Экономические перспективы повышения уровня использования попутного нефтяного газа

A novel method employing filter arrays of a cDNA expression library for the identification of substrates for protein kinases was developed. With this technique, we identified a new member of the cyclin family, cyclin L2, as a substrate of the nuclear protein kinase DYRK1A. Cyclin L2 contains an N-terminal cyclin domain and a C-terminal arginine/serine-rich domain (RS domain), which is a hallmark of many proteins involved in pre-mRNA processing. The gene for cyclin L2 encodes the full-length cyclin L2, which is predominantly expressed in testis, as well as a truncated splicing variant (cyclin L2S) that lacks the RS domain and is ubiquitously expressed in human tissues. Full-length cyclin L2, but not cyclin L2S, was associated with the cyclin-dependent kinase PITSLRE. Cyclin L2 interacted with splicing factor 2 in vitro and was co-localized with the splicing factor SC35 in the nuclear speckle compartment. Photobleaching experiments showed that a fusion protein of green fluorescent protein and cyclin L2 in nuclear speckles rapidly exchanged with unbleached molecules in the nucleus, similar to other RS domain-containing proteins. In striking contrast, the closely related green fluorescent protein-cyclin L1 was immobile in the speckle compartment. DYRK1A interacted with cyclin L2 in pull-down assays, and overexpression of DYRK1A stimulated phosphorylation of cyclin L2 in COS-7 cells. These data characterize cyclin L2 as a highly mobile component of nuclear speckles and suggest that DYRK1A may regulate splicing by phosphorylation of cyclin L2

Nucleolar-nucleoplasmic shuttling of TARG1 and its control by DNA damage-induced poly-ADP-ribosylation and by nucleolar transcription

Macrodomains are conserved protein folds associated with ADP-ribose binding and turnover. ADP-ribosylation is a posttranslational modification catalyzed primarily by ARTD (aka PARP) enzymes in cells. ARTDs transfer either single or multiple ADP-ribose units to substrates, resulting in mono- or poly-ADP-ribosylation. TARG1/C6orf130 is a macrodomain protein that hydrolyzes mono-ADP-ribosylation and interacts with poly-ADP-ribose chains. Interactome analyses revealed that TARG1 binds strongly to ribosomes and proteins associated with rRNA processing and ribosomal assembly factors. TARG1 localized to transcriptionally active nucleoli, which occurred independently of ADP-ribose binding. TARG1 shuttled continuously between nucleoli and nucleoplasm. In response to DNA damage, which activates ARTD1/2 (PARP1/2) and promotes synthesis of poly-ADP-ribose chains, TARG1 re-localized to the nucleoplasm. This was dependent on the ability of TARG1 to bind to poly-ADP-ribose. These findings are consistent with the observed ability of TARG1 to competitively interact with RNA and PAR chains. We propose a nucleolar role of TARG1 in ribosome assembly or quality control that is stalled when TARG1 is re-located to sites of DNA damage

Characterization of cyclin L2, a novel cyclin with an arginine/serine-rich domain : phosphorylation by DYRK1A and colocalization with splicing factors

A novel method employing filter arrays of a cDNA expression library for the identification of substrates for protein kinases was developed. With this technique, we identified a new member of the cyclin family, cyclin L2, as a substrate of the nuclear protein kinase DYRK1A. Cyclin L2 contains an N-terminal cyclin domain and a C-terminal arginine/serine-rich domain (RS domain), which is a hallmark of many proteins involved in pre-mRNA processing. The gene for cyclin L2 encodes the full-length cyclin L2, which is predominantly expressed in testis, as well as a truncated splicing variant (cyclin L2S) that lacks the RS domain and is ubiquitously expressed in human tissues. Full-length cyclin L2, but not cyclin L2S, was associated with the cyclin-dependent kinase PITSLRE. Cyclin L2 interacted with splicing factor 2 in vitro and was co-localized with the splicing factor SC35 in the nuclear speckle compartment. Photobleaching experiments showed that a fusion protein of green fluorescent protein and cyclin L2 in nuclear speckles rapidly exchanged with unbleached molecules in the nucleus, similar to other RS domain-containing proteins. In striking contrast, the closely related green fluorescent protein-cyclin L1 was immobile in the speckle compartment. DYRK1A interacted with cyclin L2 in pull-down assays, and overexpression of DYRK1A stimulated phosphorylation of cyclin L2 in COS-7 cells. These data characterize cyclin L2 as a highly mobile component of nuclear speckles and suggest that DYRK1A may regulate splicing by phosphorylation of cyclin L2

Fluorescent SNAP-Tag Galectin Fusion Proteins as Novel Tools in Glycobiology

Galectins,??-galactoside binding proteins, function in several physiological and pathological processes. The further evaluation of these processes as well as possible applications of galectins in diagnosis and therapy has raised high scientific interest. Therefore, easy and reliable test systems are necessary. Here we present the simple and cost-efficient production of recombinant human galectins as fusion proteins with SNAP-tag and fluorescent proteins. These constructs show binding specificities and oligomerisation properties generally comparable to recombinant galectins. Their direct fluorescence signal was utilised by ELISA-type assay and flow cytometry analysis with human and ovine mesenchymal stem cells (MSC). Flow cytometry demonstrated glycan mediated binding of His6-SNAP-YFP-Gal- 3 to both MSC types, which was specifically inhibited by lactose. Moreover, directed immobilisation by SNAP-tag technology onto benzylguanine- activated sepharose was utilised to prepare galectin affinity columns for glycoprotein analysis and purification. The SNAPtag directed coupling yielded up to three-fold higher binding capacities for the glycoprotein standard asialofetuin compared to nondirected coupled galectin suggesting improved functionality following directed coupling

Consolidación y cohesión de los equipos de investigación del CSIC y su influencia sobre la actividad investigadora y el rendimiento de sus componentes: Área de Biología y Biomedicina

Se presentan aquí los resultados de un estudio centrado en el análisis de la actividad del personal científico-investigador del área de Biología y Biomedicina del Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC). Su objetivo es investigar los efectos, sobre la actividad y el rendimiento de los científicos, de su contexto o ‘clima grupal’, particularmente de dos factores: el nivel de desarrollo y consolidación de los equipos de investigación a que pertenecen, y su nivel de integración en el seno de los mismos. Los resultados muestran cómo ambos factores contextuales influyen en el volumen e impacto internacional de la producción científica de los investigadores, así como en diferentes aspectos de su actividad, como la colaboración con otros grupos, la participación en proyectos de I+D y la formación de nuevos investigadores, y están asimismo relacionados con el prestigio y reconocimiento obtenidos. El presente estudio no pretende ser una evaluación del área de Biología y Biomedicina del CSIC, y mucho menos de la actividad y rendimiento de sus centros e investigadores, sino que por el contrario se plantea como una ‘herramienta de conocimiento’ de la identidad social de los investigadores del CSIC, así como de la estructura y dinámica de sus equipos de investigación, de su capital humano, social e intelectual, y en definitiva, de su importancia para el Sistema Español de Ciencia y Tecnología. El estudio se ha llevado a cabo a través de una encuesta realizada a la población de investigadores del CSIC, así como del estudio de sus respectivos curricula vitae. A través de un cuestionario diseñado específicamente para este estudio, se preguntó a dichos investigadores sobre distintos aspectos de su actividad científica e investigadora, relativa al período 1998-2002. En él se recogen, además de los datos personales y profesionales de los encuestados, información relativa al nivel de consolidación y tamaño del equipo de investigación al que pertenecen, a su nivel de integración en dicho equipo, y al número de colaboraciones mantenidas durante el período analizado. La población objeto de estudio está compuesta por un total de 357 individuos. El tamaño de la muestra sobre la que se realiza el estudio, es decir, el número de cuestionarios cumplimentados debidamente, es de 123 individuos, pertenecientes a en un total de 23 Centros, Institutos, Estaciones Experimentales y Unidades del CSIC. El porcentaje de respuesta resultante es del 34,4%. En síntesis, el contexto social determinado por el nivel de consolidación de los equipos y el grado de integración de sus componentes (expresado a través del nivel de consolidación e integración) es determinante en el rendimiento de los científicos, por cuanto influye en el volumen de su actividad investigadora (determinado por el número de proyectos en los que participan), así como sobre su productividad (por lo que respecta a los indicadores más importantes para evaluar su actividad investigadora: los artículos científicos en revistas del JCR, y las patentes). De este modo, los investigadores que pertenecen a un equipo de investigación consolidado, y que se encuentran en el estadio de productividad grupal, por lo tanto totalmente integrados en el seno de su equipo, no sólo publicaron más artículos en revistas de impacto que aquellos investigadores que se encuentran en proceso de consolidación e integración, sino que también patentaron más que el resto de sus colegas. Sin embargo, no obtuvieron una visibilidad significativamente mayor, si bien es cierto que son el grupo de los investigadores que obtuvieron, en promedio, mayores valores absolutos de FI.Consejo Superior de Investigaciones Científicas (Proyecto 200410E05