Una propuesta rápida y económica para detectar el virus de papiloma humano por PCR a partir de muestras cervicales con reactivo desnaturalizante

Trabajos han demostrado la utilidad de la captura híbrida II (CH IIâ) en la detección del virus de papiloma humano de alto riesgo oncogénico (HR-HPV) como método de tamizaje primario para detección de cáncer de cuello uterino, así como las bondades de la PCR que permite acceder a métodos de tipificación viral. Por ello el objetivo fue detectar el genoma del HPV por PCR a partir de muestras de CH IIâ cien veces diluidas. Estudio transversal en 141 muestras cervicales de mujeres con citología normal y anormal que concurrieron al IICS, UNA. Las muestras fueron procesadas por CH IIâ y almacenadas con reactivo desnaturalizante a -80ºC. Luego, las muestras fueron diluidas 100 veces con agua destilada y posteriormente procesadas por PCR. Se detectó HPV en 51% y 43% de las muestras analizadas por CH IIâ y PCR, respectivamente. Diecisiete de 23 muestras positivas por CH IIâ con carga viral relativa baja fueron negativas por PCR. Esto podría deberse a la degradación del material. Además, 6 muestras negativas por CH IIâ fueron positivas por PCR sugiriendo presencia de infección con tipos virales no incluidos en CH IIâ. Estos resultados sugieren que es posible realizar la detección de HPV por PCR en muestras procesadas por CH IIâ previa dilución. Esta propuesta rápida, sencilla y económica, minimiza el riesgo de perder el material genético en la extracción y permite acceder a métodos de tipificación viral que podrían contribuir con datos sobre tipos de HPV circulantes para realizar una vigilancia en la era post-vacunal

Optimización de una técnica de PCR convencional para detección de virus de papiloma humano tipo 16 y 18

El cáncer de cuello uterino es el segundo cáncer femenino más común a nivel mundial. El agente causal es el virus de papiloma humano (VPH). Se han identificado 13 tipos de virus de papiloma humano de alto riesgo oncogénico (VPH-AR), entre los cuales el VPH 16 y VPH 18 son los más frecuentemente detectados en cáncer de cuello uterino, siendo en Paraguay detectados en el 70% de casos de cáncer invasor. Por ello, el objetivo fue estandarizar y determinar el límite de detección de una técnica de PCR convencional para la detección de VPH 16 y 18. Para la detección de ADN de VPH 16 y 18, se observaron mejores resultados con 2mM de MgCl2 y 60°C para la temperatura de alineamiento. El límite de detección para las PCR fue de 14,6x10-11ng/μL para VPH 16 y 21,7x10-12ng/μL para VPH 18. Este trabajo servirá de base a otros estudios de detección e identificación de estos tipos virales por PCR, con miras a identificar un grupo de mujeres positivas para VPH-AR que poseen mayor riesgo de desarrollo de lesión y cáncer de cuello uterino y precisan de un seguimiento más cercano

Detección molecular de infecciones múltiples en mujeres con y sin lesión de cuello uterino positivas para el virus del papiloma humano de alto riesgo, período 2007-2011

El cáncer de cuello uterino, causado por el virus del papiloma humano (HPV), constituye el tercer tipo de cáncer más común en mujeres en el mundo. El objetivo del presente trabajo fue determinar por reacción en cadena de la polimerasa seguida de hibridación reversa, la frecuencia de infecciones múltiples en mujeres positivas para HPV de alto riesgo oncogénico por captura híbrida II, según severidad de la lesión escamosa intraepitelial (SIL), carga viral relativa y edad, en el periodo 2007-2011. Este estudio de corte transverso incluyó 123 mujeres que acudieron al Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, 18 sin lesión (NSIL), 78 con SIL de bajo grado (LSIL) y 27 con SIL de alto grado (HSIL). Se detectaron infecciones múltiples en 37/123 mujeres (30,1%). Las mujeres con NSIL presentaron menor frecuencia de infecciones múltiples (5,6%) que las mujeres con SIL (34,3%) (p=0,03). No se observó aumento de frecuencia de infecciones múltiples con la severidad de la lesión, presentando las mujeres con LSIL un 34,6% y con HSIL, un 33,3%. No fue observada diferencia significativa entre la carga viral relativa de infecciones simples y múltiples, lo cual sugiere que en la infección múltiple podría ser solo uno de los tipos de HPV el que se esté replicando, causando una infección productiva. Además, se observó una alta frecuencia de infecciones múltiples (75%) en mujeres menores a 30 años. Finalmente los resultados sugieren que las infecciones múltiples podrían orientar la presencia de SIL, pero no el grado de severidad de la lesión cervical

Características clínico-demográficas y tipificación del virus de papiloma humano en mujeres paraguayas con citologías negativas para lesión escamosa intraepitelial

Paraguay posee una alta tasa de incidencia de cáncer de cuello uterino de 35/100.0000 mujeres en el año 2008 y el virus de papiloma humano (HPV) es su agente causal. La planificación de medidas de prevención puede ser beneficiada con conocimientos sobre los tipos virales, por ello, el objetivo de este estudio fue determinar características clínico-demográficas y los tipos de HPV presentes en mujeres con citología negativa para lesión escamosa intraepitelial. Estudio de corte transverso con componente analítico en 207 mujeres con citología negativa para lesión escamosa intraepitelial provenientes de centros de salud de Asunción. La tipificación fue realizada por reacción en cadena de la polimerasa utilizando cebadores MY09/11 y GP5/GP6, seguida de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción e hibridación lineal reversa, respectivamente. La asociación entre HPV y las características clínico-demográficas fue determinada por análisis de Chi cuadrado (EpiInfo versión 3,2). Se detectó alta frecuencia de HPV (21%), siendo el tipo predominante HPV 16 (4,3%) seguido de HPV 58/31 (2,4% cada uno). Se observó asociación entre la presencia de HPV y la edad (p=0,0002), detectándose mayor frecuencia de HPV en mujeres menores a 30 años, la cual, disminuyó al aumentar la edad, presentando un ligero aumento en mujeres de 60 años o más. En conclusión, los datos muestran una alta frecuencia de HPV y HPV 16 en mujeres menores a 30 años con citología negativa y sugieren la necesidad de realizar control posteriormente, a fin de identificar las infecciones persistentes que podrían causar lesión de cuello uterino

Optimization of a conventional PCR technique for the amplification of the LCR region and the E6 gene of human papillomavirus type 16

Autor correspondiente: Pamela Mongelós. Universidad Nacional de Asunción, Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Departamento de Salud Pública. San Lorenzo Paraguay. Email: [email protected] cáncer de cuello uterino es el cuarto cáncer más frecuente en mujeres en el mundo y a nivel mundial, el VPH 16 se encuentra presente en aproximadamente el 60% de los casos. A la fecha, las variantes de VPH 16 se clasifican en 4 linajes y 16 sublinajes asociándose algunas variantes con severidad de lesión. La secuenciación de la región LCR y del gen E6 es utilizada para la clasificación de variantes. Por ello, el objetivo fue optimizar 2 PCRs convencionales para detectar la región LCR y una PCR para el gen E6. Para ello, se utilizaron muestras positivas para VPH 16, cebadores específicos para la región LCR y el gen E6. Se probaron las reacciones a diferentes temperaturas de anillamientos. La concentración de MgCl2, dNTP y cebadores fueron determinadas siguiendo las recomendaciones del fabricante de la enzima ADN polimerasa utilizada. Para la amplificación de la región LCR y el gen E6 del VPH 16, se observaron mejores resultados a una temperatura de anillamiento de 57°C y 50°C, respectivamente. La concentración de MgCl2 utilizada en ambas reacciones fue de 1,5mM, la de dNTP 0,2mM y la de cebadores 0,2uM. La optimización de la reacción de PCR permitirá obtener amplicones aptos para secuenciación, a fin de determinar las variantes génicas y posteriormente evaluar funcionalidad y actividad transcripcional que puedan estar relacionadas con la patogénesis cervical.Cervical cancer is the fourth most common cancer in women in the world and worldwide HPV 16 is present in approximately 60% of cases. To date, HPV 16 variants are classified into 4 lineages and 16 sublineages, with some variants being associated with lesion severity. Sequencing of the LCR region and the E6 gene is used for variant classification. Therefore, the objective was to optimize two conventional PCRs to detect the LCR region and one PCR for the E6 gene. For this purpose, HPV 16 positive samples, specific primers for the LCR region and the E6 gene were used. The reactions were tested at different alignment temperatures. The concentration of MgCl2, dNTP, and primers was determined following the recommendations of the manufacturer of the DNA polymerase enzyme used. For amplification of the LCR region and the HPV 16 E6 gene, the best results were observed at an annealing temperature of 57°C and 50°C, respectively. The concentration of MgCl2 used in both reactions was 1.5mM, dNTP 0.2mM and primers 0.2uM. The present optimization will be used to sequence the amplified products to determine the variants and subsequently evaluate the functionality and transcriptional activity in order to relate it to cervical pathogenesis.Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPrograma Paraguayo para el Desarrollo de la Ciencia y Tecnología. Proyectos de investigación y desarroll

Conocimientos, actitudes y prácticas sobre virus de papiloma humano (VPH) y cáncer de cuello uterino en mujeres de 30 y más años de edad, de un barrio ribereño de Asunción, (Bañado Sur). 2012

Introduction: Cervix cancer is a public health problem in Paraguay. Objective: To determine knowledge, attitudes and practices on human papilloma virus (HPV) and uterine cervix cancer in women from 12 Family Health Units (FHU) of the Bañado Sur- Asunción, April-October 2,012 period. Methodology: Descriptive cross-sectional study that used self-administered structured questionnaires. Results: The mean age was 42 years, most of them cohabitated or were married (70%); 65% had elementary and secondary education and 56% was housewife; 83% had medical insurance and 78% heard about uterine cervix cancer, 74% of them in health posts. Only 10% knew HPV and related it to a disease, 90% heard about Papanicolaou test, but only 27% knew what is, 90% showed favorable attitude and 56% favorable practices in relation to the disease prevention. Conclusion: The study provided information on the perception that a population of women from a marginal zone of the capital have in relation to cervical cancer and its main risk factor. This will allow increasing the supply of prevention services for this type of cancer, along with promoting inter-institutional and inter-sectorial work on the prevention and control of this disease in the country.Introducción: El cáncer de cuello uterino es un problema de salud pública en Paraguay. Objetivo: Determinar conocimientos, actitudes y prácticas sobre virus del papiloma humano (VPH) y cáncer de cuello uterino en mujeres de 12 Unidades de Salud Familiar (USF) de Bañado Sur-Asunción, periodo abril-octubre 2012. Metodología: Estudio descriptivo de corte transversal, utilizando cuestionario estructurado autoadministrado. Resultados: La edad promedio de las encuestadas fue 42 años, la mayoría en unión libre o casadas (70%); 65% tienen educación básica y media, 56% son amas de casa. El 83% tienen seguro médico; 78% escuchó hablar sobre cáncer de cuello uterino, 74% de éstas en los centros de salud. El 10% de las encuestadas conoce el VPH y lo relaciona con la enfermedad, 90 % escuchó hablar sobre la prueba de Papanicolaou, el 27 % de ellas sabe en qué consiste; 90% de las mujeres demostró actitud favorable y 56% prácticas favorables respecto a la prevención de la enfermedad. Conclusión: El estudio permite conocer la percepción que tiene una población de mujeres de un barrio marginal de la capital del país, respecto al cáncer de cuello uterino y el principal factor de riesgo que lo produce, a fin de incrementar la prestación de servicios de prevención de este tipo de cáncer, además de propiciar el trabajo interinstitucional e intersectorial en la prevención y control de la enfermedad en el país

Conocimientos, actitudes y prácticas sobre virus de papiloma humano (VPH) y cáncer de cuello uterino en mujeres de 30 y más años de edad, de un barrio ribereño de Asunción, (Bañado Sur). 2012

Introduction: Cervix cancer is a public health problem in Paraguay. Objective: To determine knowledge, attitudes and practices on human papilloma virus (HPV) and uterine cervix cancer in women from 12 Family Health Units (FHU) of the Bañado Sur- Asunción, April-October 2,012 period. Methodology: Descriptive cross-sectional study that used self-administered structured questionnaires. Results: The mean age was 42 years, most of them cohabitated or were married (70%); 65% had elementary and secondary education and 56% was housewife; 83% had medical insurance and 78% heard about uterine cervix cancer, 74% of them in health posts. Only 10% knew HPV and related it to a disease, 90% heard about Papanicolaou test, but only 27% knew what is, 90% showed favorable attitude and 56% favorable practices in relation to the disease prevention. Conclusion: The study provided information on the perception that a population of women from a marginal zone of the capital have in relation to cervical cancer and its main risk factor. This will allow increasing the supply of prevention services for this type of cancer, along with promoting inter-institutional and inter-sectorial work on the prevention and control of this disease in the country.Introducción: El cáncer de cuello uterino es un problema de salud pública en Paraguay. Objetivo: Determinar conocimientos, actitudes y prácticas sobre virus del papiloma humano (VPH) y cáncer de cuello uterino en mujeres de 12 Unidades de Salud Familiar (USF) de Bañado Sur-Asunción, periodo abril-octubre 2012. Metodología: Estudio descriptivo de corte transversal, utilizando cuestionario estructurado autoadministrado. Resultados: La edad promedio de las encuestadas fue 42 años, la mayoría en unión libre o casadas (70%); 65% tienen educación básica y media, 56% son amas de casa. El 83% tienen seguro médico; 78% escuchó hablar sobre cáncer de cuello uterino, 74% de éstas en los centros de salud. El 10% de las encuestadas conoce el VPH y lo relaciona con la enfermedad, 90 % escuchó hablar sobre la prueba de Papanicolaou, el 27 % de ellas sabe en qué consiste; 90% de las mujeres demostró actitud favorable y 56% prácticas favorables respecto a la prevención de la enfermedad. Conclusión: El estudio permite conocer la percepción que tiene una población de mujeres de un barrio marginal de la capital del país, respecto al cáncer de cuello uterino y el principal factor de riesgo que lo produce, a fin de incrementar la prestación de servicios de prevención de este tipo de cáncer, además de propiciar el trabajo interinstitucional e intersectorial en la prevención y control de la enfermedad en el país

Implementing HPV testing in 9 Latin American countries : the laboratory perspective as observed in the ESTAMPA study

Correspondence: Maribel Almonte [email protected] article was submitted to Infectious Diseases - Surveillance, Prevention and Treatment, a section of the journal Frontiers in Medicine.Background: Replacement of cytology screening with HPV testing is recommended and essential for cervical cancer elimination. HPV testing for primary screening was implemented in 12 laboratories within 9 Latin American countries, as part of the ESTAMPA cervical cancer screening study. Our observations provide information on critical operational aspects for HPV testing implementation in diverse resource settings. Methods: We describe the implementation process of HPV testing in ESTAMPA, focusing on laboratory aspects. We assess the readiness of 12 laboratories to start HPV testing and their continuity capacity to maintain good quality HPV testing until end of recruitment or up to December 2021. Readiness was based on a checklist. Information from the study database; regular meetings and monitoring visits; and a questionnaire on laboratory operational aspects sent in May 2020 were used to assess continuity capacity. Compliance with seven basic requirements (readiness) and eight continuity requirements (continuity capacity) was scored (1 = compliant, 0 = not compliant) and totaled to classify readiness and continuity capacity as very limited, limited, moderate or high. Experiences, challenges, and enablers of the implementation process are also described. Results: Seven of 12 laboratories had high readiness, three moderate readiness, and of two laboratories new to HPV testing, one had limited readiness and the other very limited readiness. Two of seven laboratories with high readiness also showed high continuity capacity, one moderate continuity capacity, and the other four showed limited continuity capacity since they could not maintain good quality HPV testing over time. Among three laboratories with moderate readiness, one kept moderate continuity capacity and two reached high continuity capacity. The two laboratories new to HPV testing achieved high continuity capacity. Based on gained expertise, five laboratories have become part of national screening programs. Conclusion: High readiness of laboratories is an essential part of effective implementation of HPV testing. However, high readiness is insufficient to guarantee HPV testing high continuity capacity, for which a "culture of quality" should be established with regular training, robust monitoring and quality assurance systems tailored to local context. All efforts to strengthen HPV laboratories are valuable and crucial to guarantee effective implementation of HPV-based cervical screening.Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPrograma Paraguayo para el Desarrollo de la Ciencia y Tecnología. Proyectos de investigación y desarroll

Epidemiología molecular del virus del papiloma humano detectado en cuello uterino de mujeres indígenas del departamento de Presidente Hayes-Paraguay, Periodo 2010/2011

El Paraguay ocupa el séptimo lugar en incidencia de cáncer de cuello ulterino en las Américas y el Caribe, siendo el virus del papiloma humano (HPV) su agente casual. Considerando que las mujeres indígenas poseen menor acceso a sistemas de salud, inicio temprano de relaciones sexuales, bajo niveles de educación, características que podrían favorecer el desarrollo de lesiones cervicales, el objetivos del presente estudio transversal analítico fue, determinar la frecuencia de tipos de HPV y lesiones de cuello uterino en 181 mujeres indígenas del Departamento de Presidente Hayes-Paraguay, Periodo 2010/2011. Las mujeres pertenecieron a las siguientes etnias: Maká (n=39); Nivaclé (n=18); Sanapaná (n=33); Enxet Sur (n=57) y Toba-Qom (n=34). Los tipos de HPV se detectaron por reacción en cadena de la polimerasa seguida de hibridación reversa y las lesiones de cuello uterino, por citología.CONACYT - Consejo Nacional de Ciencia y TecnologíaPROCIENCI