Modelos mono y biexponencial en radioinmunoanálisis de insulina

Radioimmunoassay (RIA) is a principal method for quantifying serum Insulin concentration. We studied the influence of initial concentration of 125I-labeled antigen (M) and unlabeled Insulin (Q), viscosity and temperature on the substitution reaction between Q and the immunocomplex (PM) formed by M and the anti-Insulin antibody (P). The accuracy of this method is critically dependent on such factors. In addition, we propose a kinetic model for this reaction. We used a commercially available RIA kit for Insulin, a gamma counter, and a viscosimeter to study the effect of initial concentration of M, ionic strength, viscosity, and temperature on the substitution reaction between M and Q. Data were analyzed using Statistica software. The apparent rate constant for the reaction between PM and Q is dependent on the initial concentrations of M and Q, and the viscosity of the reaction medium, and temperature, and independent of the ionic strength. A kinetic model for the displacement of the 125I-Insulin by the Insulin in its union to a specific antibody is proposed. Such model adjusts satisfactorily to the results and shows the influence of the variables studied on the sensitivity of the method of RIA on which the analytical determination of the Insulin is based.El Radioinmunoanálisis (RIA) es uno de los principales métodos para la cuantificación de la concentración sérica de Insulina. Se ha estudiado la influencia de la concentración inicial de 125I- Insulina (M) e Insulina no marcada (Q), viscosidad y temperatura en la reacción de sustitución entre Q y el inmunocomplejo (PM) formado por M y el anticuerpo anti Insulina (P). La exactitud de este método es críticamente dependiente de dichos factores. Además se propone un modelo cinético para esta reacción. Se utilizó un kit comercial de RIA para Insulina, un contador gamma y un viscosímetro para estudiar el efecto de las variables indicadas anteriormente sobre la reacción de sustitución entre M y Q. Los datos se analizaron usando el programa Statistica. La constante aparente de velocidad para la reacción entre PM y Q depende de las concentraciones iniciales de M y Q, de la viscosidad del medio y de la temperatura. Es independiente de la fuerza iónica. Se propone un modelo cinético para el desplazamiento de la 125I-Insulina por la Insulina en su unión a un anticuerpo específico. Dicho modelo se ajusta satisfactoriamente a los resultados y muestra la influencia de las variables estudiadas sobre la sensibilidad del método de RIA en que se basa la determinación analítica de la Insulina

La Difusión en la reacción Antígeno – Anticuerpo

In previous works some indications about the importance of molecular diffusion in the antigen-antibody reaction have been reported. Polynomic plots were used for the analysis of the results; They have the advantadge of being simple, but the drawback of not giving very much information concerning the characteristics of the process. In this work the results obtained in several series of kinetics of antigen-antibody experiences were used. In most of them the antigen was labelled with I125and in some cases it was the antibody, with the same radionuclide. In all cases the reaction was followed by measuring the radioactivity of the Ag-Ab immunocomplex produced in different times. This signal is directly proportional to the concentration, so the original data are presented as Activity (represented by A) in CPM vs time (t) in minutes. The results obtained for sixteen reactions were analyzed using exclusively the integral method by means of both Stenberg and Karlsson models. Each one gives an integrated velocity ecuation that was adapted in order to be applied to the data. A Diffusion control was found in a high percentage of the studied cases.En trabajos realizados anteriormente se ha observado indicios sobre la importancia de la difusión molecular en la reacción antígeno-anticuerpo. Para el tratamiento de los resultados se utilizaron exclusivamente ajustes polinómicos, los cuales tienen la ventaja de su sencillez y generalidad, pero son poco informativos en cuanto a las características inherentes al proceso. En el presente trabajo se partió de los resultados obtenidos en varias series de experiencias tendentes al estudio de la cinética de distintas reacciones antígeno anticuerpo. En la mayor parte de ellas, se utilizaron antígenos marcados con I125 y en algunos casos, anticuerpos con este mismo radionúclido. En todos los casos se siguió el curso de la reacción midiendo la radiactividad del inmunocomplejo Ag-Ac formado a diferentes tiempos, directamente proporcional a su concentración, por lo que los datos de partida son siempre tablas: Actividad, en cuentas por minuto (CPM) , representada por A, frente al tiempo (t) en minutos. Los resultados obtenidos para un total de dieciséis reacciones se analizan utilizando exclusivamente el método integral mediante los modelos de Stenberg y Karlsson , cada uno de los cuales suministra una ecuación de velocidad integrada que ha sido adaptada para aplicarla a los valores disponibles. Se encuentra control por difusión en un elevado tanto por ciento de los casos estudiados

Estudio mediante Radioinmunoanálisis (RIA) y análisis inmunorradiométrico (IRMA) del equilibrio de la reacción antígeno-anticuerpo de algunas sustancias

It has been studied the binding to their specific antibodies, of the following substances: insulin and dehydroepiandrosterone sulphate (DHEAs) by means of solid-state RIA, osteocalcin and c-terminal fraction parathormone (PTHc) by means of RIA of the corresponding solutions, and neuronal specific enolase (NSE), tiroglobuline (Tg) and the tumoral marker CA549 by means of IRMA. It has been assayed a theoretical model to explain, in a general way, the antigen-antibody reactions, as well as to evaluate the influence on the binding of several factors: temperature, kind of antibody, kind of reaction (in solid state or in solution), antigen features. The obtained results at the steady-state did not allowed and adequate fit of a model with binding sites identical and independents. However, a good fit was obtained with the Hill’s equation. The studied reactions presented a low value of entalpy, according to the nature of the antigen-antibody binding.Se ha estudiado el equilibrio de la unión, a sus anticuerpos específicos, de las siguientes sustancias: Insulina y dehidroepiandrosterona sulfato (DHEAs), mediante RIA en fase sólida, osteocalcina y fracción c-terminal de la parathormona (PTHc), mediante RIA en disolución y enolasa específica neuronal (NSE), tiroglobulina (Tg) y el marcador tumoral CA549, mediante IRMA. Se pretende determinar un modelo que explique, de manera general, dichas reacciones antígeno-anticuerpo, así como establecer la influencia de algunos factores: temperatura, clase de anticuerpo, reacción en fase sólida o en disolución, características del antígeno,... sobre esta unión. Los resultados obtenidos en el estudio del equilibrio no se ajustan al modelo de sitios idénticos e independientes, sin embargo, proporcionan un excelente ajuste a la ecuación de Hill. Las reacciones estudiadas presentan un valor bajo de la entalpía de reacción concordante con la naturaleza de la unión antígeno-anticuerpo