv Omps-a iz S. Typhimurium dobivenim od zeca. Genom Omp28 umnožen je kao 330bp produkt. Bjelančevina je imala približno 28 kDa i Western blot analizom pokazala je izraženost jakog signala. Ovim je istraživanjem zaključeno da Omp28 može poslužiti kao učinkoviti kandidat za razvoj r-DNA cjepiva protiv salmoneloze